基于在線二維色譜的不同生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸的比較蛋白質(zhì)組分析

高 亮, 喬曉強(qiáng), 梁 振, 張麗華＊, 霍玉書, 張玉奎

(1.中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所,中國(guó)科學(xué)院分離分析化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,國(guó)家色譜研究分析中心,遼寧大連116023;2.中國(guó)科學(xué)院研究生院,北京100039;3.美國(guó)得克薩斯大學(xué),圣安東尼奧78229-3900)

基于在線二維色譜的不同生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸的比較蛋白質(zhì)組分析

高 亮1,2, 喬曉強(qiáng)1,2, 梁 振1, 張麗華1＊, 霍玉書3, 張玉奎1

(1.中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所,中國(guó)科學(xué)院分離分析化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,國(guó)家色譜研究分析中心,遼寧大連116023;2.中國(guó)科學(xué)院研究生院,北京100039;3.美國(guó)得克薩斯大學(xué),圣安東尼奧78229-3900)

建立了基于在線二維弱陰離子交換色譜-反相液相色譜(2D-WAX-RPLC)的蛋白質(zhì)分離系統(tǒng),并用于不同生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸的比較蛋白質(zhì)組分析。以5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的混合物為樣品,考察了系統(tǒng)的重現(xiàn)性。通過改變標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)之間的濃度比,研究了該系統(tǒng)進(jìn)行蛋白質(zhì)相對(duì)定量的能力。在此基礎(chǔ)上,針對(duì)4個(gè)不同生長(zhǎng)時(shí)期的鹿茸樣品,分別采用5種不同的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)提取,經(jīng)2D-WAX-RPLC分離后,收集各生長(zhǎng)時(shí)期對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)的峰高最大比超過2的組分。酶解后,采用微柱反相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(μRPLC-MS/MS)進(jìn)行肽段的分離鑒定;共從9個(gè)差異蛋白質(zhì)峰中鑒定到了22個(gè)差異蛋白質(zhì)。研究結(jié)果表明,利用基于蛋白質(zhì)水平的在線二維液相色譜分離技術(shù)找尋差異蛋白質(zhì),具有重現(xiàn)性好、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn),可用于開展比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究。

在線二維液相色譜;鹿茸;蛋白質(zhì)組;不同生長(zhǎng)時(shí)期;比較蛋白質(zhì)組學(xué)

Abstract:A method of on-linetwo-dimensional weak anion exchange Chromatography-reversed-phase liquid Chromatography(2D WAX-RPLC)was established,and applied for the comparative proteome study of antlers with four different grow ing stages.A five-p rotein-mixture was used as the sample to evaluate the reproducibility of the system.In addition,the capacity of such a system for the relative quantitative analysis was demonstrated by analyzing protein mixtures with different concentration ratios.Furtherm ore,five different lysis buffers were used to extract proteins from antlers with different growing stages.After the protein separation with2D WAX-RPLC,the fractions with maximum peak height ratio larger than2were collected,digested,and further identified by micro-reversed-phaseliquid Chromatography-tandem mass spectrometry(μRPLC-MS/MS).In total,22differential proteins were identified from9 fractions.Our experimental results dem onstrated that2D WAX-RPLC based protein separation has the advantages of good rep roducibility and automation,and might be a complementary method of two-dimensional gel electrophoresis for comparative proteome study.

Key words:on-line two-dimensional liquid Chromatography(2D LC);antler;proteom e;different growing stages;comparative proteomics

