■ 張春燕 吳清民 中國農業(yè)大學動物醫(yī)學院

母牛繁殖障礙給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經濟損失，嚴重影響著奶牛業(yè)的發(fā)展，其中包括死胎、流產、不孕等繁殖力下降或不能繁殖的異常生理狀態(tài)。引發(fā)的因素很多，如先天性、營養(yǎng)性、管理性和病理性等因素，其中病理性因素包括傳染性因素和非傳染性因素，而傳染性因素是引發(fā)母牛繁殖障礙的重要因素之一。臨床上母牛繁殖障礙表現(xiàn)為妊娠母牛流產、死胎、木乃伊胎，產出無活力弱仔、畸形胎兒和不育。20世紀30年代以前，傳染性因素曾是引發(fā)牛繁殖障礙的最主要原因，如布魯氏桿菌病、彎曲菌病、衣原體病、赤羽病、牛細小病毒病、牛傳染性鼻氣管炎、牛黏膜病、李氏桿菌病、沙門氏菌病、霉菌病、立克次氏體病、新孢子蟲病和弓形蟲病等。當前這些傳染性疾病仍然困擾著廣大的奶牛養(yǎng)殖戶，給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的沖擊。本文主要闡述了臨床上幾種重要的細菌或寄生蟲性病因。

1 布魯氏桿菌病

布魯氏桿菌?。ê喎Q布病，Brucellosis）是由布魯氏桿菌引起的分布于世界各地的人畜共患性傳染病，人類感染布病后長期發(fā)熱、多汗、關節(jié)痛及肝脾腫大，病程長，反復發(fā)作，長期不愈；家畜感染則出現(xiàn)流產和不育，嚴重危害畜牧業(yè)生產和人類健康。這種降低生產性能、危害畜產品安全，降低生活質量的疫病給畜牧養(yǎng)殖業(yè)、人類健康及食品安全帶來了巨大威脅。

1.1 病原

布魯氏桿菌是一種胞內寄生菌，革蘭氏陰性球桿菌。以其侵襲宿主能力分為7個種、19個生物型：馬耳他布魯氏桿菌（B.melitensis）、流產布魯氏桿菌（B.abortus）、豬布魯氏桿菌（B.suis）、綿羊附睪種布魯氏桿菌（B.ovis）、犬布魯氏桿菌（B.canis）、沙林鼠布魯氏桿菌（B.neotomae） 和水生哺乳動物布魯氏桿菌（B.maris）。布魯氏桿菌在自然環(huán)境中生活力較強，在污染的土壤、水以及病畜的分泌物、排瀉物及死畜的臟器中能生存1～4個月，在食品中約生存2個月。60℃加熱30min、70℃加熱5min或日光下曝曬4h可殺死該菌，對常用化學消毒劑較敏感[1]。

1.2 流行病學

目前已知本病易感動物有家畜、家禽、野生動物等60多種，但主要是羊、牛及豬。主要傳染源是病畜及帶菌動物，染疫動物首先在同種動物間傳播，造成帶菌或發(fā)病，隨后波及人類。病畜的分泌物、排泄物、流產物及乳類含有大量病菌，主要經消化道傳播，食用被病菌污染的飼料（食品）、水或生乳以及未熟的肉、內臟等均會感染，也可經呼吸道傳染；此外，還可通過結膜、交配及吸血昆蟲進行傳播。

檢疫實踐表明，動物群出現(xiàn)陽性病畜后，布魯氏桿菌可在群體內迅速擴散、蔓延。如某牛場飼養(yǎng)規(guī)模為157頭，9月突然出現(xiàn)陽性患畜3頭，至11月檢測時則發(fā)現(xiàn)32頭陽性患畜。

動物易感性是隨性成熟年齡增加而增高。實踐中，疫區(qū)內犢牛、羔羊感染率極低，大多數(shù)處女牛第一胎流產后多不再流產。人類普遍具有易感性，患病與職業(yè)有密切關系，獸醫(yī)、畜牧工作者、屠宰工人、皮毛工等明顯高于一般人群。

1.3 臨床特征

家畜感染多為隱性，母畜則出現(xiàn)流產和不育，主要臨床特征是母畜子宮胎膜發(fā)炎導致流產；公畜發(fā)生睪丸炎、關節(jié)炎。人臨床表現(xiàn)為疲乏無力、失眠、長期發(fā)熱、多汗、游走性關節(jié)肌肉疼痛，一側性睪丸炎，局部淋巴結、肝脾腫大等，病程長；轉為慢性型則反復發(fā)作，長期不愈。

