張愛英 張勛 蘇金柱

細胞因子所導(dǎo)致的免疫異常在分泌性中耳炎(otitis media with effusion，OME)發(fā)病機制中的作用日益受到關(guān)注。祝威等[1]研究殺菌通透性增強蛋白(gvI)對OME大鼠中耳黏膜細胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)mRNA及蛋白質(zhì)表達的影響，發(fā)現(xiàn)IL-6在早期參與機體防御反應(yīng)，推測OME早期中耳積液的形成可能與IL-6的高表達直接相關(guān)。腺樣體肥大小兒常易伴發(fā)OME，但也有部分腺樣體肥大患兒并無OME。本研究通過檢測腺樣體肥大伴OME患兒與單純腺樣體肥大患兒腺樣體組織及血清中IL-6的表達，探討IL-6的表達與分泌性中耳炎發(fā)病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2007年3月至2007年6月在河北省兒童醫(yī)院耳鼻咽喉科住院的腺樣體肥大患兒為研究對象，主要癥狀為睡眠打鼾，伴或不伴有聽力下降，所有患者均經(jīng)鼻咽側(cè)位片證實腺樣體肥大[A/N比值(腺樣體/鼻咽腔比值)>0．6]，并通過鼻內(nèi)窺鏡檢查排除腺樣體機械性阻塞咽鼓管咽口的因素，均無鼻及鼻竇炎。分為單純腺樣體肥大組20例(男12例，女8例)，年齡2～13歲，平均7.71±3.22歲，病程3個月～4年，平均29.23±28.47年；腺樣體肥大伴OME組20例(男11例，女9例)，年齡3～10歲，平均6.69±2.76歲，，病程6個月～2年，平均24.80±20.21年。分泌性中耳炎以聲導(dǎo)抗檢查鼓室導(dǎo)抗圖為B型或C型且負壓>200 daPa為診斷標準。兩組患兒年齡、性別、病程及腺樣體肥大程度無顯著差異。兩組患兒均在全麻下行腺樣體切除，并抽取外周血，離心取上清液，連同切除之腺樣體組織放于-70 ℃環(huán)境保存?zhèn)溆?。集齊標本后置于4 ℃冰箱解凍標本，1：20稀釋勻漿腺樣體組織離心取上清液，連同血清一起待測。

1.2IL-6檢測 按照人IL-6定量EIA試劑盒的說明檢測兩組患兒腺樣體組織及血清中IL-6的含量，全部指標均采用ELISA法,其試劑盒由sunbio生物醫(yī)學(xué)技術(shù)北京有限公司提供,檢測儀器為美國產(chǎn)VERSAmax型酶標儀。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 用SAS6.12版統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析進行顯著性檢驗。

2 結(jié)果

IL-6在腺樣體組織及血清中的濃度見表1，可見腺樣體肥大伴OME組腺樣體組織中IL-6的表達高于單純性腺樣體肥大組(P<0.05)，而兩組血清中IL-6的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩組腺樣體組織中IL-6的表達均高于血清中IL-6的表達(P<0.05)。

表1 兩組腺樣體組織和血清中IL-6的濃度

注：* 與單純腺樣體肥大組比較，P<0.05；△與同組腺樣體組織IL-6含量比較，P<0.05

3 討論

據(jù)報道細胞因子(cytokine, CK)存在于OME的中耳積液中，參與OME的形成及發(fā)展演變過程[2,3]。IL-6在CK網(wǎng)絡(luò)中可發(fā)揮多種效應(yīng)，其主要功能是促進B細胞的增殖、分化,并誘導(dǎo)成熟B細胞分泌抗體，促進激活的T細胞增殖等[4]。

Yellon等[5,6]發(fā)現(xiàn)慢性O(shè)ME患兒中耳積液中存在IL-6，提示IL-6與分泌性中耳炎密切相關(guān),且在疾病的不同時期表達濃度不同。Kiroglu[7]研究發(fā)現(xiàn)腺樣體組織中淋巴細胞、肥大細胞、漿細胞、巨噬細胞、樹狀細胞增多，反映腺樣體上皮有強抗原表達。肥大細胞在介導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)中具有重要作用，近年來的研究證實,肥大細胞除了釋放炎癥介質(zhì)外,還是除淋巴細胞外另一個產(chǎn)生細胞因子的重要來源[8～10]，它所釋放的IL-13、IL-6、IL-8、TNF-α等都是在變態(tài)反應(yīng)中起重要作用的細胞因子，其中IL-6具有促進肥大細胞增殖、抑制凋亡的作用[11,12]。而在炎癥過程中,肥大細胞激活后可釋放多種分泌性介質(zhì),包括組胺、類胰蛋白酶(tryptase)、糜蛋白酶、蛋白多糖、白三烯和細胞因子，其中tryptase的含量最大,約占肥大細胞分泌顆粒中蛋白質(zhì)總量的一半。類胰蛋白酶可使外周血單核細胞釋放IL-6、TNF-α增加[13]。近年來越來越多的研究表明OME是變態(tài)反應(yīng)的一種結(jié)果,現(xiàn)已證實,Th1降低或/和Th2增高導(dǎo)致的Th1/Th2平衡失調(diào),是變態(tài)反應(yīng)的重要原因[14]，Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細胞因子，孫榮等[15]研究提示Th2類細胞因子的增加，刺激骨髓中嗜酸粒細胞增殖、分化，向黏膜表面趨化和移行，損傷黏膜上皮，導(dǎo)致Th2優(yōu)勢反應(yīng)，引起Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)。

