氯胺磷與井岡霉素對草坪褐斑病菌聯(lián)合毒力測定

吳引超，王 喬，韓新才，李 堅

(武漢工程大學綠色化工過程省部共建教育部重點實驗室，湖北 武漢 430074)

0 引 言

草坪是城市綠化中的重要內(nèi)容，隨著草坪面積的逐漸擴大和成坪時間的延長，草坪病害的危害越來越突出.在草坪病害中，草坪褐斑病(Rhizoctoniasolani)發(fā)生普遍且危害嚴重.草坪褐斑病病原菌主要侵染草坪草根系葉片，從4、5月份開始發(fā)生，在雨水多的季節(jié)，該病菌絲擴展蔓延很快，造成草坪植株死亡，使草坪形成大面積禿斑，極大地破壞草坪景觀[1-2].

我國由于草坪業(yè)發(fā)展較晚，對草坪病害的研究起步較晚，資料少且不系統(tǒng)，防治技術(shù)較單一，防治效果不理想[3].在草坪業(yè)生產(chǎn)實踐上，開發(fā)生產(chǎn)使用防治效果好、安全、無公害的新型農(nóng)藥，顯得極為迫切.本實驗選用殺蟲劑氯胺磷與殺菌劑井岡霉素以不同的比例混配，測定其單劑、混劑對草坪褐斑病的毒力，并篩選出最佳增效配比，為草坪褐斑病的防治提供一定的理論依據(jù).

1 實驗部分

1.1 供試材料

質(zhì)量分數(shù)為85%氯胺磷原藥(85% chloramine phosphorus TC)，由武漢工程大學化工與制藥學院提供；質(zhì)量分數(shù)為5%井岡霉素水劑(5% Jinggangmycin AS)，由武漢科諾生物農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)；草坪褐斑病菌(RhizoctoniasolaniAG-1-IB fusion group)，由華中農(nóng)業(yè)大學植物科技學院黃俊斌教授提供；實驗所用培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基.

1.2 實驗方法

將質(zhì)量分數(shù)為85%氯胺磷TC和質(zhì)量分數(shù)為5%井岡霉素AS分別配制成母液，氯胺磷和井岡霉素對草坪褐斑病病菌的毒力測定實驗分別設置5個不同濃度梯度，測出氯胺磷的EC50值和井岡霉素的EC50值.將氯胺磷與井岡霉素設置4∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶4共5個混配比，每個配比設置5個不同濃度梯度，分別測出其配比的EC50值.

室內(nèi)菌絲抑菌率的測定實驗采用菌落直徑法[4].在無菌操作臺上用移液槍吸取1 mL配制好的各個濃度藥液(以無菌蒸餾水為對照)加到直徑為7.5 cm的培養(yǎng)皿中，然后用無菌玻璃注射器注入9 mL融化后約60 ℃的PDA培養(yǎng)基，使藥液與培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿中混勻，室溫冷卻，再在培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)基正中間位置接種5 mm的草坪褐斑病菌塊，每個處理3個重復.接種后的培養(yǎng)皿倒放在28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30～40 h，待對照接近長滿培養(yǎng)皿，用尺測量菌落直徑，每個培養(yǎng)皿重復十字交叉測量3次，取其平均值，最后計算藥劑的菌絲抑菌率[4].

菌絲抑菌率(%)

1.3 毒力評價

以藥劑的濃度對數(shù)值為自變量x，以菌絲的抑菌率機率值為因變量y，計算出毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)R，根據(jù)回歸方程求出EC50值，并計算出EC(th)50值，得出不同配比混劑的增效系數(shù)SR[5].

混劑的理論EC(th)50=

式中：A代表氯胺磷，B代表井岡霉素，a，b分別代表氯胺磷和井岡霉素的混配比例.

最后根據(jù)增效系數(shù)作出聯(lián)合作用綜合評價：當SR大于1.5時，為增效作用；介于0.5～1.5之間時，為相加作用；小于0.5時，則為拮抗作用.

2 結(jié)果與分析

2.1 氯胺磷和井岡霉素對草坪褐斑病菌的生長抑制作用

表1中，質(zhì)量分數(shù)85%氯胺磷TC在51.2～2 000.0 μg/mL濃度區(qū)間內(nèi),其抑菌率為7.0%～79.3%，抑菌率隨濃度的上升而增大，回歸方程為y=1.274 9x+1.568 6，相關(guān)系數(shù)為0.963 4，EC50為476.7 μg/mL，95%置信區(qū)間為243.8～931.9 μg/mL；5%井岡霉素AS在4.9～20 000.0 μg/mL濃度區(qū)間內(nèi),其抑菌率為14.5%～80.4%，抑菌率隨濃度的上升而增大，回歸方程為y=0.519 1x+3.603 8，相關(guān)系數(shù)為0.998 7，EC50為488.6 μg/mL，95%置信區(qū)間為369.1～646.9 μg/mL.因質(zhì)量分數(shù)85%氯胺磷TC的EC50為476.7 μg/mL小于質(zhì)量分數(shù)5%井岡霉素ASEC50488.6 μg/mL，因此，85%氯胺磷TC對草坪褐斑病菌的毒力略高于質(zhì)量分數(shù)5%井岡霉素AS.

