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      實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)果蠅的方法和注意事項(xiàng)

      2010-08-15 00:52:53
      科技傳播 2010年13期
      關(guān)鍵詞:玉米粉原種遺傳學(xué)

      馮 航

      西安文理學(xué)院生命科學(xué)系,陜西 西安 710065

      果蠅屬于昆蟲綱,雙翅目,與家蠅是不同的種。它的生活史包括卵→幼蟲→蛹→成蟲。果蠅具有生活史短、繁殖率高、飼養(yǎng)簡(jiǎn)便等特點(diǎn),是研究遺傳學(xué)的好材料,尤其在基因分離、連鎖、交換等方面,對(duì)果蠅的研究更是廣泛而充分[1]。因此,做好果蠅培養(yǎng)對(duì)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)有著重要的作用。

      1 果蠅的培養(yǎng)

      1.1 培養(yǎng)基的配方

      培養(yǎng)基是飼養(yǎng)果蠅的基礎(chǔ),不同材料的配制方法不盡相同。結(jié)合幾年的培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),目前西安文理學(xué)院生命科學(xué)系采用的效果較好的配方為:玉米粉100g,糖130g,瓊脂10g,酵母片20g,苯甲酸0.75g,丙酸1.25ml,加蒸餾水1200ml。

      1.2 配制方法

      1)取一定量的水將玉米粉拌勻,加熱至糊狀。期間要不斷攪拌,防止糊底;

      2)將糖和瓊脂加入水中煮沸溶解;

      3)將酵母片在研缽中加水研磨至糊狀。

      將1)、2)二者混合后降溫至50℃左右時(shí)加入3)苯甲酸和丙酸,攪拌均勻后即可分裝到培養(yǎng)瓶中。

      1.3 培養(yǎng)基的分裝

      將干凈的培養(yǎng)瓶在121℃下滅菌20min,倒入約2.5cm厚的未完全冷卻的培養(yǎng)基。待培養(yǎng)基冷卻凝固后即可將果蠅轉(zhuǎn)入培養(yǎng)。

      1.4 果蠅處理

      因?yàn)楣墝?duì)乙醚很敏感,易麻醉,可以對(duì)作種的果蠅輕度麻醉。(果蠅翅膀外展45℃角表示已死亡)。選用廣口瓶作為麻醉瓶,瓶塞內(nèi)部塞上適量的脫脂棉,滴加數(shù)滴乙醚。培養(yǎng)瓶口與麻醉瓶口對(duì)接輕拍上方的培養(yǎng)瓶將果蠅落到麻醉瓶里。然后迅速蓋好兩個(gè)瓶塞,半分鐘左右,果蠅被麻醉,活動(dòng)緩慢,注意麻醉不得過度,如果果蠅兩翅展開且肢體僵硬,說明已致死。因此,必須抓緊時(shí)間移人新培養(yǎng)瓶中,可將培養(yǎng)瓶橫臥,用干凈毛筆把果蠅挑人,待果蠅清醒后,再豎立加塞,防止果蠅粘在培養(yǎng)基上[2]。

      1.5 原種培養(yǎng)

      留種培養(yǎng)時(shí),事先檢查一下果蠅有沒有混雜,以防原種丟失。親本的數(shù)目一般每瓶5~10對(duì)[1]。原種一般可在18℃下培養(yǎng)。原種大約4周左右換一次培養(yǎng)基,要多注意觀察,具體根據(jù)培養(yǎng)溫度的不同,視培養(yǎng)基的消耗程度而定。每一原種培養(yǎng)至少保留兩套,并注明名稱和日期,培養(yǎng)時(shí)避免日光直射。

      2 注意事項(xiàng)

      果蠅培養(yǎng)過程中有幾個(gè)關(guān)鍵性的環(huán)節(jié),如若掌握不好,將不能使果蠅正常生長(zhǎng),甚至導(dǎo)致部分或全部死亡。因此,應(yīng)特別注意[3]。

      2.1 玉米粉的溶解

      玉米粉一定要先用涼水拌勻后再加熱,不能直接倒入加熱的培養(yǎng)基中,否則容易聚集成團(tuán),不易溶解。配制的培養(yǎng)基容易出現(xiàn)塊狀,不易于果蠅的利用。

      2.2 添加酵母的時(shí)間

      酵母為活性物質(zhì),高溫易失活。因此應(yīng)當(dāng)在培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)加入到培養(yǎng)基中,切勿將酵母粉加入到培養(yǎng)基中直接煮沸。

