紫外分光光度法測(cè)定斜脈暗羅葉和枝總?cè)扑岬暮?/h1>
2010-12-08 00:19:04劉冰晶陳光英畢和平鮑長(zhǎng)余翟明君
簡(jiǎn) 藍(lán) ， 劉冰晶 ，2， 陳光英 ，2*， 畢和平 ，2， 鮑長(zhǎng)余 ，2， 翟明君
（1.海海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158；
2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158）
紫外分光光度法測(cè)定斜脈暗羅葉和枝總?cè)扑岬暮?/p>
簡(jiǎn) 藍(lán)1， 劉冰晶1，2， 陳光英1，2*， 畢和平1，2， 鮑長(zhǎng)余1，2， 翟明君1
（1.海海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158；
2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158）
測(cè)定斜脈暗羅葉和枝中總?cè)扑岬暮?以熊果酸為對(duì)照品，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%香草醛-冰醋酸和高氯酸系統(tǒng)為顯色劑，采用紫外分光光度法在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度.熊果酸對(duì)照品在20～100 g/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Abs=0.154 8 C+0.028 6，r=0.999 3.斜脈暗羅葉和枝中總?cè)扑岬暮糠謩e為0.592%和1.436%.本法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，易于推廣.
斜脈暗羅；三萜酸；紫外分光光度法
番荔枝科（Annonaceae）斜脈暗羅（Polyalthia plagioneura）系我國(guó)的特有植物,分布于兩廣和海南的部分地區(qū)[1].國(guó)內(nèi)外學(xué)者從暗羅屬的20多種植物中得到了多種萜類[2-3]、生物堿[4-5]等多種化合物.三萜酸具有廣泛的生物活性，可以降低膽固醇、降血糖、免疫活性、抗炎、抗菌和抗病毒、抗腫瘤活性等[6].本文以熊果酸為對(duì)照品，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%香草醛-冰醋酸和高氯酸系統(tǒng)為顯色劑，采用紫外分光光度法測(cè)定斜脈暗羅葉和枝中總?cè)扑岬暮?，為斜脈暗羅的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)數(shù)據(jù).
1 儀器、試劑與材料
UV2600紫外分光光度計(jì)（上海國(guó)美科學(xué)儀器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化）；索式提取器等.
質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇，無(wú)水乙醇，香草醛，高氯酸，冰醋酸等均為國(guó)產(chǎn)分析純；熊果酸對(duì)照品購(gòu)自上海順勃生物工程有限公司（純度大于98.0%）.
斜脈暗羅采自海南省昌江縣，經(jīng)霸王嶺自然保護(hù)區(qū)陳慶工程師鑒定為番荔枝科暗羅屬植物Poly?althia plagioneura，標(biāo)本現(xiàn)存于海南師范大學(xué)省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室.
2 實(shí)驗(yàn)部分
參照文獻(xiàn)[7-10]的方法并做改進(jìn).
2.1 對(duì)照品溶液制備
準(zhǔn)確稱取105℃干燥至恒重的熊果酸對(duì)照品20.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.400 g/L溶液，精確移取溶液2.5 mL，定容至100 mL，得濃度為0.01 g/L的對(duì)照品溶液.
2.2 供試品溶液制備
將粉碎過(guò)的斜脈暗羅葉和枝置于50℃烘箱干燥24 h，各準(zhǔn)確稱取2.0 g，用無(wú)水乙醇浸泡2 h后，用索式提取器提取8 h，提取液用TLC測(cè)定，至渣液與濃H2SO4反應(yīng)不顯紫色為止.回收乙醇后，提取液放冷至室溫，用無(wú)水乙醇定容至100 mL，搖勻.分別準(zhǔn)確吸取葉和枝提取液2.5 mL和5.0 mL于100 mL容量瓶中，再用無(wú)水乙醇定容，搖勻，制得供試品溶液.
2.3 測(cè)定波長(zhǎng)選擇
精確量取對(duì)照品溶液5.0 mL，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸溶液0.8mL顯色后，進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，隨行空白對(duì)照.結(jié)果表明，對(duì)照品溶液在546 nm處有最大吸收峰，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1，故選擇546 nm作為樣品測(cè)定波長(zhǎng).
2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 mL分別置于10 mL容量瓶中，沸水浴揮去無(wú)水乙醇，冷卻后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸溶液0.8 mL，將容量瓶放人70℃水浴中加熱15 min，冷卻至室溫，用冰醋酸定容到刻度，搖勻.在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，隨行空白對(duì)照.以熊果酸含量（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖2），標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=0.1548C+0.0286，式中A為吸光度值，C為濃度（μg/mL），相關(guān)系數(shù)r=0.9993，線性范圍為0.2～1.6 μg/mL.
