沈鴻飛 姜家康

黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040

肺癌是目前死亡率和發(fā)病率均最高，對(duì)人類生命健康具有最大危害性的惡性腫瘤之一，對(duì)西藥、化療、放療的敏感性均較差，目前尚沒(méi)有治療肺癌的特效藥物。所以，目前腫瘤治療工作的重心仍然是尋找和發(fā)現(xiàn)對(duì)腫瘤治療效果較好的藥物。中藥是具有中國(guó)特色的治療疾病的方法。中藥尤其是中藥復(fù)方在中醫(yī)基礎(chǔ)理論的指導(dǎo)下，通過(guò)君臣佐使合理配伍，其活性物質(zhì)群可能作用于各個(gè)水平的多環(huán)節(jié)，多靶點(diǎn)且安全性強(qiáng)，具有較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)。本研究以中醫(yī)辨證論治理論為基礎(chǔ)，探討復(fù)方潤(rùn)肺消積膠囊對(duì)肺癌的治療作用，從而為中西醫(yī)結(jié)合治療肺癌探索新途徑并提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用的C57BL/6N小鼠（6周齡，雄性，體重16-20g）均購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。Lewis肺癌荷瘤小鼠購(gòu)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥物與試劑

潤(rùn)肺消積膠囊：方藥主要組成有太子參、黃芪、牡丹皮、莪術(shù)、白花蛇舌草、山慈菇、茯苓、麥冬、天花粉、地骨皮等（中藥飲片均購(gòu)自黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥局），以臨床配伍方法，按傳統(tǒng)方法粉碎為散劑。具體方法參照《中醫(yī)科研設(shè)計(jì)與統(tǒng)計(jì)方法》執(zhí)行。西藥1：順鉑注射液；西藥2：生理鹽水。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

醫(yī)用超凈工作臺(tái)（SW-GIF，中國(guó)蘇州凈化設(shè)備廠）；高速冷凍離心機(jī)（R21，日本日立制作所）；二氧化碳培養(yǎng)箱（2300，美國(guó)謝爾登公司）；倒置生物顯微鏡（日本OLYMPUS產(chǎn)品）；光學(xué)顯微鏡（中國(guó)光學(xué)儀器廠）；電熱恒溫水浴箱（北京醫(yī)療設(shè)備廠）；y-放射免疫計(jì)數(shù)器（QC-911，中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)中佳公司）；液閃測(cè)量?jī)x（BECKMAN公司）。

1.4 方法及分組

①潤(rùn)肺消積膠囊組方研究

本方以益氣養(yǎng)陰、潤(rùn)肺化痰、散積消徵為組方原則，體現(xiàn)祛邪與扶正相通，功補(bǔ)兼施的治療原則。藥物組成為太子參、黃芪、牡丹皮、莪術(shù)、白花蛇舌草、山慈菇、茯苓、麥冬、天花粉、地骨皮等。

②潤(rùn)肺消積膠囊高中低劑量的制備

高中低劑量的制備分別按成人（60千克體重）臨床用藥的20、10、5倍，即分別按17.92g/kg、8.96g/kg、4.48g/kg給藥。然后將所取中藥進(jìn)行濃縮制成湯劑。

③造模方法

將lewis肺癌細(xì)胞株進(jìn)行人工培養(yǎng)，制成癌細(xì)胞懸液，取小鼠皮下注射癌細(xì)胞懸液建立肺癌小鼠移植瘤模型。

④實(shí)驗(yàn)分組

將所制成的移植瘤模型鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，即：模型對(duì)照組、高劑量給藥組、中劑量給藥組、低劑量給藥組、西藥化療組；另選未建模10只小鼠作為正常組。

⑤潤(rùn)肺消積膠囊治療肺癌模型小鼠

造模后第6天開(kāi)始給藥，模型對(duì)照組給予生理鹽水，按10ml/kg灌胃；低中高劑量組分別給予0.5ml湯劑，早晚給每天二次；西藥組按25mg/kg用生理鹽水配成，給予0.2ml，每天一次給5天。療程均為14d。第15天觀察小鼠體重變化，各組分別處死小鼠5只，取出各組處死的荷瘤小鼠瘤體的重量，稱重后再計(jì)算出各組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)抑制率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 潤(rùn)肺消積膠囊對(duì)肺癌小鼠體重的影響（見(jiàn)表1）

表1 給藥后第15天各組小鼠體重的比較（）

表1 給藥后第15天各組小鼠體重的比較（）

注：*表示與模型對(duì)照組比較，P＜0.05；#表示與西藥化療組比較，P＜0.05.

組別 小鼠數(shù)量（前/后） 體重（g）正常組 10/10 18.10士1.91*#模型對(duì)照組 10/8 14.23士3.72#低劑量給藥組 10/10 16.71士2.68*#中劑量給藥組 10/10 17.65士2.59*#高劑量給藥組 10/10 18.07士1.33*#西藥化療組 10/10 12.54士2.37*

由表1可見(jiàn)，中藥低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組的小鼠體重均大于模型對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，低、中、高劑量給藥組與模型對(duì)照組的差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；西藥化療組小鼠體重低于模型對(duì)照組，且兩者差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 潤(rùn)肺消積膠囊對(duì)小鼠腫瘤重量及生長(zhǎng)抑制率的影響（見(jiàn)表2）

