寧華杰,尹莉亞,繆智剛,王 輝,吳 杰,劉 浩,柳 斌,劉增再

(1.長沙市動物防疫監(jiān)督站,湖南長沙 410013;2.長沙市畜禽水產(chǎn)品質量檢測中心,湖南長沙 410013)

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(Highly pathogenic porcine rep roductive and respiratory syndrome,HP-PRRS)也稱高致病性豬藍耳病,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)變異株引起的一種急性高致死性傳染病[1]。該病從2006年夏秋季起,在我國大部分地區(qū)暴發(fā)流行,仔豬發(fā)病率達100%、死亡率達50%以上,母豬流產(chǎn)率達30%以上,育肥豬和種豬也可發(fā)病死亡。由于該病傳播快、發(fā)病率和病死率高、危害大、康復后帶毒、排毒期長,已成為危害養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)安全的主要動物疫病之一[2-4]。2006年-2007年長沙市也發(fā)生較大規(guī)模HP-PRRS流行,給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了嚴重損失[5-7]。本研究采用追溯方式對該市HP-PRRS流行特點進行了探討,為有效防控 HPPRRS疫情提供基礎數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

HP-PRRS反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測試劑盒購于農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)診斷中心,批號為PRRS-200706等。

1.2 方法

1.2.1 問卷調查 長沙市動物防疫監(jiān)督站研究制定了《長沙市高致病性豬藍耳病(HP-PRRS)流行病學和綜合防控措施的研究項目實施方案》,設計了《長沙市動物防疫問卷調查表》,利用市、縣、鄉(xiāng)、村四級動物疫情監(jiān)測和報告網(wǎng)絡,在HP-PRRS流行鄉(xiāng)鎮(zhèn)開展問卷調查和跟蹤調查。本次調查共計發(fā)放流行病學調查表格1 500套,回收有效問卷1 276套。

1.2.2 現(xiàn)場調查 2006年-2007年,長沙市動物防疫監(jiān)督站共計走訪患病場(戶)1 326個,開展流行病學個案調查554起,檢測各種病料和血清樣品5 725份,獲取了大量HP-PRRS豬群發(fā)病與流行病學背景資料,本研究對這部分資料進行了詳細整理和分析。

1.2.3 病料及血清樣品采集 病料取自各發(fā)病養(yǎng)豬場(戶),對瀕死和死亡生豬進行剖檢,采取心、肝、脾、肺,腎、腸系膜淋巴結等組織樣品,置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 HP-PRRSV RT-PCR檢測 在變異株核苷酸缺失區(qū)域信息的基礎上,設計一對變異株的特異性引物,引物 PRRSV-down:TGAGTATTTTGGGCGTGTGAT,對應于變異株序列的3142～3162。由其構成PRRSV Nsp 21594～1680變異株特異性 RT-PCR檢測體系,目標產(chǎn)物的長度為400 bp。具體試驗步驟略。

1.2.5 其他病原的檢測 豬瘟、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型、豬偽狂犬病病毒、豬流行性感冒病毒及細菌學檢測等方法略。

2 結果

2.1 疫情調查結果

2.1.1 HP-PRRS疫情流行基本情況 2006年7月19日長沙市寧鄉(xiāng)縣花明樓和雙江口鎮(zhèn)首先出現(xiàn)疫情,均由該縣某仔豬交易市場購進外來仔豬引起發(fā)病。該疫病在長沙市發(fā)生較大規(guī)模流行尚屬首次,呈現(xiàn)發(fā)病急、傳播快和死亡率高的基本特點。2006年、2007年疫情場戶生豬發(fā)病率、死亡率和病死率分別為達40.75%、17.14%和 42.05%,嚴重危害生豬生產(chǎn)(表1)。

2.1.2 HP-PRRS疫情時間分布 2006年-2007年長沙市生豬HP-PRRS發(fā)病的時間分布情況見圖1和圖2。

表1 2006年-2007年HP-PRRS發(fā)病豬場(戶)的生豬發(fā)病率及病死率Table1 The HP-PRRS in ciden ce and sick-death rate of pigs from 2006-2007

圖1 2006年長沙市生豬HP-PRRS流行曲線圖Fig.1 Epidem ic curve of HP-PRRS in pigs in Changsha in 2006

圖2 2007年長沙市生豬HP-PRRS流行曲線圖Fig.2 Epidem ic curve of HP-PRRS in pigs in Changsha in 2007

從HP-PRRS流行曲線圖可以看出,HP-PRRS具有明顯的季節(jié)性,大約每年6月～7月開始發(fā)病,6月～8月進入疫情高發(fā)期,9月以后疫情逐漸平穩(wěn),10月后很少有發(fā)生。