圖1 對(duì)照品紫外吸收?qǐng)DFig.1UV absorption spectrum of reference substations
圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2Standard curve
2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
取對(duì)照品和樣品溶液各5.0 mL，按照2.4項(xiàng)下方法進(jìn)行，每隔15 min測(cè)定一次，結(jié)果見(jiàn)表1，RSD值較小（RSD=2.37%、1.27%、1.75%），表明本法在1.5 h內(nèi)基本穩(wěn)定.
2.6 精密度實(shí)驗(yàn)
取同一批樣品液，進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表2,葉和枝的分別為RSD=0.85%（n=5）和RSD=1.57%（n=5），精密度良好.
2.7 加樣回收實(shí)驗(yàn)
準(zhǔn)確量取5份已知含量的斜脈暗羅葉和枝提取液各5.0 mL，準(zhǔn)確加入一定量的的熊果酸對(duì)照品，余下部分按2.4項(xiàng)下方法操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3.實(shí)驗(yàn)表明，葉提取物平均回收率100.57%，RSD=1.50%（n=5），枝提取物平均回收率100.76%，RSD=1.03%（n=5）.
2.8 樣品含量測(cè)定
準(zhǔn)確量取各3份斜脈暗羅葉和枝的樣品溶液5.0 mL于50.0 mL容量瓶中，沸水浴揮去無(wú)水乙醇，冷卻后加入5%香草醛-冰醋酸溶液1.0 mL，高氯酸4.0 mL，容量瓶放人70℃水浴中加熱15 min，冷卻至室溫，用冰醋酸定容，搖勻，余下部分按2.4項(xiàng)方法操作.實(shí)驗(yàn)和計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表4，斜脈暗羅葉中總?cè)扑岷繛?.436%，RSD=0.42%（n=3），枝中總?cè)坪繛?.592%，RSD=1.88%（n=3）.
表1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)Tab.1 Stability test
表2 精密度實(shí)驗(yàn)Tab.2 Precision test
表3 加樣回收實(shí)驗(yàn)Tab.3Recovery test
表4 樣品測(cè)量結(jié)果Tab.4Determination results of samples
3 討論
測(cè)量總?cè)扑犷悤r(shí)，文獻(xiàn)報(bào)道[8-10]顯色系統(tǒng)香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液的是不同的，本文對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的香草醛-冰醋酸溶液與高氯酸溶液的比例進(jìn)行了調(diào)整，結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)顯色穩(wěn)定，重復(fù)性好.
試驗(yàn)結(jié)果表明，在顯色系統(tǒng)香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液條件下，用紫外光分光光度法測(cè)定斜脈暗羅中的總?cè)扑嵊辛己玫木€性關(guān)系，干擾少，方法簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠,是測(cè)定斜脈暗羅總?cè)扑犷惢衔锏妮^佳方法.
[1]蔣英,李秉滔,李延輝.中國(guó)植物志,第三十卷:第二分冊(cè)[M].北京:科學(xué)出版社,1979:170.
[2]Choudhury M H,Mohammad A.Hossain Andmoham?mad A.Rashid,Clerodane Diterpenoids from Polyalthia Iongifolia var.Pendulla[J].Biochemical Systematics and Ecology,1995,23(3):331-332.
[3]Jossang A,Leboeuf M,Cave A,et al.Alcaloides desan?nonacees,L:A lcalo ides des Polyalthia cauliflora[J].J Nat Prod,1984,47:504-513.
[4]Wu Y C,Duh C Y,Wang S K,et al.Two new natural azafluorene alkaloids and a cytotoxic aporphine alkaloid from Polyalthia longifloria[J].J Nat Prod,1990,53:1327-1331.
[5]鄭祥慈,楊仁洲,徐任生,等.斜脈暗羅素甲—具有C5-OH的單四氫呋喃環(huán)型番荔枝內(nèi)酯[J].植物學(xué)報(bào),1994,36(7):557-560.
[6]姚新生,吳立軍.天然藥物化學(xué)[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003,306.25(1):4.
[7]陳彥君,程素霞,龍躍,等.中草藥雀兒舌頭中總?cè)扑岷康淖贤夥止夤舛确y(cè)定[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2008,43(3):602-603.
[8]張雁冰,王克讓,劉宏民.馬桑葉中總?cè)扑岬暮繙y(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17(4):529-530.
[9]周巧霞,張經(jīng)碩,顧明,等.測(cè)定山楂及提取物總?cè)扑岬暮縖J].中國(guó)野生動(dòng)植物資源,2004,23(5):43-44.
[10]蔡亞玲,阮金蘭,蘇群,等.紫背鼠尾草中總?cè)扑岬暮繙y(cè)定[J].中藥材,2008,31(5):692-693.