從文中結(jié)果可見，兩組患兒腺樣體組織中的IL-6的濃度明顯高于同組血清中的濃度，并且在腺樣體肥大伴分泌性中耳炎組的腺樣體組織中IL-6的濃度高于單純腺樣體肥大組，提示腺樣體組織中IL-6的高表達導(dǎo)致的局部免疫異常，經(jīng)上行途徑引起中耳的免疫異常，對中耳炎的發(fā)病起到了一定作用，可能是形成中耳積液的主要機制之一。

4 參考文獻

1 祝威，汪欣，杜寶東．殺菌通透性增強蛋白對分泌性中耳炎大鼠中耳鼓膜TNF—a和L一6表達的影響[J]．吉林大學(xué)學(xué)報，2004，301：41.

2 韓朝冬，葛文勝．細胞因子與分泌性中耳炎的發(fā)病學(xué)關(guān)系[J]．山東醫(yī)大基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，14：376.

3 李潔，趙守琴．免疫調(diào)節(jié)相關(guān)細胞因子在分泌性中耳炎中的作用[J]．國際耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2008,32:144.

4 龔非力,主編.基礎(chǔ)免疫學(xué)[M].武漢:湖北科學(xué)技術(shù)出版社,1998.127～150.

5 Yellon RF,Leonard G,Marucha PT,et al.Characterization of cytokines present in middle ear effusions [J].Laryngoscope,1991,1010:165.

6 Yellon RF,Lennard G,Marucha PT,et al.Demonstration of interleukin-6 in middle ear effusions [J].Arch Otolaryngol Head Neck Surg,1992,118:745.

7 Kiroglu MM,Ozbilgin K,Aydogan B,et al.Adenoids and otitis media with effusion:A morphological study[J].Am J Otolaryngol,1998,19:244.

8 MiiIlerA,Henz BM,Grutzkau A,et al.Comparative cytokine gene expression regulation and release by human mast cells[J]. Immunology,1998,93:289.

9 Lippert U,Krugerk Rasagakes S，Moller A,et al. Pham acological modulation of IL-6 and IL-8 secretion by the HI-antagonist decarboethoxy-loratadine and dexamethasone by human mast and basophilic cell lines[J].Exp Dermatol,1995, 4 :272.

10 Lippert U,Moller A,Welker P,et al.Inhibition of cytokine secretion from human leukemic mast cells and basophils by HI-and H2-receptor antagonists[J].Exp Dematol,2000,9:118.

11 Bischofl SC,Sellge C.Mast cell hyperplasia：Role of cytokine [J]. Int Arch Allergy Immimol，2002,127:118.

12 Kambe M,Kambe N，Oskerilian CA,et al, IL-6 attenuates apoptosis,while neither IL-6 nor IL-10 affect the numbers or protease phenotype of fetal liver-derived human mast cells [J].Clin Exp Allergy,2001,31:1 077.

13 Malamud V,Vaaknin A,Abramsky O,et al.Tryptase activates peripheral blood mononuclear cells causing the synthesis and release of TNF-α alpha,IL-6 and IL-1 beta:Possible relevance to multiple sclerosis[J].Neuroimmunol, 2003,138:115.

14 Del Prete GI,De Carli M,Maslromauro L,et al.Purified protein derivative of Mycobacterium tube rculosis and exctory-sectory antigen of Toxocara canis expand in vitro human T cells with stable and opposite(type I T helper or type 2 T helper)profile of cytokine production[J].J Clin invest,1991, 88:346.

15 孫榮，洪蘇玲，唐新業(yè).變態(tài)反應(yīng)性中耳炎動物模型的建立及Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)與分泌性中耳炎關(guān)系的探討[J].臨床耳鼻咽喉科雜志，2005,19：170.