2.1.3 HP-PRRS發(fā)病豬群分布 按生豬類群分析,在各類豬群中仔豬最易感,發(fā)病率和死亡率最高(87.36%、47.99%),中豬次之,發(fā)病率和死亡率分別為31.79%和12.22%,種豬和肥豬的發(fā)病率和病死率相對較低(種豬發(fā)病率為8.64%,死亡率為2.23%;肥豬的發(fā)病率為 10.52%,死亡率為3.11%)。一般是斷奶仔豬首先發(fā)病,架子豬、母豬、肥豬隨后相繼發(fā)生。

2.1.4 HP-PRRS發(fā)病豬的品種分布 按生豬品種類別分析結果表明:不同品種豬的發(fā)病率和死亡率以良種豬最高(45.05%和22.35%),雜交豬種次之(41.65%和18.73%),本地品種發(fā)病率和死亡率較低(34.34%和16.21%),尤以地主品種“寧鄉(xiāng)豬”相對抗病力最強,發(fā)病率和死亡率分別僅為20.56%和4.84%。

2.1.5 HP-PRRS疫情區(qū)域分布 2006年-2007年長沙市生豬HP-PRRS流行具有明顯區(qū)域性分布特點。2006年長沙市共有33個鄉(xiāng)鎮(zhèn)發(fā)生 HPPRRS疫情,其中78.8%的鄉(xiāng)鎮(zhèn)位于寧鄉(xiāng)縣境內、6.1%位于瀏陽市、12.1%位于望城縣、3.0%位于長沙縣;2007年共有38個鄉(xiāng)鎮(zhèn)發(fā)生HP-PRRS疫情,65.8%的鄉(xiāng)鎮(zhèn)位于寧鄉(xiāng)縣境內、5.3%位于瀏陽市、10.5%位于望城縣、13.1%位于長沙縣、5.3%位于長沙市開福區(qū)。疫情仍集中在寧鄉(xiāng)縣,呈暴發(fā)流行態(tài)勢,其余區(qū)、縣呈點狀散發(fā)或小范圍流行態(tài)勢。這一分布特點與該縣生豬的市場交易和流動密切相關。寧鄉(xiāng)縣是湖南省有名的仔豬交易集散地并在流沙河鎮(zhèn)建有專門的仔豬交易市場,仔豬交易十分頻繁,生豬的市場交易是傳入和迅速傳播HP-PRRS的重要因素。

2.1.6 HP-PRRS疫情與氣候變化的關系 2006年7月15日～8月13日,長沙市連續(xù)遭到“碧利斯”、“格美”、“派比安”和“桑美”四次強臺風或超強臺風影響擊,氣候發(fā)生劇烈變化,同期疫情快速擴散,出現(xiàn)3次發(fā)病高峰(圖3)。

圖3 2006臺風因素與生豬 HP-PRRS疫情關系圖Fig.3 The relationship betw een typhoon and HP-PRRS in 2006

2007年6月下旬至8月,長沙遭遇50年未遇的特大旱情,持續(xù)高溫。溈水和撈刀河二河流域由于上游來水偏少,下游頻現(xiàn)“腸梗阻”,多次出現(xiàn)斷流,水質污染相當嚴重。2007年長沙市生豬HP-PRRS疫情也主要集中分布于二河流域,二河流域共計發(fā)病鄉(xiāng)鎮(zhèn)數(shù)76個,占總發(fā)病鄉(xiāng)鎮(zhèn)數(shù)的85.67%。究其原因,可能與持續(xù)干旱后,水源衛(wèi)生質量下降且受到違法丟棄病死豬的污染,沿河部分養(yǎng)殖戶因不得不從河中取水喂豬而增加生豬直接感染的可能性有關。

因此,氣候異常變化因素對2006年和2007年該市HP-PRRS流行產(chǎn)生了重要的輔助性影響。

2.2 實驗室檢測

2006年7月-2007年10月期間,該市共計采集肝臟、肺臟、腎臟、病變淋巴結等病料樣品897份,細菌學分離檢測樣品1 409份,分別送哈爾濱獸醫(yī)研究所、華南農(nóng)業(yè)大學、湖南農(nóng)業(yè)大學、湖南省獸醫(yī)總站和長沙市檢測中心等地進行實驗室檢測,本研究對幾大檢測機構檢測數(shù)據(jù)進行了匯總分析。

2.2.1 HP-PRRSV RT-PCR檢測 對采集的病死生豬樣品,應用自己設計的一對引物,以剪取的病料為模板,采用PCR檢測方法進行HP-PRRS病毒核酸的檢測。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)20 g/L瓊脂糖凝膠電泳后的陽性結果見圖4。