1.4 診斷方法

布魯氏桿菌分離培養(yǎng)和鑒定較為困難，且常規(guī)實驗室存在生物安全隱患，因此分子生物學診斷鑒定技術應運而生，如多種方式的聚合酶鏈反應（PCR）技術等。

傳統(tǒng)方法主要是凝集試驗（包括平板凝集試驗、試管凝集試驗），其中平板凝集試驗常用作布魯氏桿菌病普查的初檢，有時可出現(xiàn)非特異性凝集反應，需要試管凝集試驗或其它方法進一步檢測確認。在國際貿易中緩沖布魯氏桿菌抗原凝集試驗過去一直是牛、羊、豬布魯氏桿菌病診斷的指定試驗。

補體結合試驗至今仍是布魯氏桿菌病的重要診斷方法，是牛、羊、綿羊副睪種布魯氏桿菌病診斷的國際貿易指定試驗，作為確診試驗用。

用乳環(huán)試驗（MRT）普查泌乳群布魯氏桿菌病，對大牛群（100頭以上）的敏感性較差。但對近期免疫牛（接種后4個月以內）檢測或檢測非常乳（如含初乳的牛奶，乳腺炎奶）會出現(xiàn)假陽性反應。

酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA）是一種與CFT效果相當?shù)脑囼?，操作更方便，既可以作為確定試驗，又可以作為篩選試驗。但只有牛布魯氏桿菌病的ELISA檢測技術是國際貿易指定試驗。這種ELISA方法不但可用于血清學診斷，還可用于乳汁檢查。豬種布魯氏桿菌和綿羊副睪種布魯氏桿菌也已有成熟的ELISA診斷技術。其它種布魯氏桿菌病上的應用還需進一步改進抗原和積累數(shù)據(jù)。

1.5 防治原則

國外發(fā)達國家控制布病主要措施是采用不免疫、只檢疫、撲殺陽性畜，政府財政補貼的布病根除計劃；我國及許多發(fā)展中國家和地區(qū)仍然在使用弱毒疫苗，采用檢疫與免疫相結合的方式進行布病防控。因此，改進布病疫苗，使其適合不同用途、不同區(qū)域動物是布魯氏桿菌病防治研究的重要領域之一。目前，常用布魯氏桿菌疫苗包括牛用S19疫苗、羊用Rev.1疫苗、牛用RB51疫苗、豬用S2疫苗和羊用M5疫苗[2]。除疫苗免疫外，加強檢疫和綜合性控制措施對人和動物布病控制具有重要的現(xiàn)實意義。

首先定期檢疫畜群，發(fā)現(xiàn)陽性動物及時淘汰。檢出病畜，及時淘汰宰殺；病畜及其流產物必須深埋；對其污染的環(huán)境用20%漂白粉或10%石灰乳消毒；病畜乳及其制品必須煮沸消毒；皮毛消毒后還應放置3個月以上，方準運出疫區(qū)；病畜用過的牧場需經3個月自然凈化后才能供健康畜使用。

加強動物轉運監(jiān)督管理，禁止陽性動物長途轉運。凡是布病檢測陽性動物，一律禁止長途轉運，防止病畜及其病原菌擴散蔓延。對于檢測陰性動物，在運輸?shù)侥康牡睾髴綦x檢疫3個月，陰性者方可混群飼養(yǎng)。

加強職業(yè)人群布病防控專業(yè)知識和技術培訓和宣傳。對與牲畜或畜產品接觸密切者進行防控知識和技術宣傳培訓，便于做好個人防護，從而降低人群發(fā)病率。

2 胎兒彎曲菌病

2.1 病原

胎兒彎曲菌是一種微需氧的革蘭氏陰性菌。分為胎兒亞種（C.fetus subsp. fetus）和性病亞種（C. fetus subsp. venerealis）。胎兒亞種又稱為彎曲菌腸道亞種，可引起牛散發(fā)性流產和羊地方流行性流產，也可感染人，引起流產、早產、敗血癥以及類似布魯氏桿菌病的癥狀。性病亞種是牛生殖道彎曲菌病的病原，主要引起不育，胚胎早期死亡及流產，給養(yǎng)牛業(yè)造成嚴重的經濟損失[3]。

本菌在外界環(huán)境中的存活期短，對干燥、直射日光和一般消毒藥敏感，經紫外線照射5min可被滅活。對酸和熱敏感，pH值為2～3的溶液中5min，或58℃、5min可被殺死。本菌對紅霉素、四環(huán)素等敏感。

