李長生 楊曉妮 賀 仆 劉世青 林梅青

(山東省千佛山醫(yī)院,山東 濟(jì)南 250014)

血管性癡呆(VD)是因腦血管疾病所致的智能及認(rèn)知功能障礙的臨床綜合征〔1〕,是老年人多發(fā)病和疑難病,給社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān),因此探討其發(fā)病原因和機(jī)制,研究開發(fā)治療該病的新藥具有十分重要的意義。隨著對(duì) VD研究的不斷深入,人們認(rèn)識(shí)到性激素與VD關(guān)系密切,性激素水平與VD的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系。本研究采用改良 Pulsinelli四血管阻斷(4-VO)法制造 VD大鼠模型,觀察首烏益智膠囊對(duì) VD大鼠的療效,并通過性激素水平的變化,進(jìn)一步探討首烏益智膠囊對(duì) VD的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar健康老齡大鼠 120只(月齡 ＞15個(gè)月),雌雄各半,體重 300～400 g。山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):010281。

1.1.2 藥物與試劑 首烏益智膠囊(藥物組成:制何首烏、黃芪、丹參、川芎、益智仁、天麻、水蛭等)由濟(jì)南鋼鐵職工醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。腦復(fù)康片由濟(jì)南東風(fēng)制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)0307043)。碘〔125I〕-人血清睪酮 (T)放射免疫藥盒、碘 〔125I〕-雌二醇(E2)放射免疫藥盒、碘〔125I〕-孕酮(P)放射免疫藥盒,均購于北京北免東雅生物技術(shù)研究所。

1.2 方法

1.2.1 迷宮學(xué)習(xí)訓(xùn)練 大鼠購進(jìn),室溫 20～24℃,相對(duì)濕度45～55%,飼養(yǎng) 1 w后,Morris水迷宮法進(jìn)行大鼠行為學(xué)訓(xùn)練。方法:定位航行試驗(yàn),每天下午 4次,將受試大鼠按順時(shí)鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄 2 min內(nèi)找到平臺(tái)的時(shí)間(逃避潛伏期)。共學(xué)習(xí) 6d。

1.2.2 VD大鼠模型的制備 用改良 Pulsinelli4-VO法制造VD大鼠模型〔2,3〕。大鼠于術(shù)前禁食 12 h,不禁水。0.4%戊巴比妥鈉,0.16g/kg腹腔麻醉,將大鼠俯臥固定,行背側(cè)頸正中切口,逐層鈍性分離,暴露雙側(cè)第 1頸椎橫突翼小孔,用直徑約

0.5 mm的電凝針灼燒雙側(cè)翼小孔內(nèi)的椎動(dòng)脈,造成永久性閉塞,再將大鼠仰臥固定,行腹側(cè)頸正中切口,鈍性分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈,以“4”號(hào)絲線穿線備用。24 h后,用微動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈5 min,間隔 1 h后再夾閉 5 min,共夾閉 3次,局部傷口縫合前,以慶大霉素局部噴灑處理防止感染,術(shù)后3d給予青霉素 2 U/kg肌肉注射抗感染。假手術(shù)組步驟同上,不做缺血處理。

1.2.3 造模后水迷宮測(cè)試 造模術(shù)后 7 d,對(duì)大鼠進(jìn)行水迷宮測(cè)試。定位航行試驗(yàn):歷時(shí) 6 d,每天下午 4次,將受試大鼠按順時(shí)鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄2 min內(nèi)找到平臺(tái)的時(shí)間。前 5 d學(xué)習(xí),第 6天測(cè)試,記錄測(cè)試成績?？臻g探索試驗(yàn):第 6天下午定位航行試驗(yàn)后撤除平臺(tái),將大鼠從任意一點(diǎn)放入水中,拍攝游泳過程 1 min,分析循行路徑,統(tǒng)計(jì)其在原平臺(tái)所在象限內(nèi)外循行路徑之比,和在該象限內(nèi)外停留的時(shí)間之比,統(tǒng)計(jì)跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)。

1.2.4 分組 按術(shù)后水迷宮定位航行測(cè)試成績,隨機(jī)分組。將 VD模型大鼠分為首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組、鹽水組,每組16只(雌雄各 8只)。并設(shè)假手術(shù)組 10只(雌雄各 5只)。

1.2.5 藥物干預(yù) 術(shù)后 7 d,給大鼠用灌胃器灌胃,每天下午灌一次,共灌胃 20 d。灌胃液體溫度為 20℃。首烏益智膠囊組,首烏益智靈溶液灌胃,每次5 ml,含藥量 0.24 g。鹽水組,生理鹽水灌胃,每次5ml。腦復(fù)康組,腦復(fù)康溶液灌胃,每次5 ml,含藥量 0.06 g。假手術(shù)組,生理鹽水灌胃,每次 5 ml。

1.2.6 用藥后迷宮測(cè)試 用藥 20 d后,對(duì)大鼠進(jìn)行水迷宮測(cè)試。方法同造模后水迷宮測(cè)試。迷宮后 3 d,頸靜脈取血測(cè)性激素。

1.3 性激素的測(cè)定 E2、P、T三個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目均采用放射免疫分析方法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)以x±s表示,應(yīng)用 SPSS11.5軟件,組內(nèi)數(shù)據(jù)比較用 t檢驗(yàn),組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠造模后定位航行試驗(yàn)結(jié)果 造模后假手術(shù)組大鼠的逃避潛伏期為(2.26±0.55)s,明顯小于鹽水組(6.45±0.39)s、腦復(fù)康組(6.42±0.44)s、首烏益智膠囊組(6.55±0.48)s,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),鹽水組、首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組間大鼠的逃避潛伏期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),表明 VD模型成功。

