新疆準(zhǔn)噶爾鐵線蓮不同部位提取液抑菌活性初步研究

古麗巴哈爾·阿巴拜克力

(新疆師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830054)

新疆準(zhǔn)噶爾鐵線蓮不同部位提取液抑菌活性初步研究

古麗巴哈爾·阿巴拜克力

(新疆師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830054)

用水和70%乙醇從準(zhǔn)噶爾鐵線蓮不同部位中提取其活性成分，探討其抑菌作用。結(jié)果表明：葉水提物的MIC值分別為大腸桿菌5g/100mL，金黃色葡萄球菌、短小芽孢桿菌為3g/100mL、枯草桿菌為1g/100mL；葉醇提物的MIC值分別為大腸桿菌3g/100mL，金黃色葡萄球菌、枯草桿菌為0.5g/100mL、短小芽孢桿菌1g/100mL。莖水提物的MIC值分別為大腸桿菌10g/100mL，金黃色葡萄球菌7g/100mL、短小芽孢桿菌、枯草桿菌為5g/100mL。莖醇提物的MIC值分別為大腸桿菌7g/100mL，金黃色葡萄球菌5g/100mL，枯草桿菌、短小芽孢桿菌為3g/100mL。花水提物的MIC值分別為大腸桿菌5g/100mL，金黃色葡萄球菌、枯草桿菌為3g/100mL，短小芽孢桿菌1g/100mL?；ù继嵛锏腗IC值分別為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、短小芽孢桿菌為1g/100mL，枯草桿菌為0.5g/100mL。果實(shí)水提物的MIC值分別為大腸桿菌、短小芽孢桿菌為5g/100mL，金黃色葡萄球菌、枯草桿菌為3g/100mL；果實(shí)醇提物的MIC值分別為大腸桿菌為3g/100mL，金黃色葡萄球菌、短小芽孢桿菌、枯草桿菌為1g/100mL。

準(zhǔn)噶爾鐵線蓮；不同部位；提取物；抑菌活性

準(zhǔn)噶爾鐵線蓮(Clematis songarica Bge.)毛茛科鐵線蓮屬，主要產(chǎn)于我國(guó)新疆、內(nèi)蒙古西部，國(guó)外在蒙古、中亞荒漠地區(qū)也有分布。生長(zhǎng)于荒漠低山麓前洪積扇，石礫質(zhì)沖積堆以及荒漠河岸。直立小灌木，高4 0～120cm。單葉對(duì)生或簇生；花序?yàn)榫蹅慊ㄐ蚧驁A錐狀聚傘花序，頂生；白色或淡黃色，花期6～7月，果期7～8月[1]。

迄今國(guó)內(nèi)外對(duì)準(zhǔn)噶爾鐵線蓮植物化學(xué)成分的研究比較少，有關(guān)其水提液和醇提液抑菌效果的比較研究則尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，采用不同提取方法從準(zhǔn)噶爾鐵線蓮

不同部位中提取有效抗菌成分做抑菌實(shí)驗(yàn)，不僅有望篩選到具有抗菌成分的藥材新資源，也可獲知有效的提取方法。這對(duì)評(píng)價(jià)準(zhǔn)噶爾鐵線蓮的藥用價(jià)值，開(kāi)發(fā)利用這一自然資源具有實(shí)際意義[2]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

準(zhǔn)噶爾鐵線蓮，于2008 年8月采自新疆烏魯木齊縣永豐鄉(xiāng)農(nóng)田田埂。將不同部位晾干、粉碎， 備用。

蛋白胨、瓊脂、 牛肉膏、蔗糖、葡萄糖、乙醇、NaCl、NaOH、HCl。

1.2 菌種與培養(yǎng)基

大腸肝菌(Escherichia coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草桿菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢桿菌(Bacillus pum ilus)、以下分別簡(jiǎn)稱 E.c、S.a、B.s、B.p。以上菌種均由新疆大學(xué)提供。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基[3]。

1.3 方法

1.3.1 不同部位水提取液的制備[4]

分別稱取準(zhǔn)噶爾鐵線蓮葉、莖、花以及果實(shí)各5g，分別加10倍樣量的蒸餾水50mL，90℃浸提3h，然后將樣品趁熱過(guò)濾收集濾液，濾渣中加入25mL蒸餾水同條件提取2.5h，再次過(guò)濾并合并兩次濾液，將濾液置入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至黏稠狀，然后用水溶解并定容至10mL制成水懸濁液，分別獲得0.5g/mL的水提取液。

1.3.2 不同部位醇提取液的制備

分別稱取準(zhǔn)噶爾鐵線蓮葉、莖、花以及果實(shí)各5g，分別按照各自的最佳提取工藝進(jìn)行浸提，然后將樣品趁熱過(guò)濾收集濾液，將濾液置入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至黏稠狀，然后用水溶解并定容至10mL制成水懸濁液，分別獲得0.5g/mL的乙醇提取液。