表1 氯胺磷和井岡霉素單劑對草坪褐斑病菌的生長抑制作用

2.2 氯胺磷與井岡霉素不同配比對草坪褐斑病菌聯(lián)合毒力

表2 氯胺磷與井岡霉素不同配比的混劑對草坪褐斑病菌的聯(lián)合毒力

表2為氯胺磷與井岡霉素聯(lián)合毒力結(jié)果，從中看到各配比均有較高的相關(guān)系數(shù)，質(zhì)量分數(shù)為85%氯胺磷TC與質(zhì)量分數(shù)為5%井岡霉素AS以4∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶4混配時的增效系數(shù)(SR)分別為0.54，1.74，0.93，1.19，0.55.其中,4∶1，1∶1，1∶4三個配比的SR介于0.5～1.5之間，表現(xiàn)為相加作用；2∶1配比SR大于1.5，表現(xiàn)為增效作用.

實驗結(jié)果還表明，氯胺磷與井岡霉素混配，隨著井岡霉素含量的減少，即配比增加，混配比例由1∶4到2∶1時，其增效系數(shù)逐漸增加，由0.55增加為1.74，其中，配比為2∶1時，SR值最大，達1.74.而配比為4∶1時，SR值為0.54，顯著下降，說明氯胺磷與井岡霉素以2∶1比例的混配，為具有最佳增效作用的混配比例.

3 結(jié) 語

為了有效的防治草坪褐斑病，國內(nèi)研究者對草坪褐斑病進行了許多不同的藥劑毒力測定和篩選[6-7],這些藥劑主要是傳統(tǒng)的殺菌劑品種，而且，實驗結(jié)果相互之間還存在一定的差異，并沒有獲得能有效防治草坪褐斑病的新型藥劑.井岡霉素是一種生物農(nóng)藥，與環(huán)境相容，環(huán)保無公害，主要用于防治水稻紋枯病[8]；化學農(nóng)藥氯胺磷，原本作為殺蟲劑獲得了國家發(fā)明專利[9]，主要用于防治水稻、棉花等作物害蟲，因其對水稻紋枯病具有殺菌活性和防效，2008年也獲得國家發(fā)明專利授權(quán)[10].據(jù)韓新才等[11]研究報道，生物農(nóng)藥井岡霉素和化學農(nóng)藥氯胺磷對草坪褐斑病菌均有一定的殺菌活性，具有一定的研究開發(fā)價值，但氯胺磷的殺菌活性要遠低于傳統(tǒng)的化學殺菌劑.將化學農(nóng)藥氯胺磷與生物農(nóng)藥井岡霉素混配聯(lián)合使用，如果具有聯(lián)合增效作用，氯胺磷在防治害蟲的同時，可以顯著增加井岡霉素對草坪褐斑病的防治效果，則具有重要的理論意義和實踐意義.

有關(guān)氯胺磷與井岡霉素混配聯(lián)合增效研究的報道較少,李喜書等[12]研究了氯胺磷與井岡霉素對水稻紋枯病菌的聯(lián)合毒力與混配增效作用,而氯胺磷與井岡霉素對草坪褐斑病菌聯(lián)合毒力與增效作用研究,未見報道.本實驗研究了氯胺磷與井岡霉素對草坪褐斑病菌AG-1-IB融合群的聯(lián)合毒力，結(jié)果表明,化學農(nóng)藥85%氯胺磷TC與生物農(nóng)藥5%井岡霉素AS,以2∶1混配，對草坪褐斑病菌具有顯著的增效作用，這一研究結(jié)果為防治草坪褐斑病農(nóng)藥新品種的開發(fā)提供了重要的科學依據(jù)，這兩種農(nóng)藥在防治草坪褐斑病的實際應用中使用，不僅可以顯著提高農(nóng)藥的防治效果，減少用藥量，降低防治成本，而且，生物農(nóng)藥與化學農(nóng)藥混配聯(lián)合使用，可以降低化學農(nóng)藥用量，環(huán)保無公害，具有重要的環(huán)保價值.本研究結(jié)果為氯胺磷與井岡霉素混配新型殺菌劑品種開發(fā)提供了一定的理論依據(jù)，其混配聯(lián)合增效機理、作用方式及田間試驗有待進一步研究.

參考文獻：

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