HPLC法測定羅紅霉素片中羅紅霉素含量不確定度評估

測量不確定度是表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)[2][3]。在檢測、校準(zhǔn)實驗室中，用測量不確定度對測量結(jié)果及其質(zhì)量進(jìn)行評定和表示已得到越來越廣泛的應(yīng)用。筆者將不確定度的評定與方法引入到HPLC法測定羅紅霉素含量中，通過建立數(shù)學(xué)模型，找出影響測量結(jié)果不確定度的各種因素，并對這些因素進(jìn)行了逐項分析及評定。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀（包括2998二極管陣列檢測器，Empower色譜工作站）；BP211D電子天平（德國Sartorius Basicplus）；BT224S電子天平（北京 Sartorius）；羅紅霉素片（北京康蒂尼藥業(yè)有限公司）；羅紅霉素對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量：94.1%，批號：100113-200603）；乙腈色譜純。

2 檢測方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Symmetry? C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動相為0.067mol/L磷酸二氫銨溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.5）-乙腈（65：35）；檢測波長為210nm；室溫；流速：1.0ml/min。

2.2 對照品溶液的制備 取羅紅霉素對照品25mg，精密稱定，置25ml容量瓶中，加流動相15ml，超聲處理20分鐘使充分溶解，加流動相至刻度，搖勻即得。

2.3 供試品溶液的制備 供試品溶液的制備：取羅紅霉素20片，精密稱定，研細(xì)，混勻，取細(xì)粉70mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加流動相30ml，超聲處理20分鐘使之充分溶解，加流動相至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定 在相同條件下分別應(yīng)用HPLC法測定供試品溶液與對照品溶液。按含量計算公式計算羅紅霉素含量。羅紅霉素含量測量結(jié)果由2次測量的平均值給出。

3 測量結(jié)果的不確定度

4 討論

從以上分析評定中可以看出，在HPLC法測定羅紅霉素含量的實驗中，測量結(jié)果不確定度分量主要來自于色譜峰面積重現(xiàn)性和實驗溫度的影響。因此，實驗室一方面要投入重現(xiàn)性較好、最大允差小的設(shè)備，維持穩(wěn)定的實驗室環(huán)境，另一方面檢驗人員應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)及操作規(guī)程進(jìn)行檢測，注意處理操作的一致性，這樣便可進(jìn)一步降低測量結(jié)果的不確定度。

通過對含量測定結(jié)果進(jìn)行不確定度評定，計算出置信水平為95%的擴展不確定度U，最終的含量測定結(jié)果以x±U的形式報告，這樣就科學(xué)地將含量測定過程中所有的誤差都體現(xiàn)在最終的試驗結(jié)果中，檢驗結(jié)果也由單一的數(shù)值變?yōu)橐粋€范圍，從而保證了我們最終的檢驗結(jié)論更加科學(xué)、更有說服力。