陳彥杰

在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，3，3’-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)作為過氧化物酶最敏感、最常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物而被廣泛應(yīng)用于蛋白印跡(WB)、免疫組織化學(xué)(IHC)和免疫細胞化學(xué)(ICC)、斑點印跡(Dot blot)和生物芯片(Biochip)等的染色和顯色反應(yīng)。自應(yīng)用于組織化學(xué)染色四十年來，為人類的科研做出了偉大的貢獻［1］。但是DAB屬于聯(lián)苯胺類化合物(BZC)中的一種，現(xiàn)已被證實具有免疫毒性、生殖毒性、遺傳毒性、致癌性等毒性，尤其對泌尿系統(tǒng)可致膀胱癌，被國際癌癥研究中心(IARC)確認為致癌物，已被世界多個國家禁止工業(yè)使用［2］。只在一些高等院校、疾病研究中心、醫(yī)院病理科室等生物醫(yī)學(xué)實驗室允許少量使用。雖然使用量不大，但由于DAB的致癌性且其潛伏期可長達20年，所以除使用過程中要特別注意安全防護外，使用后的廢液存放和去毒性處理也應(yīng)引起高度重視。

DAB的毒性處理原則是DAB分子完全被破壞且反應(yīng)副產(chǎn)物和終產(chǎn)物也必須不具備誘變性。最初使用5-10%次氯酸鈉(漂白水)處理，并以標簽形式粘貼在盛放DAB的器皿上，后被證明它雖然可以破壞DAB分子，可反應(yīng)終產(chǎn)物只是變成了另外一個仍具誘變性的含氯的有機化合物，且這個含氯的有毒物質(zhì)還需花費每加侖500元人民幣的價格被焚化，所以用漂白粉處理的的方法早已被停用［3，4］。2002年Duke大學(xué)環(huán)境安全部頒布了兩則處理方法:一是過氧化氫(H2O2)/辣根過氧化物酶(HRP)法，DAB與HRP反應(yīng)沉淀下來后，再經(jīng)抗壞血酸脫色后排入下水道。后經(jīng)證明DAB被氧化為固體沉淀與液相分離后，剩余的液體是無誘變性的，但沉淀物質(zhì)仍保留其致突變性，唯一的優(yōu)點是減少了污染體積;而被沿用至今的是硫酸-高錳酸鉀法，DAB被處理后不但分子被完全破壞，反應(yīng)終產(chǎn)物也無誘變性，處理后可以按普通實驗室廢液處置［5］。具體處理步驟如下。

1 硫酸-高錳酸鉀水溶液的配制

a.0.2 M高錳酸鉀水溶液;高錳酸鉀(KMnO4)，31.6 g，蒸餾水1000 ml;b.2.0M的硫酸水溶液，濃硫酸(H2SO4)，112 ml;蒸餾水 1000 ml。

2 收集廢棄DAB液

包括顯色后洗片、洗器皿的自來水和剩余的DAB顯色液，稀釋后DAB的濃度不超過0.9 mg/ml。

3 去毒性反應(yīng)

廢棄DAB液每10 ml加入上述5 mla液和5 mlb液，混合后靜置不低于10 h或過夜，此時DAB的致癌性基本解除。

4 脫色

加入抗壞血酸或草酸脫色，邊加邊攪拌至廢液退至無色。

5 中和

加入碳酸氫鈉中和pH值6至8，經(jīng)PH試紙檢測。

6 處理

有廢液回收條件的按普通實驗室廢液回收，沒有回收條件的可以混合大量自來水傾入下水道沖走。與硫酸-高錳酸鉀法相比，被公認更有效的處理方式是焚燒廢棄物的處置方法，DAB廢棄物加入燃料被焚燒后苯環(huán)完全被破壞，排出的有毒的氮氧化物可以通過洗滌器除去。但焚燒法需要有專業(yè)的回收和存放，較適合集中DAB的毒性處理，而硫酸-高錳酸鉀法較適合實驗室使用。在我國由于實驗室比較分散，單個實驗室產(chǎn)生的廢液量較少，很少受到實驗使用人員和有關(guān)部門的重視，大多實驗室都是未經(jīng)任何處理直接排入下水道，這種情況下日積月累、積少成多也是非?？膳碌?，所以硫酸-高錳酸鉀法去毒處理方法是非常有必要推廣使用的。為保護環(huán)境，減少污染，每個使用DAB的實驗室應(yīng)當(dāng)把DAB廢液的去毒性處理制定成一項實驗室守則，嚴格執(zhí)行。

［1］Dariush Fahimi H.Peroxisomes:40 years of histochemical staining，personal reminiscencesHistochem Cell Biol.2009，131(4):437-40

［2］陳慶，康維鈞，聯(lián)苯胺類化合物的毒性研究進展.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，28(6):460.

［3］Lunn G，Sansone EB.Safe disposal of diaminobenzidine.Trends Genet，1992，8:7.

［4］Horn H.Safe diaminobenzidine(DAB)disposal.Biotech Histochem，2002，77(4):229.

［5］王晉芬，王躍華.DAB廢物處理程序中華病理學(xué)雜志，2005，34(12):775.