鹿茸是哺乳動(dòng)物獨(dú)立的最迅速的再生器官。它可在60d內(nèi)迅速生長(zhǎng)發(fā)育成含有強(qiáng)大的血管系統(tǒng),并具有成骨、造血、神經(jīng)、表皮生長(zhǎng)、生毛等功能的成熟器官[1,2];在成熟后,血管又可在3～5d大量凋亡,同時(shí)軟骨迅速骨化[3]。鹿茸從新生到凋亡是各種大分子活性蛋白質(zhì)與小分子輔助因子共同作用的結(jié)果。因此,作為神經(jīng)、血管、結(jié)締組織、軟骨、皮膚和骨骼協(xié)調(diào)的快速再生模型,鹿茸的研究一直受到人們的關(guān)注[4,5]。以鹿茸為模型,開展不同生長(zhǎng)階段中鹿茸蛋白質(zhì)變化的研究,可以幫助我們?cè)诙虝r(shí)間內(nèi)探討生命體修復(fù)與再生現(xiàn)象。

近年來,研究不同生物學(xué)狀態(tài)下蛋白質(zhì)表達(dá)差異的比較蛋白質(zhì)組學(xué)已成為后基因組時(shí)代的研究熱點(diǎn)之一[6]。傳統(tǒng)的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究主要基于二維凝膠電泳(2D-PAGE)技術(shù)[7,8]。在完成蛋白質(zhì)分離后,用考馬斯亮藍(lán)染色法或銀染法對(duì)蛋白質(zhì)染色,切取感興趣的差異組分,酶解后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定[9-11]。然而該方法不僅靈敏度低、重現(xiàn)性差,而且操作費(fèi)時(shí),容易造成樣品損失。U nlu等[12]提出的雙向差異凝膠電泳(D IGE)正逐漸成為比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主流技術(shù)。該方法主要采用3種不同的熒光染料(Cy2、Cy3、Cy5)對(duì)擬比較的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行熒光標(biāo)記[13],等量混合后在同一塊膠上運(yùn)行D IGE分離。經(jīng)不同波長(zhǎng)掃描,即可得到3個(gè)樣品的圖像,并通過蛋白點(diǎn)不同熒光信號(hào)間的比值來確定差異蛋白質(zhì)[14-18]。盡管該方法的靈敏度和重現(xiàn)性較傳統(tǒng)的2D-PAGE已有提高,但其在極酸、極堿、極大、極小和極疏水性等蛋白質(zhì)的分離方面仍有局限性[19,20]。此外,Cy2、Cy3和Cy5的水溶性較差,在標(biāo)記過程中可能引起蛋白質(zhì)沉淀。這都會(huì)限制該技術(shù)在比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用。

另一類比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究的常用技術(shù)是基于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)的技術(shù)。目前主要通過對(duì)標(biāo)簽修飾的肽段進(jìn)行分離、鑒定和比較。常用的標(biāo)記方法可分為同位素親和標(biāo)簽(ICAT)技術(shù)和相對(duì)和絕對(duì)定量同位素標(biāo)記(iTRAQ)技術(shù)。前者采用含輕重同位素和生物素的親和標(biāo)簽標(biāo)記半胱氨酸,利用親和素富集后進(jìn)行HPLC-MS/MS分析[21];后者利用能與氨基反應(yīng)的同位素標(biāo)簽同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品的酶解產(chǎn)物標(biāo)記后,再根據(jù)HPLC-MS/MS的分析結(jié)果進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[22,23]。這兩種方法均是在肽段水平上對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析。然而,和蛋白質(zhì)水平的分離相比,肽段的數(shù)目巨大,影響了分離鑒定的分辨率和準(zhǔn)確性[24,25]。

本文發(fā)展了一種基于二維弱陰離子交換色譜-反相液相色譜(2D-WAX-RPLC)的蛋白質(zhì)水平分離的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法,并將其成功應(yīng)用于不同生長(zhǎng)時(shí)期的鹿茸蛋白質(zhì)的差異分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

WAX采用Jasco HPLC儀,包括四元梯度泵(PU-2089Plus)、自動(dòng)進(jìn)樣器(AS-2055Plus)、紫外檢測(cè)器(UV-2075Plus)和LC-N etⅡ/ADC控制系統(tǒng)(Jasco公司,日本)。蛋白質(zhì)分離的WAX色譜柱為TSKgel D EAE-5PW(75mm×7.5mm,100nm(1 000)(TOSOH公司,日本)。