      2.3 培養(yǎng)溫度

      果蠅的培養(yǎng)溫度要以具體使用情況而定,在遺傳學(xué)教學(xué)實(shí)驗(yàn)中,由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間相對(duì)較短,要求果蠅的繁殖速度相對(duì)就較快,因此可以在23~25℃的條件下培養(yǎng),而保種則應(yīng)在18℃左右下培養(yǎng),以免培養(yǎng)基消耗過快,減少轉(zhuǎn)接次數(shù)。

      3 常見問題處理

      3.1 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)發(fā)霉

      因?yàn)榻湍妇c霉菌的生活環(huán)境相似,且由于培養(yǎng)過程幾乎都在培養(yǎng)箱中進(jìn)行,通風(fēng)不良,時(shí)間久了容易滋生霉菌。因此,要使用的培養(yǎng)瓶要嚴(yán)格滅菌,當(dāng)室溫與培養(yǎng)溫度相似時(shí)可以在實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng),加強(qiáng)通風(fēng)。對(duì)已經(jīng)發(fā)霉的培養(yǎng)基,在具有備用種時(shí)可以將其淘汰,若僅此一瓶,就要?dú)⑺拦壣砩蠑y帶的霉菌。方法是將帶有霉菌孢子的成蠅倒入空培養(yǎng)瓶中,棉塞上倒適量的75%酒精,再將瓶口塞緊,利用酒精具有揮發(fā)性,揮發(fā)后的酒精充滿整個(gè)瓶?jī)?nèi),從而將果蠅身上的霉孢子殺死。在操作上應(yīng)注意兩點(diǎn):一是倒在棉塞上的酒精量要合適,過多果蠅易醉昏,過少殺死不了霉菌孢子;二是果蠅呆在空瓶?jī)?nèi)的時(shí)間要恰當(dāng),以2d為好[4]。轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基的第二天再次把果蠅轉(zhuǎn)到另一新培養(yǎng)基中,反復(fù)5~6次。

      3.2 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)壁凝結(jié)水珠

      培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)瓶時(shí)熱蒸汽會(huì)凝結(jié)在瓶壁,如果過早使用,果蠅會(huì)溺死。因此,在分裝后要自然冷卻一段時(shí)間,待瓶壁的水珠蒸發(fā)后使用。如若放置在冰箱內(nèi)保存,使用前若發(fā)現(xiàn)瓶壁沾有水珠,則需用滅過菌的濾紙條吸干后使用。

      3.3 培養(yǎng)基干結(jié)成塊

      一般配制的培養(yǎng)基放置時(shí)間過久或培養(yǎng)溫度較高時(shí),培養(yǎng)基因?yàn)槭c瓶壁分離,干結(jié)成塊,此種情況下果蠅無法正常生存,更無法產(chǎn)卵。因此,要及時(shí)更換培養(yǎng)基。

      3.4 培養(yǎng)基過濕

      果蠅代謝過程中會(huì)產(chǎn)生一定的廢物,時(shí)間長(zhǎng)了容易使培養(yǎng)基變成稀糊狀,果蠅容易粘附在培養(yǎng)基表面,由于無法飛行和覓食而死亡。因此,要及時(shí)根據(jù)培養(yǎng)基的情況轉(zhuǎn)接果蠅。

      3.5 果蠅生活力降低

      由于果蠅長(zhǎng)期在偏低的溫度下保種,低溫使其生活力下降,許多性狀出現(xiàn)退化,甚至變異,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此,每隔一定時(shí)期必須進(jìn)行復(fù)壯。復(fù)壯方法為用乙醚把果蠅麻昏,選擇個(gè)體較大的、性狀具有本品種特點(diǎn)的雌雄果蠅進(jìn)行混合培養(yǎng)。再在產(chǎn)出的一代中又選擇個(gè)體較大的、性狀具有本品種特點(diǎn)的雌雄果蠅進(jìn)行混合培養(yǎng)。如此進(jìn)行一次,后代就能保持個(gè)體較大,又遺傳了本品系性狀的原種[5]。

      [1]劉祖洞,江紹慧.遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京:高等教育出版社,1987:63.

      [2]陳曉蕓.果蠅的飼養(yǎng)[J].生物學(xué)通報(bào),2006(2):51.

      [3]王轉(zhuǎn)斌.果蠅的保種技巧及唾液腺染色體的制備[J].實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理,2002(3):38.

      [4]龔慧明.果蠅培養(yǎng)基長(zhǎng)霉的處理措施[J].生物學(xué)教學(xué),2007(4):52.

      [5]龔慧明.果蠅飼養(yǎng)管理的幾個(gè)問題[J].生物學(xué)通報(bào),2005(4):5.

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