毛曉紅 牟群芳 徐 敏 王 玨 張婷婷 張繼國(guó)

(1. 河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，河北 石家莊 050031； 2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266021；3.泰山醫(yī)學(xué)院，山東 泰安 271016)

吲哚-2,3-二酮是來(lái)自于龍蝦并維持其生存所必需的一種天然海洋活性物質(zhì)，現(xiàn)已證明也是存在于海洋生物、中藥青黛和人體內(nèi)的天然活性物質(zhì)[1]。吲哚-2,3-二酮是成分單一的紫紅色有機(jī)天然物質(zhì)，化學(xué)結(jié)構(gòu)明確，其單體己可合成。研究表明，作為一種結(jié)構(gòu)明確的天然海洋活性物質(zhì)，吲哚-2,3-二酮具有抗病毒[2,3]、抗真菌[4]、抗腫瘤[5]、抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用[6]且毒性較小[7]，陰道炎是婦科常見(jiàn)病，白色念珠菌也是感染源之一，為開(kāi)發(fā)其新的藥用價(jià)值，對(duì)吲哚-2,3-二酮用于制備治療陰道炎外用制劑進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1試劑和儀器 吲哚-2,3-二酮明膠栓劑：由青島醫(yī)學(xué)院藥理組提供。雙唑泰栓：雙唑泰栓由錦州市制藥五廠生產(chǎn)，主要成分：克霉唑、甲硝唑、醋酸氯已定。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雌性SD大鼠100只，體重160～180 g,未交配，由青島市藥檢所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，置于室溫(19±2)℃,24小時(shí)晝夜循環(huán)光照條件下生活，自由飲水及進(jìn)食，于實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室1周。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1造模 將50只大鼠從陰道口注入濃度為5.6×107/ml的白色念珠菌液0.1 ml，每天1次，連續(xù)2次，10 d后取大鼠陰道分泌物做菌培養(yǎng)，培養(yǎng)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果即表明真菌性陰道炎造模成功。按同樣的方法，將濃度為5×108/ml脆弱擬桿菌液0.1 ml注入其余50只大鼠陰道內(nèi)，連續(xù)2次，10 d后取大鼠陰道分泌物做菌培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性，說(shuō)明厭氧菌性陰道炎造模成功。

1.3.2給藥，結(jié)果統(tǒng)計(jì) 將40只感染白色念珠菌大鼠隨機(jī)分成5組，每組8只，設(shè)置不給藥的模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(雙唑泰栓劑，每天陰道塞入含50 mg/kg的栓劑，連續(xù)7d)和吲哚-2,3-二酮明膠栓劑高、中、低劑量組(劑量分別為50，25，10 mg/kg，每天陰道塞入受試栓劑1次，連續(xù)7 d)，各組動(dòng)物分別在給藥前，給藥后4 d、8 d取陰道分泌物，然后置沙氏培養(yǎng)基上培養(yǎng)，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

取40只脆弱擬桿菌感染SD大鼠模型，用上述方法以相同分組、劑量給藥、相同時(shí)間取陰道分泌物在厭氧菌專用培養(yǎng)基上培養(yǎng)，置37℃厭氧箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，做菌落計(jì)數(shù)。

根據(jù)菌落數(shù)和陰道分泌物的多少進(jìn)行量化評(píng)分，再根據(jù)評(píng)分進(jìn)行治療效果的評(píng)價(jià)。菌落數(shù)(CFU/ml)小于5，計(jì)為0分；菌落數(shù)在5～10之間，計(jì)為1分；菌落數(shù)在10～100之間，計(jì)為2分；菌落數(shù)在100～1000之間，計(jì)為3分；菌落數(shù)大于1000，計(jì)為4分。陰道分泌物極少、正常，計(jì)為0分；陰道分泌物明顯減少、基質(zhì)樣粘稠，計(jì)為1分；陰道分泌物膿樣、粘稠，計(jì)為2分；陰道分泌物較多，采膿樣性分泌物，計(jì)為3分。各實(shí)驗(yàn)組給藥結(jié)束以后取陰道組織置10%甲醛中固定，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié) 果