自動(dòng)十通閥為Rheodyne MX7960(Upchurch公司,美國(guó))。捕集柱為自填裝C8柱(50mm×4.6 mm,5μm,30nm(300A。),大連思譜精工公司)。

RPLC分離在Jasco HPLC儀(包括泵(PU-1580)、梯度控制單元(LG-1580-04)和紫外檢測(cè)器(UV-1575))上進(jìn)行。蛋白質(zhì)分離的RPLC色譜柱為自填裝C8柱(250mm×4.6mm,5μm,30nm(300),大連思譜精工公司)。

質(zhì)譜儀為L(zhǎng)CQ DUO離子阱質(zhì)譜(Therm o Fisher公司,美國(guó)),與paradigm GM4μHPLC系統(tǒng)(M ichrom B ioresources Inc.,美國(guó))聯(lián)用。肽段分離的μRPLC色譜柱為自填裝C18柱(50mm×0.3 mm,5μm,20nm(200A。),天津博納公司)。

三羥甲基氨基甲烷(Tris)、鹽酸胍、二硫蘇糖醇(D TT)、細(xì)胞色素C(相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為14 000,p I=9.6)、肌紅蛋白(Mr=16 890,p I=7.2)、碳酸酐酶(Mr=29 023,p I=6.6)、牛血清白蛋白(BSA,Mr=69 000,p I=5.8)、β-乳球蛋白(Mr=35 000,p I=5.1)和胰蛋白酶購(gòu)自美國(guó)Sigm a公司;三氟乙酸(TFA)購(gòu)自比利時(shí)Acros公司;乙二胺四乙酸鈉(ED TA)、HC l和N aOH購(gòu)自天津科密歐試劑公司;色譜純乙腈購(gòu)自德國(guó)M erck公司;實(shí)驗(yàn)用水經(jīng)法國(guó)M illi-Q系統(tǒng)純化。

生長(zhǎng)期分別為15,30,50和90d的馬鹿鹿茸采自撫順清原馬鹿養(yǎng)殖場(chǎng)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備

分別配制6m g/mL的細(xì)胞色素C、肌紅蛋白、碳酸酐酶、牛血清白蛋白和β-乳球蛋白儲(chǔ)備液,等體積混合后用于評(píng)價(jià)2D-WAX-RPLC系統(tǒng)。

依次記生長(zhǎng)期分別為15,30,50和90d的馬鹿鹿茸為生長(zhǎng)期1,2,3和4。將鹿茸在液氮條件下冷凍后研磨粉碎,分別加入1.2mol/L HCl、2 mol/L N aOH、100mmol/L Tris+6mol/L鹽酸胍、100mmol/L Tris+6mol/L鹽酸胍+0.5mol/L ED TA以及100mmol/L Tris+6mol/L鹽酸胍+0.5mol/L ED TA+65mmol/L D TT5種溶液(均含1%蛋白酶抑制劑Cocktail Set I)(按1g鹿茸加入4mL的比例加入每種溶液)。在4℃下提取蛋白質(zhì)24h,依次標(biāo)記為蛋白質(zhì)提取液1,2,3,4和5。離心后取上清液過0.45μm濾膜,并用B radford法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度[26]。將5種蛋白質(zhì)提取液等體積混合并除鹽后,用WAX初始流動(dòng)相復(fù)溶。

1.2.2 2D-WAX-RPLC分離

利用十通閥連接WAX和RPLC,并采用兩根C8捕集柱交替地將第一維洗脫組分捕集后,送入RPLC色譜柱進(jìn)行進(jìn)一步的分離,系統(tǒng)示意圖見圖1。

