補(bǔ)腎健脾方藥結(jié)合二甲雙胍對(duì)多囊卵巢模型大鼠的治療作用

陳高萍，沈明勤，魏愛(ài)醇

(海安縣中醫(yī)院，江蘇 海安 226600)

本文對(duì)補(bǔ)腎健脾方藥結(jié)合二甲雙胍對(duì)多囊卵巢模型大鼠的治療作用，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SD雌性大鼠，SPF級(jí)，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(滬)，2007-0005。

1.2 藥品與試劑 補(bǔ)腎健脾方藥，經(jīng)煎煮、濃縮,制成含生藥量3 g/mL藥液,4 ℃保存，備用。二甲雙胍片，0.25 g/片,48片/瓶，批號(hào)：08051301，江蘇江中藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)。注射用人絨毛膜促性腺激素(HCG)，500 U/瓶，批號(hào)：0803091，上海第一藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。中性胰島素注射液，400 U/10 mL，批號(hào)：0804215，江蘇萬(wàn)邦生化醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)?？诜咸烟?，350 g/袋，批號(hào)：080102，上海福億葡萄乳品有限公司生產(chǎn)。FSH、E2、P放免試劑盒，批號(hào)：081020，北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)。INS,北京福瑞特工程公司生產(chǎn)。

2 方法

2.1 PCO大鼠模型制備及分組 SD雌性大鼠100只,體質(zhì)量250 g，隨機(jī)分為正常對(duì)照組10只和PCO模型組90只。正常對(duì)照組給予常規(guī)伺養(yǎng)。PCO模型組依照Poretsky法[1]每只大鼠皮下注射HCG 1.5 U,每日2次，共22 d，INS皮下注射于第1～11天內(nèi)自0.5 U/d開(kāi)始，每日遞增0.5 U，逐淅遞增至6.0 U/d，并按此劑量維持至第22天，注射前1 d起以5%葡萄糖溶液替代日常飲用水，造模最后1 d禁食過(guò)夜。

全部大鼠每周稱體質(zhì)量1次。于第23天稱量體質(zhì)量,眼眶后靜脈取血，測(cè)血清P、INS。正常對(duì)照組大鼠血清P、INS均在正常范圍內(nèi)。PCO模型組大鼠血清P、INS升高者，為PCO模型大鼠。根據(jù)血清P、INS值選出PCO模型組大鼠，按體質(zhì)量及P、INS值隨機(jī)分為模型對(duì)照(灌胃飲用水)組、陽(yáng)性藥(二甲雙胍)組、二甲雙胍加補(bǔ)腎健脾方藥高、低劑量組、補(bǔ)腎健脾方藥高、低劑量組共6組，每組12只，未成模大鼠剔除。均將供試液配制成一定濃度后，按10 mL/kg灌胃給藥，正常對(duì)照組另給予等量飲用水。

2.2 給藥方法 二甲雙胍組大鼠按成人劑量的10倍(250 mg/kg)、補(bǔ)腎健脾方藥高、低劑量組按成人劑量的10倍、5倍量(通過(guò)人與大鼠體表面積比率換法計(jì)算出給藥量分別為30 mg/kg、15 mg/kg)，灌胃給藥。正常對(duì)照組和模型對(duì)照給大鼠每日灌胃蒸餾水1 mg/100 g體質(zhì)量。均1次/d，連續(xù)14 d。

2.3 檢測(cè)項(xiàng)目及方法 末次給藥后禁食過(guò)夜，翌日稱重后，大鼠腹股溝靜脈取血，分離血清，放免法測(cè)血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡素(FSH)、胰島素(INS)水平，另取血清測(cè)血糖水平(GLU)，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(insulin sensitivity index，ISI，為空腹血糖值與空腹血胰島素值乘積的倒數(shù)，呈非正態(tài)分布，分析時(shí)取其自然對(duì)數(shù)值)。最后，放血處死動(dòng)物，取子宮、卵巢稱臟器質(zhì)量。卵巢病理檢查：每組隨機(jī)取4只卵巢進(jìn)行切片、脫片、包埋、HE染色、光鏡檢查。