1.3.3 菌懸液的制備[5]

將各供試菌菌種接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)20～22h活化，然后將斜面活化好的各供試菌體置于裝有9mL無(wú)菌生理鹽水的試管中，振蕩搖勻，再分別稀釋制成含菌量為106～108CFU/mL的菌懸液。

1.3.4 抑菌實(shí)驗(yàn)

1.3.4.1 抑菌效力的測(cè)定[6]

將滅菌過(guò)的培養(yǎng)基制成平板，吸取0.2mL菌懸液均勻涂抹到平板上。將各浸漬過(guò)準(zhǔn)噶爾鐵線蓮葉、莖、花、果實(shí)水提液和醇提液中的濾紙圓片(6mm)風(fēng)干，放到每個(gè)涂有菌液的平板上，等距離放3片，每個(gè)實(shí)驗(yàn)平行3次，并用無(wú)菌水作空白對(duì)照，確定抑菌效果。在37℃條件下培養(yǎng)24h后測(cè)定抑菌圈直徑大小，取平均值。

1.3.4.2 最低抑菌濃度(MIC)的測(cè)定

配制足夠量的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基參照文獻(xiàn)[7]進(jìn)行測(cè)定。以上操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。

3.4.3 最低殺菌濃度(MBC)的測(cè)定

將提取物濃度高于MIC(包括MIC)的各試管或培養(yǎng)皿繼續(xù)培養(yǎng)24h，觀察生長(zhǎng)情況。以仍無(wú)菌生長(zhǎng)的添加量為該提取液的最低殺菌濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 準(zhǔn)噶爾鐵線蓮水提取液和醇提取液對(duì)各供試菌的影響

表 1 準(zhǔn)噶爾鐵線蓮水提取液的抑菌作用Table 1 Antibacterial activity of PWE

由表1可知，準(zhǔn)噶爾鐵線蓮莖、葉、花以及果實(shí)部位水提取液對(duì)4種供試菌株具有不同的抑菌效果。抑菌效果依次為：葉＞花＞果實(shí)＞莖。莖、葉水提取液對(duì)4種菌株的抑菌效果依次為：枯草桿菌 ＞短小芽孢桿菌＞金黃色葡萄球菌＞大腸肝菌?；?、果實(shí)水提取液對(duì)4種菌株的抑菌效果依次為：金黃色葡萄球菌＞枯草桿菌＞短小芽孢桿菌＞大腸肝菌。

表 2 準(zhǔn)噶爾鐵線蓮醇提取液的抑菌作用Table 2 Antibacterial activity of PAE

由表2可知，準(zhǔn)噶爾鐵線蓮不同部位醇提取液對(duì)4種供試菌株的抑菌效果依次為：葉＞花＞果實(shí)＞莖。莖、葉、花、果實(shí)等部位醇提取液對(duì)4種供試菌株的抑菌效果依次為：枯草桿菌＞金黃色葡萄球菌＞短小芽孢桿菌＞大腸肝菌。

2. 2水提取液與醇提取液對(duì)各供試菌的最低抑菌濃度

由表3可知，準(zhǔn)噶爾鐵線蓮葉水提取液對(duì)4種供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為大腸桿菌為5g/100mL，短小芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌3g/100mL，枯草桿菌為1g/100mL。醇提取液抑菌效果較水提取液好，醇提取

液對(duì)4種供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為大腸桿菌為3g/100mL，金黃色葡萄球菌、枯草桿菌為0.5g/100mL，短小芽孢桿菌為1g/100mL。

表3 準(zhǔn)噶爾鐵線蓮葉水提液、醇提液對(duì)各供試菌的最低抑菌濃度Table 3 MICs of PWE and PAE from leaves on different bacteria

表4 準(zhǔn)噶爾鐵線蓮莖水提取液、醇提取液對(duì)各供試菌的最低抑菌濃度Table 4 MICs of PWE and PAE from stems on different bacteria

由表4可知，準(zhǔn)噶爾鐵線蓮莖水提取液對(duì)4種供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為：大腸桿菌為10g/100mL，對(duì)枯草桿菌、短小芽孢桿菌的最低抑菌濃度為5g/100mL，對(duì)金黃色葡萄球菌為7g/100mL。

醇提取液對(duì)4種供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為大腸桿菌7g/100mL，金黃色葡萄球菌5g/100mL，枯草桿菌、短小芽孢桿菌為3g/100mL。

表5 準(zhǔn)噶爾鐵線蓮花水提取液、醇提取液對(duì)各供試菌的最低抑菌濃度(MIC)Table 5 MICs of PWE and PAE from flowers on different bacteria