圖中被檢樣品在400 bp左右出現(xiàn)了陽性條帶,表明有HP-PRRSV感染存在。

2.2.2 病原檢測結果 對897份病料隨機進行了高致病性豬藍耳病病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬細小病毒、豬瘟病毒、偽狂犬病病毒和豬流感病毒抗原檢測。結果表明,HP-PRRS抗原陽性率最高,高達77.35%,豬圓環(huán)病毒2型次之,為 51.55%,其他病原檢出率較低,分別為為3.90%～18.46%不等(表2)。說明HP-PRRS在本次疫病流行中呈現(xiàn)十分活躍狀態(tài),是2006年-2007年長沙市生豬疫情的主要病因。

表2 抗原檢測結果Table2 Results of antigen examination

為分析HP-PRRSV混合感染情況,本調查采用HP-PRRSV抗原檢測陽性的45份病料,對豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬細小病毒、豬偽狂犬病病毒、豬流感病毒抗原進行檢測,結果仍顯示,圓環(huán)病毒2型的混合感染率最高(53.33%),豬細小病毒的感染率次之(26.67%),其他病原的感染率則較低,分別為6.67%～8.89%(表3)。

表3 病豬淋巴結和肺臟樣品RT-PCR檢測結果Table3 The detetion results of lym ph nodes and lungs in sick pigs by RT-PCR

2.2.3 細菌學分離檢測結果 對HP-PRRSV抗原陽性的45份病料進行了細菌學檢查,檢測結果見表4。細菌學檢測結果表明:在 HP-PRRS感染病例中,一定程度地存在大腸埃希菌、沙門菌、巴氏桿菌、副豬嗜血桿菌、鏈球菌、支原體和葡萄球菌混合感染情況。這些病菌的混合感染可能加重HP-PRRS病豬的病理損害過程,導致高的死亡率。

表4 樣品細菌學分離檢測結果Table4 The detection results of bacteriology from sam ples

3 討論

HP-PRRSV是造成2006年-2007年長沙市生豬疫病流行的主要病原,疫情的流行具有明顯的時間、種群、品種和區(qū)域分布特點。疫病的流行與生豬流動、異常氣候、多種病原混合感染、飼養(yǎng)管理等多種因素有關,生豬市場交易流動是導入和迅速傳播HP-PRRSV的重要因素。在HP-PRRSV感染病例中,多種病原混合感染或交叉感染可能是造成HPPRRSV高發(fā)病率和高死亡率的主要原因。豬圓環(huán)病毒2型、豬流感病毒、偽狂犬病病毒等均有隱性感染、持續(xù)感染與混合感染的特點,它們能夠破壞機體的免疫細胞的功能,導致機體免疫抑制[8],干擾機體的正常免疫[9],造成免疫麻痹和免疫耐受,致使豬的免疫力下降[10]。一旦豬只發(fā)生高致病性豬藍耳病,不僅造成上述疫病致病性增強,而且可能繼發(fā)巴氏桿菌、鏈球菌、沙門菌、副豬嗜血桿菌和支原體等感染,造成多病原混合和交叉感染。

[1]吳清民.獸醫(yī)傳染病學[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學出版社,2002.

[2]婁高明,李雪梅,殷 震.豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法的研究進展[J].中國獸醫(yī)雜志,1998,24(2):40-43.

[3]農(nóng)業(yè)部.高致病性豬藍耳病防治技術規(guī)范[S].2007,03.28

[4]吾際舟.HP-PRRS的研究進展[J].中國豬業(yè),2007(8):4-6.

[5]尹莉亞,王 琿,周 瑩,等.我市豬高熱綜合征的病因探討與分析[C].湖南長沙:2007年湖南省豬病防治技術研討會論文集,2007:38-43

[6]談志祥,劉道新,何世成,等.湖南省高致病性豬藍耳病流行情況調查與分析[J].養(yǎng)豬,2007(6):39-40

[7]尹莉亞,劉增再.淺談長沙地區(qū)高致病性豬藍耳病病因分析和防控策略[J].湖南畜牧獸醫(yī),2008(4):23-25

[8]Lopez O J,Osorio F A.Role of neutralizing an tibodies in PRRSV protective immunity[J].Vet Immunol Imm unopathol,2004,102:155-163

[9]Yoon K J,Wu L L.Antibody-dependent enhancemen t(ADE)of porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)infection in pigs[J].V iral Immunol,1996,9:51-63

[10]姜 平,王立鈞.華東部分省市PRRS和偽狂犬病血清流行病學調查[J].畜牧與獸醫(yī),1999,31(6):22-23.