2.2 各組大鼠用藥前后定位航行試驗(yàn)及空間探索試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果 用藥后組內(nèi)比較,首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后逃避潛伏期明顯小于治療前(P＜0.01);首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后在原平臺(tái)象限內(nèi)的游泳距離和時(shí)間及跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)均較治療前明顯改善(P＜0.05,P＜0.01);用藥后組間比較,首烏益智膠囊組大鼠的逃避潛伏期明顯小于腦復(fù)康組和鹽水組(P＜0.01,P＜0.05),低于假手術(shù)組(P＜0.01);首烏益智膠囊組大鼠在原平臺(tái)所在象限內(nèi)的循行路徑和停留時(shí)間及跨越原平臺(tái)位置的次數(shù)均好于腦復(fù)康組、鹽水組,低于假手術(shù)組(P＜0.01)(見表 1)。

2.3 各組VD模型大鼠用藥前后性激素水平變化 VD模型雌鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后E2、P水平明顯高于治療前(P＜0.05),VD模型雄鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后 E2水平明顯低于治療前(P＜0.05),T水平明顯高于治療前(P＜0.05)。首烏益智膠囊組雌鼠 E2、P水平明顯高于腦復(fù)康組、鹽水組(P＜0.05),首烏益智膠囊組雄鼠 E2水平明顯低于腦復(fù)康組、鹽水組,而T水平明顯高于腦復(fù)康組、鹽水組(P＜0.05),見表 2。

表1 用藥前后定位航行成績及空間探索成績分析(x±s)

表2 VAD模型大鼠用藥后性激素水平比較(x±s)

3 討 論

研究表明,VD的病理機(jī)制主要有腦梗死、小血管疾病、白質(zhì)損傷、神經(jīng)元損傷幾方面;其分子機(jī)制主要有級(jí)聯(lián)反應(yīng)、興奮性毒性、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等〔4〕。VD的發(fā)病機(jī)制目前還不完全清楚,隨著對(duì) VD研究的不斷深入,人們認(rèn)識(shí)到性激素與 VD關(guān)系密切。近年來研究發(fā)現(xiàn) VD時(shí)血漿性激素水平發(fā)生變化,出現(xiàn)性激素水平失衡,認(rèn)知功能的減退與性激素水平的下降成正相關(guān),提示性激素水平與 VD的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系。性激素對(duì) VD發(fā)揮作用主要通過擴(kuò)血管增加腦血流、促進(jìn)葡萄糖代謝、促進(jìn)乙酰膽堿合成和釋放、降血脂、改善血液流變學(xué)以及減少興奮性氨基酸毒性、抗氧自由基〔5,6〕等幾個(gè)方面發(fā)揮作用,改善癥狀。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明:首烏益智膠囊能升高 VD模型雌鼠體內(nèi) E2、P水平,降低 VD模型雄鼠體內(nèi) E2水平,升高T水平,從而調(diào)節(jié)VD模型大鼠體內(nèi)性激素水平的失衡。

VD屬中醫(yī)“呆病”范疇,本病病位在腦,與肝、腎、心、脾等臟密切相關(guān),我們以傳統(tǒng)中醫(yī)理論為指導(dǎo),根據(jù)多年來的臨床經(jīng)驗(yàn),提出腎精虧虛、淤血阻絡(luò)是 VD的基本病機(jī),確立了補(bǔ)腎健腦、化淤通竅的基本治法,經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn),組方不斷加減,制成首烏益智膠囊。本方以何首烏為君藥,苦、甘、澀、溫、不寒不燥,專入肝腎,養(yǎng)陰益精,補(bǔ)腎健腦,養(yǎng)血益肝。黃芪氣味俱輕,具有升發(fā)之性,功專補(bǔ)氣升陽,為補(bǔ)氣藥之最,益智仁辛溫氣香,既能溫補(bǔ)腎陽,收斂固精,縮小便,又能溫胃逐寒,暖脾攝涎唾。二藥為輔藥鼓舞腎氣以生精,助陽以化陰。銀杏葉、水蛭、天麻共為佐藥,與主藥、輔藥共達(dá)益氣活血、化瘀通絡(luò)、推陳致新、填精益腦、開竅聰智之功。川芎為使藥,辛溫香竄,走而不守,為血中之氣藥,與黃芪相輔相成、益氣活血、安神醒腦,可帶諸藥到達(dá)病所。全方配伍共達(dá)補(bǔ)腎健腦、益精填髓、益氣活血、化瘀通竅之功跑。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果驗(yàn)證了首烏益智靈對(duì) VD有明顯的治療作用。

首烏益智靈能明顯改善 VD大鼠的智能,其治療 VD的機(jī)制之一可能是調(diào)節(jié) VAD模型大鼠體內(nèi)性激素水平。這為中詠藥防治腦 VD提供了新思路、新方法,有重要的使用價(jià)值和理論意義。

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5 朱鋐達(dá),陳名道 .性激素與動(dòng)脈硬化性心血管疾病及其相關(guān)事件的關(guān)系〔J〕.中華內(nèi)分泌代謝雜志,2005;21(1):84-7.

6 張秀清,遲兆富 .性激素與老年期腦梗死的相關(guān)性研究進(jìn)展〔J〕.山東醫(yī)藥,2003;43(25):54-5.