由表5可知，準(zhǔn)噶爾鐵線蓮花醇提取液抑菌效果較水提取液好。水提取液對(duì)4種供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為大腸桿菌5g/100mL，枯草桿菌、金黃色葡萄球菌為3g/100mL，短小芽孢桿菌為1g/100mL。醇提液對(duì)4種供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為大腸桿菌1g/100mL、金黃色葡萄球菌1g/100mL、短小芽孢桿菌為1g/100mL，枯草桿菌為0.5g/100mL。

表6 準(zhǔn)噶爾鐵線蓮果實(shí)水提取液、醇提取液對(duì)各供試菌的最低抑菌濃度Table 6 MICs of PWE and PAE from fruits on different bacteria

由表6可知，準(zhǔn)噶爾鐵線蓮果實(shí)水提取物對(duì)4種供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為大腸桿菌5g/100mL、短小芽孢桿菌5g/100mL、金黃色葡萄球菌5g/100mL、枯草桿菌3g/100mL。醇提取物對(duì)各供試細(xì)菌的最低抑菌濃度分別為：大腸桿菌為3g/100mL，金黃色葡萄球1g/100mL、枯草桿菌、短小芽孢桿菌為1g/100mL。

3 結(jié) 論

準(zhǔn)噶爾鐵線蓮水提取液和醇提取液都具有不同程度的抑菌活性，其中醇提取液的抑菌效力強(qiáng)，對(duì)球菌和桿菌、革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌都有抑菌活性。醇提取液比水提取液具有更明顯的抑菌效果，這說(shuō)明乙醇更容易將植物體內(nèi)有效抑菌物質(zhì)提取出來(lái)。此實(shí)驗(yàn)證明準(zhǔn)噶爾鐵線蓮提取液對(duì)造成食品腐敗的幾種微生物具有一定的抗性，為其有效成分提取及開(kāi)發(fā)利用提供了參考。對(duì)于其抗菌活性物質(zhì)還有待進(jìn)一步的研究。

[1]新疆植物志編輯委員會(huì). 新疆植物志∶ 2卷[M]. 烏魯木齊∶ 新疆科技衛(wèi)生出版社, 1994.

[2]黃文武. 鐵線蓮屬植物的研究進(jìn)展[J]. 中草藥, 2002, 33(3)∶ 285-288.

[3]沈萍, 范秀容, 李廣武. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M]. 3版. 北京∶ 高等教育出版社, 1999∶ 214-215.

[4]霍光華, 高蔭榆, 陳明輝. 烏柏葉抑菌活性功能成分的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2005, 31(3)∶ 52-56.

[5]嚴(yán)贊開(kāi). 生姜提取物的抑菌試驗(yàn)[J]. 中國(guó)食品添加劑, 2005(1)∶ 74-76.

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Antibacterial Activities of PWE and PAE from Clematis songarica Bge. in Xinjiang

Gulibahaer·ABABAIKELI
(College of Life Science, Xinjiang Normal University, Urumqi 830054, China)

Antibacterial activities of water extract (PWE) a nd alcohol extract (PAE, 70g/100mL ethanol) from Clematis songarica Bge. were evaluated. Results indicated that minimum inhibition concentrations (MICs) of PWE from leaves were 5g/100mL for Echerichia coli, 3g/100mL for Staphylococcus aureus and Bacillus pumilus, and 1g/100mL for Bacillus subtilis. MICs of PAE from leaves were 3g/100mL for Echerichia coli, 0.5 g/100mL for Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis, and 1 g/100mL for Bacillus pumilus. MICs of PWE from stems were 10 g/100mL for Echerichia coli, and 7 g/100mL for Staphylococcus aureus, and 5 g/ 100mL for Bacillus pumilus and Bacillus subtilis. MICs of PAE from stems were 7g/100mL for Echerichia coli, 5 g/100mL for Staphylococcus aureus, and 3 g/100mL for Bacillus subtilis and Bacillus pumilus. MICs of PWE from flowers were 5 g/100mL for Echerichia coli, 3 g/100mL for Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis, and 1g/100mL for Bacillus pumilus. MICs of PAE from flowers were 1 g/100mL for Echerichia coli, Staphylococcus aureus and Bacillus pumilus, and 0.5 g/100mL for Bacillus subtilis. MICs of PWE from fruits were 5 g/100mL for Echerichia coli and Bacillus pumilus, and 3 g/100mL for Staphylococcus aureus and Bacillus subtilis. MICs of PAE from fruits were 3 g/100mL for Echerichia coli, and 1g/100mL for Staphylococcus aureus, Bacillus pumilus and Bacillus subtilis.

Clematis songarica Bge.；different parts；extract；antimicrobial activity

TS201.3

A

1002-6630(2010)09-0117-03

2009-10-29

古麗巴哈爾·阿巴拜克力(1969—)，女，副教授，研究方向?yàn)橹参镉行С煞址治?。E-mail：gvlbahar.a@163.com