圖1 2D-WAX-RPLC系統(tǒng)示意圖Fig.1 Schem a tic d iagram of2D WAX-RPLC

采用5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的混合物評(píng)價(jià)2D-WAXRPLC系統(tǒng)的重現(xiàn)性。第一維WAX的色譜條件:流動(dòng)相A為50mmol/L Tris-HC l(pH8.0),流動(dòng)相B為50mmol/L Tris-HC l+1mol/L N aC l(pH8.0);流速1mL/m in;4個(gè)臺(tái)階梯度依次為10%B,25%B,40%B和55%B;檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。第二維RPLC的色譜條件:流動(dòng)相A為水(含0.1%TFA),流動(dòng)相B為95%乙腈(含0.1%TFA);流速1 mL/m in;梯度洗脫程序:0-10m in,5%B;10-40 m in,30%B-60%B;檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。

在分離不同生長(zhǎng)時(shí)期的鹿茸蛋白質(zhì)樣品時(shí),第一維WAX的色譜條件:流動(dòng)相A為50mmol/L Tris-HCl(pH9.0),流動(dòng)相B為50mmol/L Tris-HC l+1mol/L N aCl(pH9.0);流速1mL/m in;9個(gè)臺(tái)階梯度依次為0%B,4%B,8%B,12%B,20%B,30%B,40%B,50%B和100%B;檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。第二維RPLC的色譜條件:流動(dòng)相A為水(含0.1%TFA),流動(dòng)相B為95%乙腈(含0.1%TFA);流速1mL/m in;梯度洗脫程序:0-10 m in,2%B;10-70m in,25%B-60%B;70-80 m in,80%B;檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。

1.2.3 差異蛋白質(zhì)的鑒定

根據(jù)2D-WAX-RPLC分離的二維譜圖,選取對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)峰的峰高最大比超過2的餾分進(jìn)行收集,作為4個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期之間有顯著差異的蛋白質(zhì)。將這些餾分凍干后重溶于50mmol/L Tris-HC l(pH 8.3)緩沖液,按照蛋白質(zhì)與酶的質(zhì)量比為50∶1的比例加入胰蛋白酶,于37℃振蕩酶解24h后,加入甲酸終止酶解反應(yīng)。

采用μRPLC-MS/MS分離鑒定差異蛋白質(zhì)的酶解產(chǎn)物,重復(fù)進(jìn)樣3次。色譜條件:流動(dòng)相A為0.1%甲酸+98%水+2%乙腈,流動(dòng)相B為0.1%甲酸+98%乙腈+2%水;流速5μL/m in;梯度洗脫程序:0-10m in,0%B;10-55m in,0%B-40%B;55-60m in,40%B-80%B。質(zhì)譜采用正離子掃描模式,噴霧電壓2.0kV,加熱毛細(xì)管溫度150℃,掃描范圍:m/z400～2 000;二級(jí)質(zhì)譜采集選擇數(shù)據(jù)依賴模式,取一級(jí)質(zhì)譜圖中豐度最高的兩個(gè)離子作為母離子,碰撞能量35%。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

質(zhì)譜數(shù)據(jù)采用B iow orks3.1檢索系統(tǒng)(Therm o Fisher公司)進(jìn)行檢索。哺乳動(dòng)物數(shù)據(jù)庫(kù)下載自美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(NCB I)網(wǎng)站(2007年7月11日)。母離子和子離子質(zhì)量容忍范圍分別為2和1。采用胰蛋白酶全酶切對(duì)肽段結(jié)果進(jìn)行搜索,最高允許兩個(gè)漏切位點(diǎn)。搜索結(jié)果采用Xcorr函數(shù)進(jìn)行過濾,單電荷離子Xcorr≥1.90,雙電荷離子Xcorr≥2.20,三電荷離子Xcorr≥3.75。

2 結(jié)果與討論

2.1 在線2D-WAX-RPLC分離標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)混合物

如圖1所示,WAX模式下蛋白質(zhì)根據(jù)帶電情況進(jìn)行分離;經(jīng)臺(tái)階梯度洗脫后,各組分交替捕集到位于十通閥上的兩個(gè)平行C8捕集柱上;隨后,依次進(jìn)入RPLC色譜柱,根據(jù)蛋白質(zhì)的疏水性進(jìn)行分離。由于兩維之間的分離機(jī)理具有正交性,從而確保了2D-WAX-RPLC系統(tǒng)具有較高的分辨率和峰容量。

