劉新 陳志云

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上自然流產(chǎn)，其中50%以上患者不存在染色體、解剖、內(nèi)分泌、自身免疫異常和生殖道感染等常見病因，臨床上稱為原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。在生育年齡的婦女中發(fā)生率為1% ～2%，且有逐年增加趨勢(shì)。過(guò)去25年間中國(guó)有生育力男性精液參數(shù)中精子密度和精子總數(shù)呈現(xiàn)下降［1］，精子質(zhì)量下降是否增加流產(chǎn)率目前研究并不多見。本文對(duì)56例不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者丈夫精液常規(guī)檢查情況進(jìn)行回顧性分析，試圖為復(fù)發(fā)流產(chǎn)的病因提供部分理論依據(jù)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇本院門診就診的56例孕早期習(xí)慣性流產(chǎn)患者，孕齡＜12周，均為流產(chǎn)3次或3次以上者。患者排除存在染色體、解剖、內(nèi)分泌、自身免疫異常和生殖道感染等常見病因。取56例患者丈夫精液為研究組，同時(shí)隨機(jī)取56例已育男性精液作為對(duì)照組。

1.2 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 按照WH/《人類精液及精子－宮頸黏液相互作用實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)手冊(cè)》中的標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定。正常值:精液量2～6 ml，pH 值7.2～8.0，液化時(shí)間 ＜ 60 min，精子密度≥20×106/ml或更多，精子活率＞60%，精子活力a級(jí)≥25%或a級(jí)+b級(jí)≥50%，正常精子形態(tài)≥30%。在上述指標(biāo)中，只要有一項(xiàng)異常時(shí)則判定精液質(zhì)量異常。若各項(xiàng)指標(biāo)均在參考值范圍內(nèi)，則判定精液質(zhì)量為正常。

2 研究方法

2.1 標(biāo)本采集 禁欲4～7 d在取精室手淫法取精液于干燥經(jīng)消毒的潔凈廣口杯內(nèi)，置于37℃水浴箱內(nèi)使之完全液化后轉(zhuǎn)移至刻度離心管內(nèi)測(cè)量體積，37℃水浴中待檢。

2.2 操作方法 按WHO的操作方法，分析精液量液化時(shí)間、pH值、黏稠度以及精子形態(tài)等。精液完全液化后，先取一滴約10 μl精液滴在載玻片上，拉薄涂片，用改良巴氏染色法染色待檢。

2.3 精液動(dòng)態(tài)分析 采用西班牙SCA－LIT彩色精子質(zhì)量檢測(cè)儀對(duì)精子進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析。按照《WH/人類精液及精子－宮頸黏液相互作用實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)手冊(cè)》的相關(guān)要求分析精液。

2.4 檢測(cè)指標(biāo) 精液pH、精液量、總數(shù)、密度、液化時(shí)間、a+b級(jí)精子率、正常精子率。精液動(dòng)態(tài)分析指標(biāo):直線速度(VSL)、曲線速度(VCL)、平均路徑速度(VAP)、直線性(LIN)、前向性(STR)、擺動(dòng)性(WOB)、精子平均側(cè)擺幅(ALH)、平均移動(dòng)角度(MAD)、精子平均鞭打頻率(BCF)。

2.5 質(zhì)控方法 室內(nèi)質(zhì)控采用質(zhì)控珠(QC-BesdsTM，Bioscreen Inc)進(jìn)行每天密度質(zhì)控，檢測(cè)人員每周進(jìn)行隨機(jī)標(biāo)本的質(zhì)控(密度和活動(dòng)力質(zhì)控)。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 按統(tǒng)計(jì)學(xué)要求處理各組參數(shù)，使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定量資料均以(±s)表示，定量資料組間比較采用t檢驗(yàn)，定性資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 兩組精液的量、pH值、精子總數(shù)、a+b級(jí)比率及液化時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，在畸形率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。研究組精液畸形率明顯高于對(duì)照組。見表1。

3.2 與對(duì)照組比較，研究組精液VCL、VSL、MAD、ALH、VAP、WOB無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，BCF、LIN、STR有顯著性差異(P＜0.05)。見表2。

