正交試驗(yàn)法優(yōu)選糖腎丸提取工藝

周 越，陳建偉

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬連云港市中醫(yī)院，江蘇連云港 222000;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210046)

正交試驗(yàn)法優(yōu)選糖腎丸提取工藝

周 越1，陳建偉2＊

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬連云港市中醫(yī)院，江蘇連云港 222000;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210046)

目的篩選和優(yōu)化糖腎丸提取工藝。方法采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以高效液相色譜法測定提取液中丹參酮ⅡA含量為指標(biāo)，優(yōu)選糖腎丸的提取工藝。結(jié)果糖腎丸的最佳工藝為加6倍85%乙醇，提取2次，每次提取2 h。結(jié)論糖腎丸提取工藝穩(wěn)定，可行。

丹參酮ⅡA;高效液相色譜法;正交設(shè)計(jì)

糖腎丸為南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬連云港醫(yī)院經(jīng)驗(yàn)方劑，由黃芪、生地黃、丹參、茯苓、車前子等中藥組成，具有益氣滋陰，活血通絡(luò)，利水化痰之功效，臨床用于糖尿病腎病的治療。本試驗(yàn)對糖腎丸的提取工藝進(jìn)行了研究，采用正交設(shè)計(jì)法，優(yōu)選出最佳提取工藝，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司生命科學(xué)與化學(xué)分析儀器部);電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠);ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);電熱恒溫水浴鍋(江蘇省醫(yī)療器械廠)。丹參酮ⅡA對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110766-200417);糖腎丸方中藥材均購自安徽海鑫中藥飲片有限公司。甲醇為色譜純(南京化學(xué)試劑有限公司)，水為二級(jí)蒸餾水，其它實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參酮ⅡA含量測定[1-2]

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動(dòng)相:甲醇-水(82∶18);檢測波長為 270 nm，柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min;理論板數(shù):按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.1.2 溶液制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;精密量取2 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1 mL含丹參酮ⅡA16μg)。

取本品適量，研細(xì)(通過4號(hào)篩)，精密稱取1 g，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

按處方量比例稱取除去丹參的其他藥材，依照制粒方法及供試品溶液制備方法制備不含丹參的陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察 線性關(guān)系考察:準(zhǔn)確配置質(zhì)量濃度為 9.34 ，18.67 ，28.02 ，37.36 ，46.70μg mL 丹參酮ⅡA對照品溶液，精密吸取10μL進(jìn)樣，以峰面積對濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y=265.1X-11.5，r=0.999 5(n=5)。結(jié)果表明丹參酮ⅡA濃度在9.34～46.70μg范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對照品溶液10μL，按上述色譜條件測定，連續(xù)測定5次峰面積。結(jié)果RSD為0.54%(n=5)，表明精密度良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的同一批號(hào)樣品細(xì)粉 0.1 g，共 5份，分別準(zhǔn)確加入濃度為18.67μg/mL的對照品溶液各4 mL ，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備樣品溶液，依法測定并計(jì)算加樣回收率，得平均回收率為99.17%，RSD為1.16%。

2.2 正交設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)，對影響提取工藝的主要因素提取溶媒(乙醇)濃度(因素A)、溶媒用量(因素B)、提取時(shí)間(因素C)及提取次數(shù)(因素D)進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，各因素水平見表1[3-4]。正交設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 因素水平表

表2 L9(34)正交設(shè)計(jì)表

表3 方差分析結(jié)果表

由表2、表3結(jié)果可以得出，各因素影響大小順序?yàn)镃＞B＞A＞D，因素C對提取率的影響差異有顯著性，因素A、因素B、因素D對提取率的影響差異無顯著性。故最終選取最佳工藝為A3B1C3D2。即加6倍85%乙醇，提取2次，每次提取2 h。

按優(yōu)選工藝提取3批樣品進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果丹參酮ⅡA含量分別為0.116 4、0.108 5、0.112 7 mg/g，RSD為2.84%。驗(yàn)證結(jié)果表明工藝基本穩(wěn)定可行。

3 討論

本試驗(yàn)利用正交設(shè)計(jì)將糖腎丸各因素、各水平之間的組合均勻搭配、合理安排，找出影響提取中的主要因素、次要因素及較優(yōu)組合，確定出糖腎丸的最佳提取工藝[5]。

本方重用丹參祛瘀活血通絡(luò)，為方中臣藥。故選擇功效重要且成分確切的丹參為醇提工藝考察對象。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法測定丹參酮ⅡA的含量作為檢測指標(biāo)，結(jié)果表明，該法靈敏度高、重現(xiàn)性好。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010版(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:70-71.

[2]李軍，虞麗芳，王莉莉，等.奇丹顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中成藥，2009，31(3):407-408.

[3]張紹軒，李勇，黃青，等.用正交試驗(yàn)優(yōu)選鹽酸乙醇回流法提取麻黃的工藝研究[J].吉林中醫(yī)藥，2008，28(4):293-293.

[4]王留興.牡丹皮乙醇提取工藝研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào) ，2008 ，24(1):36-36.

[5]張茹.正交試驗(yàn)優(yōu)選復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒的提取工藝[J].中國醫(yī)院藥學(xué)，2009，29(3):252-253.

作者簡介:白雅茹(1963-)，女，主管藥師。研究方向:中藥分析。

R285.5

A

1007-4813(2010)05-0769-02

周 越(1978-)，女，在讀碩士研究生，主管中藥師。研究方向:中藥制劑工藝與質(zhì)量研究。

＊通信作者:陳建偉，男，教授，博士研究生導(dǎo)師。Tel:025-85811153，E-mail:chenjw55@sina.com

2010-06-07)