倪沛佩,楊玉榮,梁宏德

(河南農(nóng)業(yè)大學牧醫(yī)工程學院,河南鄭州 450002)

Balb/c小鼠因其敏感性好、世代間隔短,可供營養(yǎng)、遺傳、疾病、組織、胚胎、繁殖、藥理等學科方面的試驗和研究,是一種很好的實驗動物[1]。有關小鼠中耳和內(nèi)耳的文獻較多,但關于小鼠耳廓組織結構的文獻尚未見報道。在全世界范圍內(nèi),人耳廓再造手術是對整形外科醫(yī)生的挑戰(zhàn),目前仍以肋軟骨移植為再造的主體步驟。因此,研究小鼠耳廓組織學結構對于人耳廓再造的研究有一定的借鑒意義。本試驗通過制作常規(guī)石蠟切片,HE染色,顯微鏡下觀察小鼠耳廓組織學結構,增加對小鼠皮脂腺和軟骨細胞的認識和了解,豐富哺乳動物比較組織學內(nèi)容,可為進一步研究小鼠耳廓疾病的診斷、預防以及耳廓疾病模型的建立提供一定組織學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

Balb/c小鼠(9周齡)10只,雌雄各5只,購自上海斯萊克實驗動物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠耳廓取材及固定 麻醉致死后取耳廓置于100mL/L福爾馬林中固定48 h。

1.2.2 切片及染色 常規(guī)石蠟切片及HE染色。

1.2.3 組織觀察 置于Leica DM 2000顯微鏡下觀察拍照。

2 結果

Balb/c小鼠耳廓組織結構從外到內(nèi)分為表皮、真皮、皮下組織、軟骨層四層結構。

2.1 表皮

表皮由復層扁平上皮組成,這種結構在耳廓橫切面的中央部位明顯可見。從外至內(nèi)可見角質(zhì)層、顆粒層、棘細胞層、基層(圖1)。

角質(zhì)層由大量角化的扁平細胞構成,胞核幾乎已消失。顆粒層由2層～3層梭形細胞構成,染色呈紫藍色,胞核深染、固縮。棘細胞層由4層～5層多邊形細胞組成。棘細胞層的淺層細胞逐漸變?yōu)楸馄??；鶎邮亲羁拷嫫さ囊粚蛹毎?呈低柱狀,具有卵圓形的細胞核。

表皮向耳廓緣逐漸變薄,至耳緣處已變?yōu)?層～3層細胞構成(圖2)。

2.2 真皮

真皮由大量的彈性纖維組成,細胞成分較少,可見較小的血管和淋巴管,血管管壁不易辨認(圖3)。真皮淺層由較致密的結締組織構成,這些結締組織與表皮的基膜相接處,形成一些乳頭狀突起,但乳頭較小。真皮深層存在豐富的彈性纖維,其與表皮的表面平行排列。真皮淺層與深層的界限不明顯。

在耳廓橫切面的內(nèi)外側均可見皮脂腺。小鼠皮脂腺為分支泡狀腺,被結締組織分為兩個腺葉,幾乎無腺腔。分泌部充滿多角形細胞,胞核濃染,靠近導管部的細胞胞核大多已消失。在分泌部基膜附近可見體積較小的扁平狀細胞。導管部直接開口于毛囊的頸部(圖4)。耳廓外側的皮脂腺數(shù)量明顯比內(nèi)側的多。

2.3 皮下組織

皮下組織位于真皮的深面,由較薄的疏松結締組織構成。在耳廓橫切面的中央部位稍厚(圖3)。

2.4 軟骨層

軟骨層與皮下組織相連,呈連續(xù)的片狀分布。在靠近耳廓外側的軟骨膜與大量的縱肌束相連,而在另一側未見有肌組織分布。軟骨層內(nèi)未見血管分布。軟骨層內(nèi)彈性纖維數(shù)量很少(圖5)。軟骨細胞由較粗的彈性纖維構成的軟骨膜包裹。軟骨層內(nèi)細胞呈現(xiàn)單層或雙層分布,有些地方軟骨細胞相互擠壓呈現(xiàn)多角形。成熟的軟骨細胞較大,呈圓形或橢圓形,胞質(zhì)出現(xiàn)空泡,胞核受擠壓位于細胞外圍。在靠近軟骨膜的位置可見少量的幼稚軟骨細胞,細胞較小,呈橢圓形。另外少見有成對聚集的軟骨細胞,這些細胞的大小介于成熟和幼稚軟骨細胞之間(圖6)。

3 討論

3.1 軟骨組織

軟骨為僅次于骨而支持動物機體承受壓力的堅硬組織。根據(jù)所含纖維性質(zhì)和數(shù)量不同,軟骨組織分為彈性軟骨、透明軟骨和纖維軟骨等三種類型。彈性軟骨主要分布于機體的耳廓,會厭、咽鼓管和喉等處,具有支持、彈性等特殊的生理功能,其組織發(fā)生來源于中胚層的間充質(zhì),與透明軟骨和纖維軟骨的發(fā)生略有不同。