表1 兩組精液檢測(cè)結(jié)果比較

表2 兩組精液運(yùn)動(dòng)參數(shù)比較

4 討論

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的病因十分復(fù)雜，涉及遺傳、內(nèi)分泌、解剖、感染和環(huán)境因素等多因素。目前研究大多數(shù)集中女性因素，既然由于胚胎染色體的一半是由男性提供，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)也有可能是男性因素引起的。本研究對(duì)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)丈夫精液與正常男性精液常規(guī)分析結(jié)果顯示:兩組精液的量、pH值、精子總數(shù)、a+b級(jí)比率、液化時(shí)間及正常精子形態(tài)百分率無(wú)明顯差異。與以往研究相似［2］?；尉又笖?shù)兩組有明顯差異，畸形指數(shù)也稱多種異常指數(shù)(TZI)用缺陷總數(shù)除以畸形精子數(shù)目，數(shù)值介于1.00和3.00之間。是不育男性精液檢查的一個(gè)重要參數(shù)，有研究顯示TZI與精液常規(guī)中其他參數(shù)間無(wú)相關(guān)性［3］?；尉雍茈y結(jié)合到卵透明帶上，當(dāng)精液中正常形態(tài)精子百分率＜14%時(shí)，精子體外受精率顯著減少［4］。兩組正常精子百分率無(wú)明顯差異，畸形精子指數(shù)高是否作為一個(gè)影響自然妊娠的因素還有待于繼續(xù)研究。

Templado等［5］的研究表明，即使精子密度正常，畸形精子癥和弱精子癥男性的精子染色體異常顯著增高。吳大鵬等［6］觀察了58例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的丈夫和50例正常生育男性對(duì)照組，得出精子DNA完整性損傷可能是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的原因的結(jié)論。Carrell等［7］發(fā)現(xiàn)原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的精子較普通人群精子的非整倍性高，并且非整倍性的比率與精子凋亡的比率成正相關(guān)。Kahraman等［8］采用熒光原位雜交技術(shù)對(duì)接受卵胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)治療的畸形精子癥的研究結(jié)果顯示，39%存在精子非整倍體，顯著地高于對(duì)照;同時(shí)在對(duì)121例前期輔助生殖技術(shù)失敗的回顧中，發(fā)現(xiàn)50%分裂期胚胎中發(fā)現(xiàn)有染色體異常，其中34%為復(fù)合性染色體缺陷。這些結(jié)果提示:導(dǎo)致自然流產(chǎn)及胎兒發(fā)育異常的染色體異常有可能來(lái)源于精子的染色體異常，從而導(dǎo)致妊娠失敗?；尉又笖?shù)高與精子染色體異常是否有相關(guān)性還有待于繼續(xù)研究。

精子的動(dòng)態(tài)參數(shù)是評(píng)估精液質(zhì)量的重要指標(biāo)，將其與精液常規(guī)分析相結(jié)合，可為男性生育能力評(píng)價(jià)提供有效的依據(jù)［9］。參數(shù) VCL、VSL、VAP 反映了精子的運(yùn)動(dòng)速度，LIN、WOB、MAD、ALH、STR參數(shù)反映了精子運(yùn)動(dòng)的直線性和前向性。與對(duì)照組比較，研究組精液BCF(精子平均鞭打頻率)、LIN(直線性)、STR(前向性)、VSL(直線速度)、ALH(精子平均側(cè)擺幅)、WOB(擺動(dòng)性)、VAP(平均路徑速度)均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，反映研究組精子的運(yùn)動(dòng)速度及前向性差。正常的受孕需要精子特征性的微細(xì)運(yùn)動(dòng)以穿透卵丘和透明帶，快速、直線、前向運(yùn)動(dòng)的精子是提高受孕概率的保證。精子的動(dòng)態(tài)參數(shù)客觀地反映了精子微細(xì)運(yùn)動(dòng)特點(diǎn)，并與受精率顯著相關(guān)。一般一次射精后僅1%～6%精子可以進(jìn)入宮腔，能到達(dá)輸卵管的精子更少，進(jìn)入陰道的精子靠自身運(yùn)動(dòng)經(jīng)子宮頸到達(dá)輸卵管與卵細(xì)胞結(jié)合，旅途長(zhǎng)達(dá)17 cm，是精子自身長(zhǎng)度的3000倍，因此成功受孕精子功能尤為重要。兩組精子動(dòng)態(tài)分析差異是否與畸形精子指數(shù)高相關(guān)還需進(jìn)一步證實(shí)。

［1］梁小薇，盧文紅，陳振文，等.過(guò)去25年中國(guó)有生育力男性精液參數(shù)變化的回顧性研究.中華男科學(xué)雜志，2008，14(9):775-778.

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［3］姜彥嘉，王奇玲，馬春杰，等.畸形精子指數(shù)和精子畸形指數(shù)與男性不育癥患者精子密度、活動(dòng)率及精子形態(tài)的關(guān)系.廣東醫(yī)學(xué)，2006，27(2):231-233.

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［6］吳大鵬，吳齊飛，李旭東.反復(fù)自然流產(chǎn)與精子DNA完整性的相關(guān)研究.現(xiàn)代泌尿外科雜志，2008，13(2):132-134.

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