選取質(zhì)量濃度均為1.2m g/mL的5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的混合物對(duì)2D-WAX-RPLC系統(tǒng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。從基于Transform軟件制作的2D-WAX-RPLC譜圖(圖2a)可以看出,在WAX柱上,細(xì)胞色素C、肌紅蛋白和碳酸酐酶在第二個(gè)臺(tái)階內(nèi)被洗脫;β-乳球蛋白和牛血清白蛋白在第三個(gè)臺(tái)階內(nèi)被洗脫。這兩組蛋白質(zhì)在第二維RPLC柱上均得到了進(jìn)一步分離,實(shí)現(xiàn)了5種蛋白質(zhì)的完全分離。

圖2 5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)混合溶液的2D-WAX-RPLC分離二維投影圖Fig.2 two-dim ensiona l con tou r p lo ts of a five-p rote in mixture sepa ra ted by2D-WAX-RPLC

為了進(jìn)一步考察該2D-WAX-RPLC系統(tǒng)進(jìn)行蛋白質(zhì)相對(duì)定量分析的能力,將蛋白質(zhì)混合物中細(xì)胞色素C和牛血清白蛋白的濃度降低一半,肌紅蛋白濃度增加一倍,其余蛋白濃度不變。如圖2b所示,相對(duì)于圖2a,細(xì)胞色素C和牛血清白蛋白的峰強(qiáng)度降低了約一半;肌紅蛋白的峰強(qiáng)度增加了約一倍;其余色譜峰強(qiáng)度不變。這均與其濃度變化一致,表明該系統(tǒng)可用于開展蛋白質(zhì)的相對(duì)定量研究。

為了確保相對(duì)定量的準(zhǔn)確性,考察了2D-WAXRPLC系統(tǒng)對(duì)蛋白質(zhì)混合物分離的重現(xiàn)性。從表1可看出,在6次連續(xù)運(yùn)行中,5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)保留時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于1%;在連續(xù)5d運(yùn)行中,保留時(shí)間和峰面積的RSD值均小于3%。充分證明該系統(tǒng)具有很好的重現(xiàn)性。

表1 5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的保留時(shí)間和峰面積的日內(nèi)、日間重現(xiàn)性Table1 Intraday and interday reproducibilities of the re tention times and peak areas of fivestandard prote ins%

2.2 不同生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸蛋白質(zhì)的分離

將在線2D-WAX-RPLC系統(tǒng)用于4個(gè)不同生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸蛋白質(zhì)樣品的分離。由于樣品較復(fù)雜,將第一維WAX的臺(tái)階梯度增加為9個(gè),第二維RPLC的梯度時(shí)間延長(zhǎng)為80m in。由Transform軟件制作的2D-WAX-RPLC分離圖見圖3?？煽闯?個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期的鹿茸蛋白質(zhì)有著較為明顯的差異。

收集上述二維圖中對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)峰的峰高最大比超過2的餾分(如圖3中圈示)作為4個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期之間有顯著差異的蛋白質(zhì)。

2.3 不同生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸差異蛋白質(zhì)的比較

將上述收集的具有顯著差異的蛋白質(zhì)餾分凍干后酶解,并用μRPLC-MS/MS進(jìn)行分離鑒定。在對(duì)不同生長(zhǎng)時(shí)期的鹿茸差異蛋白質(zhì)進(jìn)行比較時(shí),選取至少兩次進(jìn)樣都能鑒定得到的蛋白質(zhì)。其中一些蛋白質(zhì),包括線粒體內(nèi)膜蛋白α螺旋結(jié)構(gòu)域、依賴cAM P的蛋白激酶、泛素蛋白連接酶、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子和神經(jīng)膠質(zhì)絲狀酸性蛋白等在4個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸中均能鑒定得到。這可能是受平臺(tái)分離能力所限,這些蛋白質(zhì)和與之性質(zhì)接近的差異蛋白質(zhì)共流出,或者這些蛋白質(zhì)在不同生長(zhǎng)時(shí)期的鹿茸中存在量的差異,而不是有無的差異。