Ultraviolet Spectrophotometric Determination of Tritepenoidic Acid in the Leaves and Stems of Polyalthia Plagioneura
JIAN Lan1，LIU Bingjing1，2，CHEN Guangying1，2*，BI Heping1，2，BAO Changyu1，2，ZHAI Mingjun1
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，Haikou571158，China）
Under the experimental conditions including ursolic acid as the reference,5%vanillin-acetic acid and per?chloric acid as color system,the content of triterpenoidic acid in the leaves and stems ofPolyalthia plagioneurawas de?termined by ultraviolet spectrophotometric method at 546 nm.The calibration curve was linear（r=0.999 3）in the range of 0.2～1.6μg/mL，and the curve was Abs=0.154 8 C+0.028 6，the content was 1.436%and 0.592%.The result was sta?ble，and has good repeatability.This method was conveniently to operate and easy for application.
Polyalthia plagioneura；Tritepenoidic acid ；Ultraviolet spectrophotometric method
R 284.2
A
1674-4942（2010）04-0410-03
2010-05-21
海南省高校碩士研究生創(chuàng)新科研課題（Hxwsy2009-10）；國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（101165815）
*通訊作者
畢和平
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簡(jiǎn) 藍(lán) ， 劉冰晶 ，2， 陳光英 ，2*， 畢和平 ，2， 鮑長(zhǎng)余 ，2， 翟明君
（1.海海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158；
2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158）
紫外分光光度法測(cè)定斜脈暗羅葉和枝總?cè)扑岬暮?/p>
簡(jiǎn) 藍(lán)1， 劉冰晶1，2， 陳光英1，2*， 畢和平1，2， 鮑長(zhǎng)余1，2， 翟明君1
（1.海海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158；
2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158）
測(cè)定斜脈暗羅葉和枝中總?cè)扑岬暮?以熊果酸為對(duì)照品，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%香草醛-冰醋酸和高氯酸系統(tǒng)為顯色劑，采用紫外分光光度法在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品的吸光度.熊果酸對(duì)照品在20～100 g/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Abs=0.154 8 C+0.028 6，r=0.999 3.斜脈暗羅葉和枝中總?cè)扑岬暮糠謩e為0.592%和1.436%.本法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，易于推廣.
斜脈暗羅；三萜酸；紫外分光光度法
番荔枝科（Annonaceae）斜脈暗羅（Polyalthia plagioneura）系我國(guó)的特有植物,分布于兩廣和海南的部分地區(qū)[1].國(guó)內(nèi)外學(xué)者從暗羅屬的20多種植物中得到了多種萜類[2-3]、生物堿[4-5]等多種化合物.三萜酸具有廣泛的生物活性，可以降低膽固醇、降血糖、免疫活性、抗炎、抗菌和抗病毒、抗腫瘤活性等[6].本文以熊果酸為對(duì)照品，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%香草醛-冰醋酸和高氯酸系統(tǒng)為顯色劑，采用紫外分光光度法測(cè)定斜脈暗羅葉和枝中總?cè)扑岬暮?，為斜脈暗羅的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)數(shù)據(jù).
1 儀器、試劑與材料
UV2600紫外分光光度計(jì)（上海國(guó)美科學(xué)儀器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化）；索式提取器等.
質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇，無(wú)水乙醇，香草醛，高氯酸，冰醋酸等均為國(guó)產(chǎn)分析純；熊果酸對(duì)照品購(gòu)自上海順勃生物工程有限公司（純度大于98.0%）.
斜脈暗羅采自海南省昌江縣，經(jīng)霸王嶺自然保護(hù)區(qū)陳慶工程師鑒定為番荔枝科暗羅屬植物Poly?althia plagioneura，標(biāo)本現(xiàn)存于海南師范大學(xué)省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室.
2 實(shí)驗(yàn)部分
參照文獻(xiàn)[7-10]的方法并做改進(jìn).
2.1 對(duì)照品溶液制備
準(zhǔn)確稱取105℃干燥至恒重的熊果酸對(duì)照品20.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.400 g/L溶液，精確移取溶液2.5 mL，定容至100 mL，得濃度為0.01 g/L的對(duì)照品溶液.
2.2 供試品溶液制備
將粉碎過(guò)的斜脈暗羅葉和枝置于50℃烘箱干燥24 h，各準(zhǔn)確稱取2.0 g，用無(wú)水乙醇浸泡2 h后，用索式提取器提取8 h，提取液用TLC測(cè)定，至渣液與濃H2SO4反應(yīng)不顯紫色為止.回收乙醇后，提取液放冷至室溫，用無(wú)水乙醇定容至100 mL，搖勻.分別準(zhǔn)確吸取葉和枝提取液2.5 mL和5.0 mL于100 mL容量瓶中，再用無(wú)水乙醇定容，搖勻，制得供試品溶液.