3 結(jié)果

3.1 補(bǔ)腎健脾方對(duì)多囊卵巢模型大鼠卵巢、子宮質(zhì)量的影響 見(jiàn)表1。

表1 對(duì)多囊卵巢模型大鼠卵巢、子宮質(zhì)量的影響(±s)

3.2 補(bǔ)腎健脾方藥對(duì)多囊卵巢模型大鼠血清E2、FSH、INS、P、ISI的影響 見(jiàn)表2。

表2 對(duì)多囊卵巢模型大鼠E2、FSH、INS、P水平的影響(±s)

3.3 補(bǔ)腎健脾方藥對(duì)多囊卵巢模型大鼠血糖和胰島素敏感指數(shù)(ISI)的影響 見(jiàn)表3。

表3 對(duì)多囊卵巢模型大鼠血糖和胰島素敏感指數(shù)(ISI)的影響(±s)

3.4 補(bǔ)腎健脾方藥對(duì)多囊卵巢模型大鼠卵巢病理組織學(xué)觀察結(jié)果 對(duì)照組：子宮內(nèi)膜表面覆蓋單層柱狀上皮，腺體較豐富，卵巢組織內(nèi)見(jiàn)各發(fā)育階段的卵泡及排卵后形成的黃體、白體。模型組：子宮內(nèi)膜上皮為高柱狀，細(xì)胞質(zhì)豐富，腺上皮細(xì)胞明顯增生呈假?gòu)?fù)層改變，卵巢組織內(nèi)見(jiàn)多量擴(kuò)張呈囊狀的卵泡，卵泡內(nèi)見(jiàn)卵泡膜細(xì)胞及顆粒細(xì)胞。二甲雙胍組：子宮內(nèi)膜表面覆蓋單層柱狀上皮，腺體較豐富，2例鼠卵巢組織改變與模型組相似,見(jiàn)多量擴(kuò)張呈囊狀的卵泡，卵泡內(nèi)見(jiàn)卵泡膜細(xì)胞及顆粒細(xì)胞,另2例鼠卵巢改變與正常對(duì)照組基本相似。補(bǔ)腎健脾方藥低劑量組：2例鼠子宮內(nèi)膜與模型組改變相似，上皮為高柱狀，細(xì)胞質(zhì)豐富,腺上皮細(xì)胞明顯增生呈假?gòu)?fù)層改變，另2例與對(duì)照組相似，表面覆單層柱狀上皮，腺體較豐富,各例鼠卵巢組織改變與模型組相似，見(jiàn)多量擴(kuò)張呈囊狀的卵泡，卵泡內(nèi)見(jiàn)卵泡膜細(xì)胞及顆粒細(xì)胞。 補(bǔ)腎健脾方藥高劑量組:2例鼠子宮內(nèi)膜與模型組改變相似，上皮為高柱狀，細(xì)胞質(zhì)豐富，腺上皮細(xì)胞明顯增生呈假?gòu)?fù)層改變，另2例與對(duì)照組相似，表面覆單層柱狀上皮,腺體較豐富，2例鼠卵巢組織改變與模型組相似，見(jiàn)多量擴(kuò)張呈囊狀的卵泡,卵泡內(nèi)見(jiàn)卵泡膜細(xì)胞及顆粒細(xì)胞，另2例鼠卵巢改變與正常對(duì)照組基本相似。

4 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)[1]結(jié)果提示,二甲雙胍結(jié)合補(bǔ)腎健脾方藥對(duì)皮下注射HCG和INS引起的多囊卵巢模型(PCO)大鼠有明顯的治療作用,且比單獨(dú)使用二甲雙胍治療的陽(yáng)性對(duì)照組的藥效作用有一定程度的好轉(zhuǎn)。

[1]劉新敏,李光榮,陳雙厚,等.多囊飲對(duì)多囊卵巢模型大鼠的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2006,21(6):371-373.