喬立冬 邢臺市人民醫(yī)院檢驗二科（054001）

銅綠假單胞菌對β-內酰胺類藥物耐藥相關基因的研究

喬立冬 邢臺市人民醫(yī)院檢驗二科（054001）

目的了解臨床分離的銅綠假單胞菌β-內酰胺類藥物耐藥相關基因的存在狀況，以便為臨床選擇用藥提供依據(jù)。方法自臨床分離的 95株銅綠假單胞菌，采用聚合酶鏈反應（PCR）檢測耐藥基因（TEM、SHV、OXA、PER、GES、IMP、VIM、DHA和 OprD2）結果95株銅綠假單胞菌中，發(fā)現(xiàn)了7種耐藥基因，其中25%菌株檢測到兩種耐藥基因。結論銅綠假單胞菌對β-內酰胺類抗生素的多重耐藥是由多種耐藥基因決定的。提示該菌具有復雜的耐藥機制。

銅綠假單胞菌；耐藥基因；β-內酰胺類抗生素

近年來，隨著抗生素的不斷開發(fā)和廣泛應用，感染菌的菌群分布亦隨之發(fā)生變遷。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa P. aeruginosa），是醫(yī)院內感染最常見的致病菌之一，引起的醫(yī)院內感染在國內約17.27%[1]，居第二位，國外報道10～31.5%[2]，居病原菌之首。近年來，P. aeruginosa耐藥性不斷增加，已經(jīng)出現(xiàn)對3代頭孢菌素和亞胺培南耐藥的P. aeruginos菌，給臨床治療帶來極大困難。研究發(fā)現(xiàn)，P. aeruginos產生的各種β-內酰胺酶（如 TEM、SHV、OXA、PER、VER、GES、CARB）、金屬β-內酰胺（如IMP、VIM）和質粒頭孢菌素酶（如DHA）以及外膜孔蛋白D2（OprD2）缺失，是對β-內酰胺類藥物耐藥的主要機制[3-8]。為了解我院臨床分離的 P. aeruginosa對β-內酰胺類藥物耐藥原因，該文采用分子生物學技術檢測了9種β-內酰胺類藥物耐藥相關基因（TEM、SHV、OXA、PER、GES、IMP、VIM、DHA和OprD2）報告如下：

1 材料和方法

液。置入-20℃冰箱備用。

1.4 基因檢測，均為PCR法各種靶基因引物序列和目的產物長度見表1。

各種靶基因PCR擴增體系均為：每反應體系P1、P2引物各 0.5μmol/L、kcl 10mmol/L(NH4)2SO48mmol/L、Mgcl 2mmol/L、Tris-Hcl (PH9.0)10mmol/L、NP400.5%、BAS 0.02%、TaqDNA pol 1μ?？偡磻w積20μl（其中模板液5μl）。循環(huán)參數(shù)為：93℃，預變性2min，然后93℃ 6 0s→55℃，60s→72℃60s，循環(huán) 35周期，最后一個72℃延長至5min。產物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)與陽性對照分子相當?shù)哪康臈l帶為陽性。耐藥基因檢測試劑盒、靶基因PCR引物序列和陽性對照DNA由無錫市克隆遺傳技術研究所提供。

Table 1 Primers of Target Genes and PCR Products

2 結果

2.1藥物敏感性試驗，見表2。可見菌株對β-內酰胺類藥物耐藥性均非常嚴重。

Table 2 Sensitivity of 95P.aeruginosas to 17 Antibiotics

2.2 基因PCR檢測95株P. aeruginosa中，TEM、VIM、IMP、OXA、PER、GES，DHA陽性率分別為：51.6%、40.1%、38.9%、32.4%、30.8%、30.3%、4.0%，而SHV、OprD2基因均陰性。

3 討論

1992年法國巴黎發(fā)現(xiàn)的TEM-42是在P. aeruginosa菌中第一個被報道的A類ESBLs[11].P. aeruginosa對多種抗生素產生耐藥性，提示該菌具有復雜的耐藥機制。P.aeruginosa的主要耐藥機理是產生β-內酰胺酶，尤其是超廣譜β-內酰胺酶，以及菌細胞外膜的通透性降低和菌體蛋白結構與功能的變化。P. aeruginosa外膜脂多糖與磷脂之間，鮑林蛋白形成的孔道比一般革蘭陰性菌的孔道小，使多種抗革蘭氏陰性桿菌抗生素難以通過，是該菌對不同類別抗生素呈現(xiàn)出固有耐藥性的重要原因，這種固有耐藥性使P. aeruginosa成為臨床上難治致病菌之一，而主動外排系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)更揭示了它是P. aeruginosa固有耐藥性或獲得性多重耐藥的更一重要原因[12]。P. aeruginosa的耐藥是由于產生滅活藥物的酶和（或）細菌外膜對藥物的通透性降低使抗菌藥物失效。由于β-內酰胺類抗生素的廣泛使用和碳青霉烯酶的產生，使其耐藥性明顯上升，因此在臨床上對抗生素使用進行宏觀管理與控制成為目前減少細菌耐藥性產生的主要措施之一[13]。通過分析細菌的耐藥譜及耐藥模式，了解感染的發(fā)生發(fā)展趨勢，從而有計劃地交替使用敏感性強的抗生素，是提高臨床治療效率的必然選擇。

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10.3969/j.issn.1672-2779.2010.24.165

1672-2779（2010）-24-0200-02

2010-09-30）