程偉雄 吳北林

目前,內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells,ECs)相關(guān)的血管再生及損傷血管修復(fù)已經(jīng)成為腫瘤等疾病中的研究熱點[1-7]。本研究觀察NSCLC患者外周血中CECs改變,并與臨床相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，進(jìn)一步論證其在肺癌病變發(fā)生發(fā)展中的作用以及臨床價值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇2006年5月～2009年4月我院40例住院患者,全部患者均經(jīng)病理組織學(xué)證實為NSCLC, 40例NSCLC患者根據(jù)臨床資料分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，每期各10例。并根據(jù)治療前后分組。同時收集腫瘤標(biāo)記物NSE、CYFRA 21-1、β2-MG、FIB等。NSCLC組40例，其中男25例，女15例，年齡(45.2±12.3)歲；對照組10例，為正常老年人，其中男6例，女4例，年齡(45.2±12.3)歲。兩組一般情況具有可比性。

1.2 CECs的檢測 細(xì)胞表面標(biāo)志采用CD 45-Cy 5，CD31-FITC標(biāo)記。內(nèi)皮細(xì)胞(ECs): CD31+/CD45-。

1.3 檢測方法 采用熒光抗體標(biāo)記,流式細(xì)胞儀檢測。抽取外周血3m l，抗凝，血標(biāo)本用PBS液2倍稀釋，F(xiàn)icoll分離，1800r/m in離心20m in，PBS洗2次。將細(xì)胞加入96孔板中，每孔5×105個細(xì)胞，加入抗體5μl，4℃孵育30～60m in，用PBS液洗滌標(biāo)本2次，100μl的1%多聚甲醛固定，流式細(xì)胞儀檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，t檢驗分析兩組數(shù)據(jù)間均數(shù)的差異,方差分析法分析多組數(shù)據(jù)間均數(shù)的差異。采用Person相關(guān)系數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組與對照組患者外周血中CECs變化情況

肺癌組外周血中CECs的含量治療前Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為(0.126±0.004)、(0.187±0.007)、(0.225±0.010)、(0.273±0.008)。治療后Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為(0.152±0.006)、(0.235±0.008)、(0.256±0.010)、(0.307±0.020)。對照組為(0.061±0.011)。肺癌患者外周血中的ECs含量均高于正常對照組(P＜0.05)，Ⅰ期與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。肺癌患者治療前后兩組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，見表1。

表1 肺癌患者治療前后兩組外周血中CECs變化情況比較

2.2 肺癌患者治療前外周血中ECs與腫瘤標(biāo)記物NSE、CYFRA 21-1、β2-MG、FIB相關(guān)性分析 在肺癌患者中，ECs數(shù)值與β2-MG、FIB有正相關(guān)性，(r值分別為0.218，0.224，P＜0.05)，與腫瘤標(biāo)記物NSE、CYFRA 21-1、無相關(guān)性。

3 討論

腫瘤是一個異常細(xì)胞生長和擴(kuò)散的增殖性疾病, 腫瘤的新生血管很大程度上和內(nèi)皮細(xì)胞的功能紊亂有關(guān)，所以抑制腫瘤新生血管是治療腫瘤的一個策略，也是目前研究熱點[1-7]。目前，化療和抑制血管生成抑制劑聯(lián)合應(yīng)用已成為腫瘤治療的新方法。這一新方式使得受損腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞沒有時間康復(fù),因此剝奪了腫瘤生長與轉(zhuǎn)移所必需的營養(yǎng)支持。那么,如何評定血管生成抑制劑對于血管內(nèi)皮的療效？目前，許多研究方法檢測內(nèi)皮細(xì)胞的產(chǎn)物或調(diào)控因子，較理想的方法是用EC的水平來估計新生血管抑制的程度和功能紊亂情況，隨著內(nèi)皮細(xì)胞免疫標(biāo)志的證實，用流式細(xì)胞儀快速、準(zhǔn)確測定內(nèi)皮細(xì)胞本身成為可能[4-6]。本研究通過觀察治療前后EC水平的變化，并與對照組比較，發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞在肺癌患者中數(shù)目增多，與文獻(xiàn)報道一致。由于實際困難，未能使用更準(zhǔn)確的CD146標(biāo)記[8]。但隨著對內(nèi)皮功能的深入研究，以及對內(nèi)皮抑素臨床實驗的完成，EC作為一個腫瘤新標(biāo)記以及在藥物療效監(jiān)測、治療靶點等多方面的作用將越來越顯現(xiàn)。

[1]Passacquale G,Desideri G,Croce G,et al.Nifedipine improves the migratory ability of circulating endothelial progenitor cells depending on manganese superoxide dismutase upregulation[J].J Hypertens,2008 Apr,26(4):737-746.

[2]B Dome,J Timar,G Ostoros,et al.Endothelial progenitor cells in non-small cell lung cancer[J].J Clin Pathol,2005,58(4):447.

[3]Hongye Liu,Alvin T Kho,Isaac S Kohane,et al.Predicting Survival within the Lung Cancer Histopathological Hierarchy Using a Multi-Scale Genomic Model of Development[J].PLoS Med,2006,3(7):232.

[4]Michael Steurer,Johann Kern,Matthias Zitt,et al.Quantification of circulating endothelial and progenitor cells: comparison of quantitative PCR and four-channel flow cytometry[J].BMC Res Notes,2008,1:71.

[5]Dome B,Dobos J,Tovari J,et al.Circulating bone marrow-derived endothelial progenitor cells:characterization,mobilization,and therapeutic considerations in malignant disease[J].Cytometry A,2008,73(3):186-193.

[6]Kunz GA,Liang G,Cuculoski F,et al.Circulating endothelial progenitor cells predict coronary artery disease severity[J].Am Heart J,2006,152(1):190-195.

[7]Yao EH,Yu Y,Fukuda N.Oxidative stress on progenitor and stem cells in cardiovascular diseases[J].Curr Pharm Biotechnol,2006,7(2):101-108.

[8]斐雪濤.干細(xì)胞生物學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2003:371-397.