吳金生,劉偉光,欒志敏,祝增軍

(濰坊醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院,山東濰坊 261031)

膀胱移行細(xì)胞癌(BTCC)是尿路上皮最常見(jiàn)的腫瘤,術(shù)后復(fù)發(fā)率高,而且復(fù)發(fā)者伴有惡性程度增加和向浸潤(rùn)型發(fā)展的傾向。近年研究表明,細(xì)胞周期細(xì)胞角蛋白 19(CK19)與其發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有著重要的關(guān)系?？p隙連接蛋白 26(CX26)是尿路上皮細(xì)胞表達(dá)的主要縫隙連接蛋白,具有顯著抑癌作用。2007年 5月 ～2009年 10月,我們采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)了 BTCC組織中 CX26、CK19蛋白的表達(dá)變化,并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 BTCC患者 40例,男 33例、女 7例,年齡 33.5～77.5歲；癌組織分化程度為高分化 12例,中分化 23例,低分化 5例；TNM分期 T1期 10例,T2期 21例,T3期 8例,T4期 1例；有淋巴轉(zhuǎn)移 7例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 33例；患者均經(jīng)病理確診,術(shù)前未行放化療,術(shù)中切除膀胱腫瘤組織。另收集 10例正常膀胱組織標(biāo)本作為對(duì)照,取自膀胱結(jié)石及前列腺增生癥開(kāi)放手術(shù)的患者。標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí),10%甲醛固定,石蠟包埋,5μm連續(xù)切片。

1.2 CX26、CK19蛋白檢測(cè)方法 采用免疫組化SABC法檢測(cè),嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操做,以 PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。采用雙盲法對(duì)每張切片在高倍鏡(×400)下計(jì)數(shù) 5個(gè)視野,CX26蛋白高表達(dá)于所有正常上皮組織,主要定位于細(xì)胞膜且分布均勻,陽(yáng)性細(xì)胞細(xì)胞膜呈淡黃色；CK19主要分布于膀胱移行上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜中,陽(yáng)性細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色。根據(jù)染色強(qiáng)度計(jì)分:0分為無(wú)染色顆粒,1分為有黃染的細(xì)小顆粒,2分為有較多的黃色顆粒,3分為有粗大的棕黃色顆粒。陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分:0分為無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞；1分為 1%～25%；2分為 26%～50%；3分為 51%～100%。以兩項(xiàng)相加得分 ＞2分為陽(yáng)性,≤2分為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件。兩樣本率的比較采用 χ2檢驗(yàn),相關(guān)關(guān)系采用 Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CX26、CK19蛋白的表達(dá) BTCC組織中CX26、CK19的陽(yáng)性率分別為 35.0%、77.5%,正常膀胱組織中分別為 90.0%、45.0%,兩者相比,P均＜0.05。

2.2 CX26、CK19蛋白表達(dá)與 BTCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見(jiàn)表1。由表可見(jiàn),BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達(dá)均與癌組織分化程度有關(guān)(P＜0.05),與年齡、臨床分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P均 ＞0.05)。

表1 CX 26、CK 19蛋白表達(dá)與 BTCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達(dá)的關(guān)系BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.319,P＜0.05)

3 討論

腫瘤的發(fā)生從生物學(xué)角度看主要表現(xiàn)為兩方面,一方面是腫瘤細(xì)胞凋亡障礙,另一方面是細(xì)胞異常增殖,即細(xì)胞周期調(diào)控蛋白的失調(diào)可能是腫瘤發(fā)生的原因之一。

細(xì)胞間隙連接(GJ)是位于相鄰細(xì)胞間的膜通道結(jié)構(gòu),由細(xì)胞質(zhì)膜上的連接子相互銜接而成。連接子圍繞中央親水小管呈環(huán)形排列,構(gòu)成這種亞單位的蛋白質(zhì)稱為細(xì)胞縫隙連接蛋白(CX)。縫隙連接作為細(xì)胞交換的通道,能夠在細(xì)胞間直接傳遞離子和相對(duì)分子質(zhì)量小于 1 kD的分子,包括細(xì)胞內(nèi)的代謝產(chǎn)物、第二信使 cAMP、cGMP、1,4,5-三磷酸肌醇以及氨基酸、核苷酸等。惡性腫瘤細(xì)胞間往往縫隙連接減少,使細(xì)胞間失去生長(zhǎng)調(diào)控。CX26是 CX家族的重要成員,可直接影響細(xì)胞間的連接通訊,具有顯著抑癌作用。有學(xué)者[1]研究發(fā)現(xiàn),CX26與喉癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,與臨床分期、病理分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),與臨床分型無(wú)關(guān)。周莉等[2]發(fā)現(xiàn),CX26在乳腺癌組織中的陽(yáng)性率低于癌旁正常組織,表明 CX26陽(yáng)性表達(dá)使乳腺癌患者死亡率變小,與預(yù)后相關(guān)。由于 CX26是膀胱移行上皮細(xì)胞主要表達(dá)的連接蛋白,在促進(jìn)細(xì)胞分化成熟、維持細(xì)胞間協(xié)調(diào)穩(wěn)定、抑制腫瘤生長(zhǎng)等方面起重要作用。Gee等[3]研究發(fā)現(xiàn),在正常膀胱上皮 CX26基因有一定量的表達(dá),而在癌組織中 CX26基因表達(dá)明顯降低,且惡性程度高的膀胱癌組織中 CX26陽(yáng)性率較惡性程度低者明顯低。本研究結(jié)果顯示,BTCC組織中CX26表達(dá)隨著癌組織惡性程度增高表達(dá)逐漸減弱。在腫瘤的早期,如表淺的非浸潤(rùn)癌中 CX26就有明顯降低,提示 CX26改變是膀胱癌發(fā)生的早期事件之一,有可能作為腫瘤早期診斷的一個(gè)新指標(biāo)。

