楊春雨 ，魏建和 ，，張 爭(zhēng) ，馮錦東 ，甘炳春

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所·海南省南藥資源保護(hù)與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 萬(wàn)寧 571533;2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193)

廣藿香是唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth.，以葉、梗入藥，有芳香化濕、和胃止嘔、祛暑解表的功能，是重要的南藥之一[1]。廣藿香原產(chǎn)于菲律賓、馬來(lái)西亞等國(guó)，宋代引入我國(guó)。廣藿香分為石牌香、高要香、湛江香和海南香，在海南省萬(wàn)寧市有悠久的種植歷史。廣藿香在海南種植時(shí)出現(xiàn)了多種病害，嚴(yán)重影響著藥材產(chǎn)量和質(zhì)量。在對(duì)病害的多種防治方法中，抗病育種是一種很好的方法，具有廣闊的發(fā)展前景，而廣藿香抗青枯病鑒定技術(shù)是抗病育種技術(shù)的有機(jī)組成部分。筆者對(duì)比進(jìn)行了探討，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 海南廣藿香材料

海南廣藿香取材于萬(wàn)寧市。

1.2 廣藿香青枯病特征及病原菌

植株開始發(fā)病時(shí)部分葉片萎垂，后發(fā)展到整株調(diào)萎，最后根部腐爛;剖開病株根部和莖部，發(fā)現(xiàn)病部維管變褐;擠壓切口，有乳白色菌濃溢出;作切片顯微鏡檢查，見(jiàn)病部維管組織有細(xì)菌溢出。病原菌從萬(wàn)寧市種植單位采樣分離、鑒定獲得。廣藿香青枯病病原是青枯假單胞桿菌 Pseudomonasso lanacearum(Smith)Smith.，生物變種3，生理小種1[2]。

1.3 抗病性鑒定原理

抗病性比較原理:在相同侵染強(qiáng)度致病菌、相同接種條件下，不同品種或不同株系植物表現(xiàn)出不同的發(fā)病情況。發(fā)病較早品種的抗病性弱，發(fā)病較晚品種的抗病性強(qiáng)，一直不發(fā)病品種為免疫品種。

抗病性比較方法:在相同的大田條件和菌種濃度條件下，廣藿香青枯病抗性評(píng)價(jià)可以用發(fā)病時(shí)間差來(lái)表示?？剐圆畹钠贩N，接種后，發(fā)病較快;抗性好的品種，接種后，發(fā)病較慢;免疫品種，接種后一直都不發(fā)病。因此，這些情況可以用時(shí)間差比較其抗性差異。

抗病性品種等級(jí)分類:免疫品種為接種后不發(fā)病;抗病品種為接種后在較晚的一段時(shí)間內(nèi)發(fā)病;感病品種為接種后在較早的一段時(shí)間內(nèi)發(fā)病。

1.4 抗性比較試驗(yàn)方法

大田接種方法:采用灌根接種法。在大田中，將一定濃度和質(zhì)量的菌種懸浮液灌在植物根部，讓菌種在自然條件下侵入植物體內(nèi)，從而達(dá)到接菌的目的。

大田溫度、土壤濕度記錄方法:土壤含水率測(cè)定方法要點(diǎn)為土壤過(guò)1 mm篩，土樣烘干溫度為(105±2)℃，用稱重器裝載土樣，室溫稱取數(shù)據(jù)。干重測(cè)定要測(cè)至“恒重”，數(shù)據(jù)精確到0.001 g。土壤(質(zhì)量)含水率計(jì)算方法為土壤(質(zhì)量)含水率(%)=[(土樣濕重－土樣干重)/土樣干重]×100。

土壤特點(diǎn)、菌種和苗木標(biāo)準(zhǔn):土壤為沙壤土，風(fēng)干土含水率3.8%，最大含水率38%;本所試驗(yàn)田實(shí)驗(yàn)期間土壤濕度為15% ～25%;大田日平均溫度為20～35℃;將在KBA培養(yǎng)基上培養(yǎng)24～48 h的菌苔，用蒸餾水稀釋，并在30℃、200次/min的恒溫振蕩器中，振蕩30 min，即得菌種;苗木標(biāo)準(zhǔn)為扦插種植40～60 d，高度15～20 cm。

2 結(jié)果

2.1 灌根接菌法濃度篩選試驗(yàn)

苗木標(biāo)準(zhǔn)為高度20～25 cm，種植40～60 d;實(shí)驗(yàn)期間，日平均溫度為20～35℃，土壤濕度為15% ～25%;菌種懸浮液濃度分別為 105/mL，106/mL，107/mL，用量為 5～10 mL/株。以 20株為一小樣，重復(fù)3次，以滅菌水代替菌種懸浮液，設(shè)為CK對(duì)照(表1)。結(jié)果顯示，濃度為107/mL時(shí)有利于抗病植株的徹底比較，其他兩個(gè)濃度組表現(xiàn)比較力不足。

表1 廣藿香青枯菌致病性濃度篩選試驗(yàn)表

2.2 廣藿香青枯菌107/mL濃度致病性試驗(yàn)

苗木標(biāo)準(zhǔn)為高度20～25 cm，種植40～60 d;實(shí)驗(yàn)期間，日平均溫度為20～35℃，土壤濕度為15% ～25%;菌種濃度為107/mL，用菌量為5 mL/株。以100株為一小樣，重復(fù)3次，以滅菌水代替菌種懸浮液，設(shè)為CK對(duì)照(表2)。結(jié)果在相同的接種條件下，不同抗性的植株在發(fā)病時(shí)間上存在很大的差異，抗性弱的植株發(fā)病較早，抗性強(qiáng)的植株發(fā)病較晚。

表2 廣藿香青枯菌107/mL濃度致病性試驗(yàn)表

2.3 抗性篩選分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)于海南萬(wàn)寧市的廣藿香，用廣藿香青枯病病原菌濃度達(dá)到107～108/mL、用量5 mL/株的接種水平，日平均溫度為20～35℃，土壤濕度為15% ～25%。品種不同抗性在發(fā)病時(shí)間上的不同見(jiàn)表3。

表3 抗性篩選分級(jí)

3 討論

采用灌根接種法，廣藿香青枯病病原菌濃度達(dá)到107～108/mL、用量5 mL/株，在日平均溫度為20～35℃、土壤濕度15% ～25%等條件下，能檢測(cè)到不同抗性的廣藿香苗木。

[1]中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草(第7冊(cè))[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:130－134.

[2]文衍堂，鄭小波.海南島廣藿香、沙姜青枯病病原鑒定[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，1984(2):113－120.