目前對彈性軟骨的組織學和組織發(fā)生報道較少,對透明軟骨的組織學和組織發(fā)生研究甚多,因為胚胎期間透明軟骨構成大部分四肢骨和中軸骨,以后逐漸被骨代替[1]。對透明軟骨的組織觀察為研究軟骨類和骨的病變以及與血管供應間的關系提供形態(tài)學資料。但是對于彈性軟骨的研究會有利于人們對關于三種類型的軟骨在組織發(fā)生存在的不同和各自的組織發(fā)生特點的問題的解答[2]。

彈性軟骨的形成并不說明耳廓具有彈性,15周前的胎兒耳廓全為貼顱壁,16周后具有彈性的比例數(shù)漸增多,至25周后全為有彈性。胎兒耳廓在17周～18周時彈性纖維開始增多并在軟骨細胞間交叉,形成與軟骨長軸垂直的彈性纖維束,28周在結締組織內(nèi)出現(xiàn)彈性纖維[3]。以上說明耳廓的彈性主要由彈性軟骨和其他組織內(nèi)彈性纖維的成熟度和多少有關。本次試驗選用耳廓發(fā)育正常且具有彈性的成年Balb/c小鼠(9周齡),其軟骨層由較粗的彈性纖維包裹,呈現(xiàn)單層或雙層分布。在一定程度上耳廓的彈性程度和耳廓的組織學和形態(tài)學變化可作為評估動物胎齡的重要特征之一,再結合耳廓的組織發(fā)生特點會具有更大的意義[4]。

本試驗中在Balb/c小鼠耳廓軟骨層內(nèi)未發(fā)現(xiàn)血管,但軟骨層外分布有血管。軟骨細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)系來自軟骨膜的血管滲透。這樣的結構使得軟骨細胞代謝相對緩慢,不易修復。而在人殘耳軟骨層內(nèi)偶見有血管,且與血管相連的軟骨細胞周圍無嗜堿性的軟骨基質(zhì)[5],對于殘耳軟骨的生物化學研究表明其與正常耳軟骨并無明顯差異[6]。形成這種現(xiàn)象的機制目前還需要進一步研究。

小鼠耳廓軟骨是彈性軟骨且薄,這樣便具有較好的支持作用和塑型性。已有的研究表明僅耳廓軟骨細胞能用于構建組織工程化喉管軟骨[7]。所以Balb/c小鼠耳廓軟骨也會具有一定的應用前景[8-9]。綜合所報道的各種動物試驗,耳軟骨在軟骨膜下切除后再生,需要有一定的條件。條件不同,軟骨再生的程度也不相同。最為重要的條件是軟骨膜必須完整。組織學上,軟骨膜可分為兩層,外層為排列緊密的膠原性結締組織,細胞與血管均較少,內(nèi)層為纖維稀疏但細胞與血管豐富的組織,軟骨層內(nèi)含有黏多糖等物質(zhì),但無神經(jīng)和血管,因此要獲得軟骨再生必須把軟骨膜保護好。軟骨再生的另一重要條件是移植床應有良好的血運[10-11]。

近來一些研究也表明M RL/MpJ小鼠的耳廓具有受傷后再生而不形成瘢痕的特性[12],Balb/c小鼠是否具有這種特性還有待于進一步研究。

3.2 皮脂腺

在機體內(nèi)根據(jù)腺體的生理功能和結構不同,可分為內(nèi)分泌腺和外分泌腺[13]。皮脂腺為外分泌腺,光鏡下觀察小鼠的皮脂腺是分支泡狀腺,被結締組織分為兩個腺葉且無腺腔。明顯可見體積相對較大的分泌部和體積相對較小的導管,導管一般比較短,上皮為復層扁平上皮?？拷鼘Ч芴幭偌毎硕嘁严?細胞輪廓已不明顯。分泌部基膜周緣發(fā)現(xiàn)有體積小的未分化的扁平細胞。這些觀察結果與皮脂腺特殊分泌方式密切相關。與家畜相比,小鼠皮脂腺并不具有特別的結構,只是腺葉數(shù)量較少[14]。皮脂腺細胞分泌方式為全漿分泌,即腺細胞在分泌過程中不斷向導管移動,最后崩潰,混同脂類分泌物一起排出。靠近基膜周緣處的體積小的扁平細胞具有增殖能力,不斷產(chǎn)生新的腺細胞以補充因分泌喪失的腺細胞。最近,日本學者Nagai等發(fā)現(xiàn)鼠的皮脂腺細胞以微泡形式分泌皮脂,微泡直徑0.5 nm～5 nm,由許多脂質(zhì)微粒體組成[15]。

皮脂腺最主要的作用是構成一道機體與外界隔離的終末屏障。另外,分泌的皮脂還能抑制某些病原微生物生長[16]。試驗中發(fā)現(xiàn)耳廓外側的皮脂腺數(shù)量明顯較內(nèi)側數(shù)量多。這是因為耳廓外側與內(nèi)側相比和外界接觸較多,皮膚更易干燥,與不利因素的接觸機會更大,需要機體自身的保護和防御更多。這樣決定了在耳廓外側部位會分布有更多的皮脂腺。這種適應環(huán)境的方式在自然界是非常普遍的現(xiàn)象。

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