CK是一類由細(xì)胞角蛋白基因編碼的水溶性聚合多肽,相對(duì)分子質(zhì)量為 40～68 kDa,是上皮細(xì)胞在發(fā)生、分化、成熟過(guò)程中逐漸形成的,分布于大多數(shù)上皮和間皮細(xì)胞源性的細(xì)胞中,構(gòu)成哺乳類動(dòng)物上皮和間皮細(xì)胞源性細(xì)胞的細(xì)胞骨架。CK19是一種相對(duì)分子質(zhì)量為 40 000的酸性蛋白質(zhì),等電點(diǎn)為5.2,基因定位于 17q21.2,是 CK家族中最小的成員。CK19在各種腺上皮和腺上皮起源的惡性腫瘤中均有表達(dá),但在正常外周血、骨髓組織、淋巴結(jié)中不表達(dá),且在上皮腫瘤組織中表達(dá)穩(wěn)定[4]。有研究表明,CK19的表達(dá)與鼻咽癌、胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān),CK19與乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān),還可以作為診斷口腔鱗癌分化程度的指標(biāo)[5～8]。章慧平等[9]研究發(fā)現(xiàn),CK19在膀胱癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織,提示 CK19與膀胱癌的發(fā)生有關(guān),可作為膀胱癌的一個(gè)新的腫瘤標(biāo)記物。張忠英等[10]采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測(cè)尿 CK19片段,認(rèn)為其在膀胱癌等泌尿系腫瘤的診斷和復(fù)發(fā)檢測(cè)中具有敏感性高、無(wú)創(chuàng)傷的優(yōu)點(diǎn),優(yōu)于血清 CK19和尿細(xì)胞學(xué)檢查,并可降低急性尿路感染患者的假陽(yáng)性率。本研究結(jié)果顯示,CK19的表達(dá)強(qiáng)度與病理分級(jí)呈正相關(guān) ,隨著B(niǎo)TCC惡性化程度增高表達(dá)逐漸增強(qiáng)。在腫瘤的晚期,如浸潤(rùn)癌中表達(dá)有明顯增強(qiáng),說(shuō)明 CK19改變是膀胱癌晚期的表現(xiàn)。

本研究還發(fā)現(xiàn),BTCC組織中 CX26、CK19蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。隨腫瘤分級(jí)增加,CX26表達(dá)下降,而 CK19表達(dá)增強(qiáng),說(shuō)明膀胱癌組織中 CX26基因失活可能促使 CK19基因發(fā)生作用,使細(xì)胞凋亡減少,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生發(fā)展,為膀胱腫瘤早期診斷及預(yù)后判斷提供依據(jù)。

[1]肖自安,張?jiān)撇?謝鼎華.抑癌基因 CX26在喉鱗狀癌中的表達(dá)及臨床意義[J].臨床耳鼻喉頭頸外科雜志,2008,22(24):1107-1110.

[2]周莉,王曉玲,王永軍.乳腺癌中間隙連接蛋白 CX43、CX26的表達(dá)及其預(yù)后意義[J].癌變畸變突變,2004,17(5):291-294.

[3]Gee J,Tanaka M,Grossman HB.Connexin 26 is abnormally cxpressed in bladder cancer[J].J Urol,2003,169(5):1135-1137.

[4]Jung R,Kruger W,Hosch C,et al.Sprcification of transcriptase polymerase chain reaction assays designed for the detection of circulating cancer cells is influenced by cytokertins in vitro and in vitro[J].Br J Cancer,1998,7(8):1194-1198.

[5]Lin JC,Chen KY,Wang WY,et al.Evaluation of cytok-eratin 19 mRNA as a tumor marker in the peripheralblood of nasopharyngeal carcinoma patients receiving con-current chemoradiotherapy[J].Int JCancer,2002,97(4):548-553.

[6]Lee E,Chae Y,Kim I,et al.Prognostic relevance of im-munohistochemically detected lymph node micrometasta-sis in patients with gastric carcinoma[J].Cancer,2002,94(11):2867-2873.

[7]Benoy IH,Elst H,Van Der Auwera I,et al.Real-time RT-PCR correlates with immunocy to chemistry for the detection of disseminated epithelial cells in bone marro was pirates of patients with breast cancer[J].Br JCancer,2004,91(10):1813-1820.

[8]王琰珉,何慶泗,孫國(guó)瑞,等.CK19和 CK20在胃癌患者橫結(jié)腸系膜前葉中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展,2009,12(1):39-41.

[9]章慧平,楊為民,葉章群,等.細(xì)胞角蛋白 19預(yù)測(cè)膀胱移行細(xì)胞癌復(fù)發(fā)的臨床意義[J].臨床泌尿外科雜志,2005,20(2):77-78.

[10]張忠英,林永志,葉輝銘,等.電化學(xué)發(fā)光免疫分析脊髓檢測(cè)尿CK19片段的臨床應(yīng)用及其評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(1):50-53.