美沙拉嗪對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎 NF-κ B和 TGF-β表達(dá)和影響

羅 南,顏 玉

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化一科,黑龍江 佳木斯 154003)

潰瘍性結(jié)腸炎是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病,其病因和發(fā)病機(jī)制仍不清楚,目前大多數(shù)研究認(rèn)為與免疫反應(yīng)的異常,特別是腸黏膜局部免疫反應(yīng)的紊亂有關(guān)[1]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),核因子-κ B與細(xì)胞因子的釋放,促進(jìn)炎癥反應(yīng),導(dǎo)致黏膜損傷發(fā)揮著重要作用。同時(shí)研究證實(shí)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β在多種組織細(xì)胞的增殖分化、間質(zhì)形成、組織損傷修復(fù)、骨質(zhì)再生、胚胎發(fā)生中起著關(guān)鍵作用[2]。隨著潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病率逐年上升,臨床上多采用柳氮磺胺吡啶(SASP)治療,雖有一定療效但部分患者因?qū)前奉?lèi)藥物過(guò)敏而不能耐受。美沙拉嗪是一種新型5-氨基水楊酸控制劑,國(guó)外臨床試驗(yàn)表明其對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎具有良好的療效而沒(méi)有明顯的副反應(yīng)。本研究采用免疫組化法觀察 N F-κ B和 TGF-β在潰瘍性結(jié)腸炎中的表達(dá)情況及美沙拉嗪對(duì) N F-κB和 TGF-β的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型的制備

選用佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的健康 Wistar大鼠30只,雌雄各半,體重270～ 330g,將大鼠隨機(jī)分為正常組 ,模型組,給藥組。將30只大鼠禁食不禁水 48h,用乙醚淺麻醉后放置于固定器中,用5%乙酸1.0mL緩慢注入肛門(mén)內(nèi)約8cm處,將大鼠倒置 10s后用4mL生理鹽水沖洗。正常喂養(yǎng) 7d后處死,剖開(kāi)腹部,取結(jié)腸組織,分別用蒸餾水和生理鹽水沖洗,沿腸系膜剪開(kāi),取潰瘍組織至于 10%甲醛中固定。

1.2 病理學(xué)免疫組化學(xué)檢測(cè)

將標(biāo)本常規(guī)梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片厚度5 μm,粘于多聚賴(lài)氨酸處理后的切片上,染色步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。陰性對(duì)照切片不加一抗,用0.1mmol/LPBS代替,不出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng),說(shuō)明一抗特異性強(qiáng)。在40×10倍光鏡下隨機(jī)選擇 6個(gè)視野,做免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù),實(shí)驗(yàn)中使用兔抗鼠 NF-κ B和 TGF-β均購(gòu)自北京博奧森生物有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

給藥組 NF-B的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率 (26.917±8.309),明顯低于模型組 (34.524± 7.815),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);模型組和給藥組 NF-B的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率(26.917± 8.309,34.524± 7.815)明顯高于正常對(duì)照組(9.395±2.722),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);給藥組TGF的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率 (21.4±4.079)與模型組(22.5±4.419)無(wú)顯著性差別 (P＞ 0.05)。

3 討論

目前對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制普遍認(rèn)為主要由免疫反應(yīng)介導(dǎo),并與遺傳、感染、環(huán)境因素等密切相關(guān)的慢性炎性疾病,其中細(xì)胞因子在 UC的發(fā)病中起著重要的作用。研究顯示 ,核因子-κ B(NF-κB)調(diào)控細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄和釋放,并且細(xì)胞因子分泌的增加與 NF-κB的表達(dá)增加也有關(guān),從而引起炎癥反應(yīng)。TGF-β參與免疫細(xì)胞的生成、分化,調(diào)節(jié)功能。它可抑制 T細(xì)胞、B細(xì)胞、胰腺細(xì)胞、LAK、NK等細(xì)胞的增殖及 CTL的產(chǎn)生,拮抗白介素家族如 IL-1、IL-2、IL-3等及 TNF、INF等因子的免疫調(diào)節(jié)作用。同時(shí),TGF-β它可激活單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞,滅活或抑制巨噬細(xì)胞釋放的H2O2的作用,協(xié)助生長(zhǎng)因子在組織修復(fù)中的作用。TGF-β還有促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成的作用,激活纖連蛋白、膠原蛋白Ⅰ、Ⅱ、V、Ⅵ等的合成與分泌;直接促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì),并對(duì)新合成的細(xì)胞外基質(zhì)的降解有顯著的抑制作用。美沙拉嗪為近年研制的一種新型5-ASA,為 PH依賴(lài)性緩解劑型,通過(guò)上消化道及小腸而以有效濃度到達(dá)遠(yuǎn)端腸管,可定向在回腸末 端及結(jié)腸釋出。新近研究5-ASA顯示,清除氧自由基,抑制腸黏膜的脂肪酸氧化,降低腸上皮通透性,減輕腸道炎癥。同時(shí)阻止或延遲 N F-KB抑制蛋白磷酸化降解過(guò)程,使 N F-KB不能發(fā)生核易位,從而抑制 N FKB的活性,達(dá)到控制炎癥發(fā)生的效果。本研究結(jié)果顯示,美沙拉嗪治療潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的 NF-KB表達(dá)率明顯下降,這說(shuō)明美沙拉嗪抑制了 NF-KB的活性,使炎性反應(yīng)得到控制。而美沙拉嗪對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的 TGF表達(dá)沒(méi)有明顯影響,因此該藥對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的腸黏膜修復(fù)作用有待于進(jìn)一步的研究與探索。

[1] Schreibers,Raedler A,Stenson WF,et al.The role of mucosal immune system in inflammatory bowel disease[J].Gastroenterol Clin North Am,1992,21:451-502

[2] 施渭康.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子[J].細(xì)胞生物學(xué)雜志,1992,2(14):49-53