高、中、低劑量組吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對(duì)白色念珠菌、脆弱擬桿菌感染的菌落計(jì)數(shù)療效均優(yōu)于模型對(duì)照組，給藥后4 d顯效，8 d菌落數(shù)繼續(xù)下降(P<0.01或P<0.05)；高、中、低劑量組吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對(duì)白色念珠菌、脆弱擬桿菌感染的陰道分泌物計(jì)數(shù)療效均優(yōu)于模型對(duì)照組，給藥后4 d顯效，8 d分泌物繼續(xù)減少(P<0.01或P<0.05)。見(jiàn)表1，2。

白色念珠菌陰道炎和脆弱擬桿菌陰道炎模型經(jīng)過(guò)治療后陰道組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示：模型組陰道壁三層結(jié)構(gòu)完好，粘膜下層、肌層見(jiàn)多量散在廣泛分布的中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)小血管擴(kuò)張充血，粘膜下層疏松水腫。吲哚-2,3-二酮明膠栓劑高劑量組陰道三層結(jié)構(gòu)完整，粘膜下層、肌層見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，細(xì)小血管輕度擴(kuò)張充血，中、小劑量組粘膜下層、肌層見(jiàn)中量中性白細(xì)胞、單核細(xì)胞等浸潤(rùn)，細(xì)小血管擴(kuò)張充血。雙唑泰栓陽(yáng)性對(duì)照組陰道壁結(jié)構(gòu)完整，粘膜下層見(jiàn)少許中性白細(xì)胞、單核細(xì)胞浸潤(rùn)。此結(jié)果表明雙唑泰栓陽(yáng)性藥與吲哚-2,3-二酮明膠栓劑治療實(shí)驗(yàn)性陰道炎后，感染炎癥顯著好轉(zhuǎn)，與給藥前相比病變明顯減輕。

表1 吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性陰道炎分泌物菌落的影響

注：與模型組比較，*P<0．05，**P<0．01。

表2 吲哚-2,3-二酮明膠栓劑治療大鼠實(shí)驗(yàn)性陰道炎對(duì)其分泌物的影響

注：與模型組比較，*P<0．05，**P<0．01。

3 討 論

陰道炎是常見(jiàn)的婦科疾病，為女性陰道及其周圍的結(jié)締組織發(fā)生炎癥的一類疾病，主要表現(xiàn)為外陰搔癢，陰道分泌物增多，發(fā)病率高，且易反復(fù)發(fā)作，其發(fā)病機(jī)制涉及真菌、病毒、感染、免疫低下，或在婦科小手術(shù)和計(jì)劃生育手術(shù)中無(wú)菌操作觀念淡漠等原因，使陰道炎的發(fā)病率增高。臨床上陰道炎的治療現(xiàn)多采用局部或全身使用抗菌消炎藥的方法，我們已知臨床長(zhǎng)期使用抗菌消炎藥等西藥，可引起陰道的菌群失調(diào)，而炎癥及其繼發(fā)炎性反應(yīng)并未得到有效的控制，且毒副作用較大，并可能損害卵細(xì)胞和生殖健康。天然產(chǎn)物毒性小，從中篩選并制定出抗陰道炎的藥物研究，可能是解決陰道炎疾病的重要途徑。

現(xiàn)已證明，吲哚-2,3-二酮不僅存在于海洋生物中，也存在于清熱解毒中藥大青葉、板藍(lán)根、青黛中和人尿中[9]，研究已經(jīng)證實(shí)了吲哚-2,3-二酮的毒性低，具有保護(hù)神經(jīng)、抗病毒[2-3]、抗真菌[4]、抗腫瘤[5]、抗炎和免疫調(diào)節(jié)[6]等作用，在離體和活體證明了其抗衰老、抗氧化作用機(jī)制等活性，對(duì)吲哚-2,3-二酮的進(jìn)行動(dòng)物急性、慢性毒理實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)吲哚-2,3-二酮長(zhǎng)期大量口服用藥，對(duì)動(dòng)物無(wú)明顯損害，未發(fā)現(xiàn)因蓄積而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，是一種安全可靠的藥物[7,9]。

本研究結(jié)果表明，吲哚-2,3-二酮明膠栓劑對(duì)大鼠白色念珠菌和脆弱擬桿菌造成的實(shí)驗(yàn)性陰道炎具有治療作用，為開(kāi)發(fā)天然低毒的控制陰道炎藥物提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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