2.2 流行病學

患病母牛和帶菌公牛以及康復母牛是主要的傳染源。病菌主要存在于公牛精液、包皮黏膜，母牛生殖道、胎盤或流產胎兒組織中。公牛感染后可帶菌數(shù)月，有的可達6年甚至終身。

自然交配是本病的主要傳播途徑。也可通過人工授精或消化道傳播。羊、犬和人都可感染，但牛是最易感動物之一，各種年齡公母牛均易感，尤以成年母牛最易感。本病多呈地方性流行。

▲ 有關人員正在對奶?！皟刹　边M行檢疫

2.3 臨床特征

病初陰道卡他性炎癥，分泌黏液，10～14天后病菌侵入子宮和輸卵管內，表現(xiàn)為子宮內膜炎和輸卵管炎[4]。母牛由于胚胎早期死亡并被吸收，或因早期流產而表現(xiàn)不育；病牛不斷發(fā)虛情，發(fā)情周期不規(guī)則；但感染后6個月多數(shù)?？稍俅问茉小Ａ鳟a多發(fā)生于懷孕后第5～6個月，流產率為5%～20%[5]。

2.4 診斷方法

根據(jù)病牛出現(xiàn)暫時性不育，發(fā)情期延長，發(fā)情周期不規(guī)律，流產等癥狀，初診可懷疑此病。確診時，取胎膜子葉涂片，分別進行革蘭氏染色和科茲洛夫斯基染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)螺旋狀細菌可進一步鑒定；或取流產胎兒胃液、心血、肺、羊水接種于鮮血瓊脂，10% CO2環(huán)境下培養(yǎng)3～9天，對疑似菌落進一步用PCR方法鑒定病原[6]。

血清學檢查時可用陰道黏液凝集反應，即取子宮頸部黏液，用生理鹽水或0.3%福爾馬林磷酸鹽緩沖液稀釋，離心去沉淀，取上清液做系列稀釋后各加等量抗原，37℃作用24～40h，觀察結果，凝集價達1：25者判為陽性[7]。

2.5 防治原則

牛群爆發(fā)本病時應暫停配種3個月。病?？捎每咕剡M行局部治療。彎曲菌對鏈霉素、四環(huán)素類抗生素和紅霉素等敏感，臨床上使用紅霉素、四環(huán)素、慶大霉素、復方新諾明、黃連素、呋喃唑酮等藥物可以治愈。對患有子宮炎母牛可在子宮內投入或連續(xù)5天注射鏈霉素和青霉素。

滅活菌苗（加費氏佐劑）接種，可以阻止帶菌，使公牛的自然傳染能力終止。據(jù)報道[8]，用疫苗接種應在配種季節(jié)到來前進行2次，然后每年在臨近配種季節(jié)進行強化接種，可以保證在配種季節(jié)有高度的免疫力。

3 沙門氏菌病

3.1 病原

牛流產沙門氏菌病是由流產沙門氏菌引起的一種以不育、胚胎早期死亡和流產為特征的傳染病。病原主要是鼠傷寒沙門氏菌和都柏林沙門氏菌等，其在外界環(huán)境中的生活力較強，在普通水中雖不易繁殖，但可生存2～3周，在糞便中可存活1～2個月。

3.2 流行病學

病畜和帶菌畜是傳染源。易感牛食入污染飼料、飲水等，或吸入含菌飛沫，通過消化道和呼吸道感染。亦可通過病畜與健康畜的交配或用病畜精液人工授精而感染。各種年齡均可感染，但犢牛感染多呈敗血癥型。該病往往是其它疾病的繼發(fā)癥或并發(fā)癥。應激、營養(yǎng)不足、長途運輸?shù)瓤梢源龠M本病的發(fā)生。

3.3 臨床癥狀

主要發(fā)生在10～30日齡犢牛。牛群中有帶菌母牛時，犢?？捎诔錾?8h開始拒食、臥地不起、迅速衰竭，多數(shù)犢牛病初體溫達40～41℃，之后排出灰黃色液狀糞便，混有黏液和血絲，病程5～7天，死亡率有時達50%[9]。

成年牛多為隱性感染，孕牛可能出現(xiàn)流產等。母牛流產多發(fā)生在懷孕第4～9個月，常見于第6個月。流產后常見胎衣滯留，并出現(xiàn)子宮炎、乳房炎、關節(jié)炎、肺炎等繼發(fā)癥狀。