根據(jù)蛋白質(zhì)有無的差異,從9個(gè)差異蛋白質(zhì)餾分中共計(jì)鑒定得到了22個(gè)在4個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期中有顯著差異的蛋白質(zhì)(見表2),其中Mr大于100 000的蛋白質(zhì)有8個(gè),占差異蛋白質(zhì)總數(shù)的36%;而Mr小于20 000的蛋白質(zhì)有兩個(gè),占差異蛋白質(zhì)總數(shù)的9%。這表明,采用2D-HPLC進(jìn)行蛋白質(zhì)分離,能在一定程度上改進(jìn)二維凝膠電泳在分離極大和極小蛋白質(zhì)方面的不足。

圖3 4個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸蛋白質(zhì)的2D-WAX-RPLC分離二維投影圖Fig.3 two-dimensional contour plots of antler proteins from the antler with four growing stages separated by 2D-WAX-RPLC(Cycled fractions with relative peak height ratios over2we recollected for further prote in ide tification.)

表2 4個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸中的差異蛋白質(zhì)Table2 Differential proteins identified from antlers from four growing stages

對(duì)發(fā)現(xiàn)的22個(gè)差異蛋白質(zhì)的功能進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)其中包括了與代謝相關(guān)的蛋白質(zhì)8個(gè)(占36%),與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯相關(guān)的蛋白質(zhì)6個(gè)(占27%),與細(xì)胞生長(zhǎng)及分裂相關(guān)的蛋白質(zhì)4個(gè)(占18%),與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及磷酸化相關(guān)的蛋白質(zhì)2個(gè)(占9%),結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)1個(gè)(占5%)和未知功能蛋白質(zhì)1個(gè)(占5%)。其中占多數(shù)的是與代謝相關(guān)的蛋白質(zhì),8個(gè)與代謝相關(guān)的蛋白質(zhì)中的7個(gè)在生長(zhǎng)期為1和2的鹿茸中鑒定得到,這可能與鹿茸生長(zhǎng)前期代謝較為旺盛,而后期由于骨化形成、代謝變緩有關(guān)。

3 結(jié)論

本文建立了一種基于蛋白質(zhì)的在線二維液相色譜分離的比較蛋白質(zhì)組研究方法,并將其用于4個(gè)不同生長(zhǎng)時(shí)期鹿茸差異蛋白質(zhì)的分析。共從9個(gè)蛋白質(zhì)差異峰中鑒定得到了22個(gè)差異蛋白質(zhì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,這種基于蛋白質(zhì)水平的液相色譜分離的方法具有很好的重現(xiàn)性和鑒定差異蛋白質(zhì)的能力。

通過進(jìn)一步提高系統(tǒng)的分離能力和檢測(cè)靈敏度,該方法將有望為開展比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供一種新的技術(shù)。

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GAO Liang1,2,Q IAO Xiaoqiang1,2,LIANG Zhen1,ZHANG Lihua1＊,HUO Yushu3,ZHANG Yukui1
(1.Key Laboratory of Separation Science for Analytical Chemistry,National Chromatographic R.& A.Center,Dalian Institute of Chemica l Physics,Chinese Academy of Sciences,Da lian 116023,China;2.Graduate School of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100039,China;3.The University of Texas,San Antonio,Texas 78229-3900,USA)

O658

A

1000-8713(2010)02-0146-06

＊通訊聯(lián)系人:張麗華,博士,研究員,主要研究方向?yàn)榈鞍踪|(zhì)組學(xué)分離鑒定新技術(shù)新方法的研究.Tel:(0411)84379720,E-m ail:lihuazhang@dicp.ac.cn.

國(guó)家重大科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(No.2007CB914100)和國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.20775094).

2009-12-28

DO I:10.3724/SP.J.1123.2010.00146