2.3 測(cè)定波長(zhǎng)選擇
精確量取對(duì)照品溶液5.0 mL，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸溶液0.8mL顯色后，進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，隨行空白對(duì)照.結(jié)果表明，對(duì)照品溶液在546 nm處有最大吸收峰，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1，故選擇546 nm作為樣品測(cè)定波長(zhǎng).
2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 mL分別置于10 mL容量瓶中，沸水浴揮去無(wú)水乙醇，冷卻后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸溶液0.8 mL，將容量瓶放人70℃水浴中加熱15 min，冷卻至室溫，用冰醋酸定容到刻度，搖勻.在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，隨行空白對(duì)照.以熊果酸含量（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖2），標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=0.1548C+0.0286，式中A為吸光度值，C為濃度（μg/mL），相關(guān)系數(shù)r=0.9993，線性范圍為0.2～1.6 μg/mL.
圖1 對(duì)照品紫外吸收?qǐng)DFig.1UV absorption spectrum of reference substations
圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2Standard curve
2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
取對(duì)照品和樣品溶液各5.0 mL，按照2.4項(xiàng)下方法進(jìn)行，每隔15 min測(cè)定一次，結(jié)果見(jiàn)表1，RSD值較小（RSD=2.37%、1.27%、1.75%），表明本法在1.5 h內(nèi)基本穩(wěn)定.
2.6 精密度實(shí)驗(yàn)
取同一批樣品液，進(jìn)行5次平行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表2,葉和枝的分別為RSD=0.85%（n=5）和RSD=1.57%（n=5），精密度良好.
2.7 加樣回收實(shí)驗(yàn)
準(zhǔn)確量取5份已知含量的斜脈暗羅葉和枝提取液各5.0 mL，準(zhǔn)確加入一定量的的熊果酸對(duì)照品，余下部分按2.4項(xiàng)下方法操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3.實(shí)驗(yàn)表明，葉提取物平均回收率100.57%，RSD=1.50%（n=5），枝提取物平均回收率100.76%，RSD=1.03%（n=5）.
2.8 樣品含量測(cè)定
準(zhǔn)確量取各3份斜脈暗羅葉和枝的樣品溶液5.0 mL于50.0 mL容量瓶中，沸水浴揮去無(wú)水乙醇，冷卻后加入5%香草醛-冰醋酸溶液1.0 mL，高氯酸4.0 mL，容量瓶放人70℃水浴中加熱15 min，冷卻至室溫，用冰醋酸定容，搖勻，余下部分按2.4項(xiàng)方法操作.實(shí)驗(yàn)和計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表4，斜脈暗羅葉中總?cè)扑岷繛?.436%，RSD=0.42%（n=3），枝中總?cè)坪繛?.592%，RSD=1.88%（n=3）.
表1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)Tab.1 Stability test
表2 精密度實(shí)驗(yàn)Tab.2 Precision test
表3 加樣回收實(shí)驗(yàn)Tab.3Recovery test
表4 樣品測(cè)量結(jié)果Tab.4Determination results of samples
3 討論
測(cè)量總?cè)扑犷悤r(shí)，文獻(xiàn)報(bào)道[8-10]顯色系統(tǒng)香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液的是不同的，本文對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的香草醛-冰醋酸溶液與高氯酸溶液的比例進(jìn)行了調(diào)整，結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)顯色穩(wěn)定，重復(fù)性好.
試驗(yàn)結(jié)果表明，在顯色系統(tǒng)香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液條件下，用紫外光分光光度法測(cè)定斜脈暗羅中的總?cè)扑嵊辛己玫木€性關(guān)系，干擾少，方法簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠,是測(cè)定斜脈暗羅總?cè)扑犷惢衔锏妮^佳方法.
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Ultraviolet Spectrophotometric Determination of Tritepenoidic Acid in the Leaves and Stems of Polyalthia Plagioneura
JIAN Lan1，LIU Bingjing1，2，CHEN Guangying1，2*，BI Heping1，2，BAO Changyu1，2，ZHAI Mingjun1
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，Haikou571158，China）
Under the experimental conditions including ursolic acid as the reference,5%vanillin-acetic acid and per?chloric acid as color system,the content of triterpenoidic acid in the leaves and stems ofPolyalthia plagioneurawas de?termined by ultraviolet spectrophotometric method at 546 nm.The calibration curve was linear（r=0.999 3）in the range of 0.2～1.6μg/mL，and the curve was Abs=0.154 8 C+0.028 6，the content was 1.436%and 0.592%.The result was sta?ble，and has good repeatability.This method was conveniently to operate and easy for application.
Polyalthia plagioneura；Tritepenoidic acid ；Ultraviolet spectrophotometric method
R 284.2
A
1674-4942（2010）04-0410-03
2010-05-21
海南省高校碩士研究生創(chuàng)新科研課題（Hxwsy2009-10）；國(guó)家大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（101165815）
*通訊作者
畢和平
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