表2 潤(rùn)肺消積膠囊對(duì)小鼠腫瘤重量及生長(zhǎng)抑制率的影響 （）

表2 潤(rùn)肺消積膠囊對(duì)小鼠腫瘤重量及生長(zhǎng)抑制率的影響 （）

注：*表示與模型對(duì)照組比較，P＜0.05；#表示與西藥化療組比較，P＜0.05。A=對(duì)照組瘤重，B=實(shí)驗(yàn)組瘤重，每組抑瘤率（%）=（A-B）/A×100%。

組別 瘤重（g） 抑制率（%）模型對(duì)照組 2.62士0.41 —低劑量給藥組 1.78士0.39*# 32.06中劑量給藥組 1.54士0.35* 41.22高劑量給藥組 1.13士0.28*# 56.87西藥化療組 1.49士0.45* 43.13*

2.2.1 由表2可知，潤(rùn)肺消積膠囊低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組、西藥化療組的核瘤小鼠的瘤重均小于不給與任何治療措施的模型對(duì)照組小鼠的瘤重，且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，在a=0.05水平上，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。2.22低劑量給藥組的瘤重低于西藥化療組，且兩組差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2.2 潤(rùn)肺消積膠囊高劑量給藥組小鼠的瘤重低于西藥化療組，且兩組瘤重差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2.3 低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組小鼠的瘤重依次減少，且三者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 潤(rùn)肺消積膠囊對(duì)小鼠存活期的影響（見(jiàn)圖1）

圖1 各組小鼠存活時(shí)間比較

2.3.1 如圖1所示，模型對(duì)照組核瘤小鼠存活期平均為（26.9±6.1）d，在建立模型后36天，所有對(duì)照組小鼠全部死亡；低劑量給藥組小鼠存活平均時(shí)間為（35.2±4.5）d；中劑量給藥組（41.0±5.7）d；高劑量給藥組（46.8±4.9）d，其中有3只小鼠的存活時(shí)間超過(guò)了三個(gè)月；西藥化療組小鼠存活平均時(shí)間為（39.9±4.7）d。

2.3.2 低劑量給藥組、低劑量給藥組、低劑量給藥組、西藥化療組核瘤小鼠的存活時(shí)間均大于模型對(duì)照組小鼠的存活時(shí)間，且四組治療組與模型對(duì)照組小鼠的存活時(shí)間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3.3 低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組小鼠的存活時(shí)間依次減少，且三者差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明在劑量允許的范圍內(nèi)，潤(rùn)消積膠囊的給藥量與小鼠的存活時(shí)間呈正相關(guān)。

2.3.4 高劑量給藥組小鼠的存活時(shí)間高于西藥化療組，且差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

目前，Lewis肺癌常作為篩選抗腫瘤藥物的動(dòng)物模型[2]。本實(shí)驗(yàn)研究把潤(rùn)肺消積膠囊作為L(zhǎng)ewis肺癌小鼠的治療藥物，探討復(fù)方潤(rùn)肺消積膠囊對(duì)小鼠肺癌的治療作用。潤(rùn)肺消積膠囊是一種在臨床上取得了較好療效的藥物，具有扶正固本、益氣養(yǎng)血的效果，對(duì)腫瘤有較好的抑制效果，。其中的人參、黃芪等補(bǔ)氣健脾藥物可調(diào)節(jié)腫瘤患者的免疫機(jī)能[3]，從而達(dá)到抑制肺癌組織增長(zhǎng)的效果。

本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，復(fù)方潤(rùn)肺消積膠囊能夠有效提升Lewis肺癌小鼠的體重，較傳統(tǒng)的西藥化療治療有了明顯的改觀，取得了良好的效果。

中藥潤(rùn)肺消積膠囊能夠有效的抑制小鼠肺癌細(xì)胞的增長(zhǎng)，減輕腫瘤的重量，從而達(dá)到良好的治療肺癌的效果，低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組小鼠的瘤重依次減少，說(shuō)明在劑量允許的范圍，高劑量藥物的治療效果比低劑量的治療效果要好。

延長(zhǎng)癌癥患者的生存時(shí)間是臨床治療的一項(xiàng)重要治療指標(biāo)。潤(rùn)肺消積膠囊能延長(zhǎng)肺癌小鼠的存活時(shí)間，高劑量給藥組小鼠的生存時(shí)間長(zhǎng)于西藥組，說(shuō)明高劑量的潤(rùn)肺消積膠囊比順鉑注射液更有利于延長(zhǎng)肺癌小鼠壽命。

綜上所述，潤(rùn)肺消積膠囊能夠降低小鼠腫瘤的重量，提高腫瘤抑制率，延長(zhǎng)Lewis肺癌小鼠的存活時(shí)間，增加小鼠的體重，提高生活質(zhì)量，對(duì)Lewis小鼠肺癌具有明顯的治療效果，從而為中西醫(yī)結(jié)合治療肺癌探索新途徑并提供理論依據(jù)。

[1] 陸燕蓉，林蘋，張潔，等.小鼠Lewis肺癌細(xì)胞株L3-8的建立及生物學(xué)特征[J].實(shí)用癌癥雜志，1998，13（3）：161－163.

[2] 張士紅，姜家康，李亞杰，等.中藥復(fù)方潤(rùn)肺消積膠囊免疫抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2007，35（3）：14－15.

[3] 范宏宇，周宜強(qiáng).中醫(yī)藥治療非小細(xì)胞肺癌的研究概況[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2002，8（10）：75－77.