消脂護肝片中總黃酮的含量測定

陳蕾，姜林

（新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000）

消脂護肝片中總黃酮的含量測定

陳蕾*，姜林

（新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000）

目的：建立消脂護肝片中總黃酮的含量測定方法。方法：采用分光光度法，以蘆丁為對照品，對其進行絡合顯色，在510 nm波長處測定吸光度，從而測定消脂護肝片中總黃酮的含量。結果：線性范圍在0.008～0.08 mg·mL－1（r＝0.999 7），平均回收率為97.0%，RSD＝1.84%（n＝6）。結論：該法簡便易行、重現(xiàn)性好、結果可靠，可用于該制劑的質量控制。

消脂護肝片；總黃酮；分光光度法

消脂護肝片為新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院院內制劑。由郁金、赤芍、白芍、丹參、山楂、決明子、瓜蔞、海藻、昆布、香附、雞內金、黨參、西紅花13味中藥組成，具有疏肝、行氣、活血的功能，用于高血脂癥、脂肪肝、早期肝纖維化。主要化學成分有黃酮類、苷類、有機酸、生物堿類、多糖等。該制劑原質量標準除片劑檢查通項外，只有芍藥苷的薄層色譜。本實驗采用分光光度法對總黃酮進行含量測定，通過對消脂護肝片中總黃酮的含量測定，為該制劑的質量標準提供定量依據(jù)?，F(xiàn)將結果報道如下。

1 儀器與試藥

UV-cintra20紫外分光光度計（澳大利亞GBC scientific Equipment），蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100080-200707），消脂護肝片（批號080707，081223，、090511），水為本院實驗中心超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液制備［1-2］

精密稱取蘆丁對照品40 mg，置100 mL容量瓶中，加入甲醇50 mL溶解，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.4 mg·mL－1的對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備［3-4］

精密稱取樣品1 g，加入70%乙醇50mL，超聲提取30 min（功率250 W，頻率59 KHz），放冷，過濾待用，作為供試品溶液。

2.3 波長的選擇［5-6］

對蘆丁對照品溶液和供試品溶液從400～800 nm進行掃描，得到紫外－可見吸光圖譜，見圖1。從圖1可知510 nm為最大吸收波長。

圖1 蘆丁及供試品溶液的紫外-可見圖譜

2.4 標準曲線的制備［7-8］

精密量取對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置于25 mL容量瓶中，各加水至6 mL。加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，使混勻，放置6 min；加入10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min；加入氫氧化鈉試液10 mL，再加入水至刻度，搖勻，放置15 min。在510 nm的波長處測定吸收度。以吸收度為橫坐標，濃度為縱坐標，繪制標準曲線，并計算得回歸方程Y＝0.053 7X＋0.001 0（r＝0.999 7），表明蘆丁對照品溶液在0.008～0.08 mg·mL－1呈良好的線性關系。

2.5 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別于配制后0，10，20，30，40，50，60，90 min，依照“2.4”項方法測定吸光度，計算RSD＝2.33%，結果表明溶液制備后90 min穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗

取同一供試品溶液6份，依照“2.4”項方法測定吸光度，計算RSD＝1.39%，結果表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗

取供試品溶液1份，依照“2.4”項方法重復測定吸光度值6次，計算RSD＝0.40%，結果表明重復性良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗

制備同一濃度供試品溶液6份，依照“2.4”項方法測定吸光度，計算RSD＝0.98%，結果表明重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取樣品1.0 g，按2.2項下方法制備成供試品溶液，分別精密量取供試品溶液1mL，共6份，每份分別加入一定量蘆丁對照品，按2.4項下方法測定吸光度，計算回收率，結果見表1。

表1 蘆丁對照品加樣回收率

2.10 樣品含量測定

取批號080707，081223，090511的消脂護肝片，分別按2.2項下方法制備成供試品溶液，各精密量取1 mL按2.4項下方法測定吸光度，代入回歸方程計算消脂護肝片中總黃酮含量，結果見表2。

表2 樣品中總黃酮含量測定

根據(jù)以上結果，確定該制劑中總黃酮含量應不低于35 mg·g－1。

3 討論

目前，文獻報道總黃酮的含量測定方法［1-9］，主要有紫外分光光度法、HPLC、熒光光度法等。本試驗采用分光光度法測定消脂護肝片中總黃酮的含量，簡便易行、重現(xiàn)性好、結果可靠。本實驗以蘆丁為對照品，經(jīng)波長掃描確定最大吸收波長510 nm為檢測波長。

黃酮類化合物易溶于甲醇、乙醇等溶劑，甲醇毒性大，且浸透能力強，提取范圍廣，雜質較多，故采用乙醇做溶劑提取消脂護肝片中總黃酮。通過比較超聲提取、回流提取，結果表明超聲提取效率明顯高于回流提取，且超聲提取時間短，操作方便，而且不用加熱，避免高溫對黃酮結構的影響，故采用超聲提取法。

在實驗中，我們通過考察樣品、蘆丁對照品在400～800 nm波長范圍的光譜圖，結果樣品與蘆丁對照品的吸收光譜在510 nm為一平峰，故選擇510 nm為測定波長。在實驗中我們發(fā)現(xiàn)供試品溶液的顯色受溫度影響且隨時間有變化，因此比色測定應平行操作，并按照規(guī)定時間進行。黃酮類化合物母核上多帶有酚羥基，對光和空氣中的氧很敏感，其溶液長時間久置后吸光度會下降，因此，待測液不宜久放，并避光低溫保存。

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［5］宋永強，湛樂剛.分光光度法測定裸花紫珠片中總黃酮含量［J］.海南醫(yī)學，2005，16（6）：152.

［6］謝鳴，彭鑲心，劉超，等.紫外分光光度法側定夏枯草微丸中總黃酮的含量［J］.西南民族大學學報，2006，32（1）：136.

［7］郭亞健，范麗，王曉強.關于NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測定總黃酮方法的探討［J］.藥物分析雜志，2002，22（2）：97-99.

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［9］楊書良.HPLC測定雙果膠囊中總黃酮的含量［J］.中國中藥雜志，2004，29（6）：586.

Determination of Total Flavones in Xiaozhihugan Tablets

Chen Lei，Jiang Lin
（Traditional Chinese Medical Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi Xinjiang830000，China）

Objective：To establish ultraviolet sepctrophotometry for the determination of total flavones in Xiaozhihugan tablets.Methods：Quercetin was selected as reference material，and the samples were determined at510 nm.Results：The linear range for quercetin was 0.008～0.08 mg·mL－1（r＝0.999 7）.The recovery rate was 97.0%，RSD＝1.84%（n＝6）.Conclusion：This method is easy to handle with good accuracy and reproducibility，and is suitable for the quality control of Xiaozhihugan tablets.

Xiaozhihugan tablets；Total Flavones；Sepctrophotometry

*陳蕾，E-mail：leibaobao＠sina.cn

2010-06-05）