3.4 診斷方法

根據(jù)病史和病牛癥狀，可做出初步診斷。確診還需要無菌采取病死牛肝、脾組織進行涂片，革蘭氏染色鏡檢或取病死牛肝、脾、腸系膜淋巴結分別接種于普通瓊脂平板培養(yǎng)，取典型菌落進行鑒定。

3.5 防治原則

對病牛隔離飼養(yǎng)，病牛污染的圈舍、飼槽，水具及周圍環(huán)境等用3%～5%火堿消毒或紫外線照射進行消毒；保持飼料及飲水清潔，維持牛群良好的衛(wèi)生環(huán)境，減少應激；平時對棚舍、用具等進行定期和不定期消毒；對犢牛進行補飼，提高機體的免疫力。

發(fā)病牛治療原則是抗菌消炎、補充體液、調整體內電解質平衡，改善胃腸功能，如靜脈注射敏感抗生素。有酸中毒者靜脈注射5%的NaHC[10]。

4 牛衣原體性流產

牛衣原體性流產是由鸚鵡熱衣原體引起的一種地方流行性傳染病，主要臨床特征是妊娠母牛流產、早產、死產或產無活力犢牛。奶牛產奶量大幅度減少，造成巨大的經濟損失。

4.1 病原

鸚鵡熱衣原體為革蘭氏染色陰性，胞內寄生。對感染動物子宮內膜、胎盤具有很強的親嗜性，使其產生炎癥引起流產[11]；對四環(huán)素類抗生素、氯霉素和紅霉素敏感；對脂溶劑、去污劑和季銨鹽敏感，56℃、5min可滅活。

4.2 流行病學

鸚鵡熱衣原體能感染100多種畜禽，感染動物是主要傳染源，流產母牛在流產或產犢時將大量病原體散播到外界環(huán)境中，通過消化道和呼吸道傳播給健康牛，亦可通過交配或人工授精進行傳播。流產后母牛一般不會再次流產，但長期排菌。冬春季節(jié)多發(fā)。

4.3 臨床癥狀

各個孕期和胎次的母牛都可發(fā)病，一般頭胎母?；蛉焉?～9月齡常發(fā)，發(fā)病前母牛沒有任何特殊征兆，產出死胎或無活力的犢牛，胎衣排出遲緩，有的繼發(fā)子宮內膜炎、乳房炎。嚴重者出現(xiàn)全身膿毒敗血癥甚至死亡。青年公牛感染常表現(xiàn)為精囊炎，精囊、副性腺、附睪和睪丸慢性炎癥，精液品質下降，有的睪丸萎縮[12]。

4.4 診斷方法

牛衣原體病是一種多系統(tǒng)性疾病，根據(jù)臨床癥狀和病變難以確定診斷，主要依據(jù)實驗室檢查方法予以確診。實驗室檢查時，可無菌采集流產母牛胎衣以及流產胎兒肝、脾、肺及胃液，公牛精液及病牛血清，進行檢測。

4.4.1 病原學檢測方法

主要有以下幾種：①涂片染色鏡檢，即用病料做涂片進行姬姆薩染色后鏡檢，在油鏡下可見衣原體原生小體（EB）被染成紫紅色，網狀體（RB）被染成藍紫色；②病原分離培養(yǎng)，即將鏡檢發(fā)現(xiàn)的疑似有衣原體的無菌病料稀釋、離心取上清卵黃囊內接種于7日齡雞胚，收集接種后3～10日死亡雞胚卵黃膜繼續(xù)傳代，直到接種雞胚規(guī)律性死亡[13]；若卵黃囊充血、雞胚卵黃囊膜涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)大量衣原體原生小體可確定為陽性；③取無菌病料懸液接種McCoy、Hela和Vero細胞，2～7天后姬姆薩染色鏡檢。④將無菌采集的病料經腹腔接種3～4日齡小鼠，若腹腔積累纖維蛋白滲出物，脾臟腫大，則可取腹腔滲出物和脾臟染色鏡檢。⑤也可以將上述鏡檢或分離的疑似培養(yǎng)物經PCR等分子生物學方法進行鑒定。

4.4.2 血清學檢測方法

主要包括補體結合試驗（CF）、間接血凝試驗（IHA）、免疫熒光試驗（IF）、瓊脂擴散試驗（AGID）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等。其中，補體結合試驗是國際口岸檢疫動物衣原體血清抗體的推薦方法。

4.5 防治原則

4.5.1 建立嚴格的衛(wèi)生消毒制度

消毒劑可以選用2%苛性鈉或甲醛溶液；在產犢季節(jié)要嚴格隔離流產母牛，深埋或焚燒其胎衣和胎犢，并每天對產房、場地及周圍環(huán)境嚴格消毒；流產和產弱犢的母牛應予淘汰。

4.5.2 藥物預防和治療

可選用敏感抗生素進行治療，而流產母牛除應用抗生素全身治療外，還應向子宮內投藥。

4.5.3 疫苗免疫預防

對繁殖母牛群用牛流產衣原體滅活苗，在每次配種前或后1個月免疫1次；種公牛每年免疫2次，發(fā)病的種公牛要及時淘汰。

5 新孢子蟲病

新孢子蟲是由犬新孢子蟲引起的一種原蟲病，新孢子蟲病寄生的宿主廣泛，如犬、奶牛、肉牛、水牛、牦牛、綿羊、山羊、馬、鹿、豬、猴、駱駝、鼠、貓、兔等，但它對牛的危害最嚴重，主要造成母牛流產、死胎及新生兒的運動神經系統(tǒng)疾病。據(jù)報道，我國各省都有不同程度的新孢子蟲病流行，給當?shù)匦竽翗I(yè)（主要是養(yǎng)牛業(yè)）造成巨大的經濟損失。

5.1 病原

目前認為新孢子蟲隸屬于原生動物門、孢子蟲綱、球蟲亞綱、真球蟲目、新孢子蟲屬。其發(fā)育階段包括速殖子、組織胞囊、卵囊、裂殖體、裂殖子等。大多數(shù)速殖子寄生在宿主細胞胞漿內，分裂形成蟲體集落，內含上百個蟲體，速殖子對宿主細胞有很強的侵入能力；組織胞囊主要寄生在腦、脊髓、神經和視網膜中；無感染性的卵囊隨感染病犬的糞便排出體外，24min后發(fā)育成有感染性的孢子化卵囊[14]。

5.2 流行病學

現(xiàn)已經證實犬是新孢子蟲的終末宿主，奶牛和肉牛作為易感的中間宿主。易感動物可通過采食被新孢子蟲卵囊污染的飼料或飲水后感染，也可通過哺乳而感染。可經胎盤傳播，但能否經交配傳播，還未得到證實[15]。

5.3 臨床癥狀

患牛四肢無力，彎曲，關節(jié)拘謹，后肢麻痹，運動失調；頭部明顯震顫，頭蓋骨變性；眼瞼反射遲鈍，角膜輕度渾濁。懷孕母牛發(fā)生流產或產死胎、木乃伊胎或弱仔，可能反復流產。先天感染的犢牛表現(xiàn)神經癥狀，不能站立，四肢虛弱或僵直。

5.4 診斷方法

生前診斷主要根據(jù)臨床癥狀。當母畜出現(xiàn)流產、死產，新生胎兒出現(xiàn)癱瘓、畸形、共濟失調、肌肉萎縮、抽搐或其它神經癥狀，特別是一窩或多窩同時出現(xiàn)此類癥狀時應懷疑此病。死后診斷主要檢查病變組織中有無新孢子蟲胞囊，重點檢查中樞神經系統(tǒng)、肌肉和肝臟。

血清學診斷方法包括間接熒光抗體試驗（IFAT）、ELISA。這些方法具有高度的特異性和穩(wěn)定性，操作簡便，可用于臨床診斷和流行病學調查。

5.5 防治原則

目前尚無有效的疫苗和藥物，有人在疾病早期試用甲氧芐苯胺嘧啶、磺胺嘧啶和乙胺嘧啶等抗弓形蟲藥物進行治療有一定效果。

由于生活史尚不清楚，目前還沒有有效的控制方法。常規(guī)預防措施主要是通過流行病學檢測，及時隔離、淘汰感染牛，凈化牛群；加強引進牛種檢疫，隔離飼養(yǎng)，確定無感染后方可入群；減少牛與犬直接接觸的機會，切斷傳播途徑。

6 總結

隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展，奶牛繁殖障礙類傳染病將會嚴重制約我國繁殖牛群的數(shù)量和質量，迫切需要建立有效的疫病監(jiān)測、預警預報體系和預防控制措施。為此，只有加大研究力度，通過技術集成或創(chuàng)新，迅速建立上述傳染病的標準診斷檢測技術手段，研制相關疫苗制品和治療藥物，利用技術推廣應用體系摸清流行規(guī)律，才能提高我國奶牛群繁殖障礙相關傳染病的防控應急能力，將其控制到最低水平。

〔本文得到現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系建設專項資金資助；國家科技部科技支撐計劃項目（2006BAD04A05203）；教育部長江學者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃項目（IRT0866）〕

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