鄒紅敏

（四川省資中縣疾病預(yù)防控制中心，四川 資中 641200）

資中縣一酒樓曾發(fā)生一起食物中毒，我們從該酒樓2份食物留樣、6份患者直腸拭子中分離出一株類志賀鄰單胞菌。該菌不僅與痢疾志賀菌和侵襲性大腸埃希菌有著共同抗原，與兩菌診斷血清發(fā)生交叉凝集，還與志賀菌有著極為相似的生化反應(yīng)。

1 流行病學(xué)概況

1.1 基本情況

資中縣某酒樓同餐進(jìn)食460余人，有209人先后出現(xiàn)腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐等消化道癥狀，腹痛以上腹部和臍周持續(xù)性、陣發(fā)性絞痛為主，腹瀉多為黃綠色水樣便，少數(shù)有血便，無(wú)明顯里急后重癥狀。血常規(guī)結(jié)果：白細(xì)胞總數(shù)增高者占57.7%（45/78），中性粒細(xì)胞增高者占46.2%（36/78）。大便常規(guī)結(jié)果：白細(xì)胞“+”6例，有紅細(xì)胞異常5例，大便隱血試驗(yàn)陽(yáng)性2例，發(fā)現(xiàn)吞噬細(xì)胞2例。

1.2 流調(diào)醫(yī)生開(kāi)具的檢驗(yàn)項(xiàng)目

志賀菌、沙門菌、致瀉性大腸埃希菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌。

2 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

2.1 樣品采集

采集食物留樣12份，嘔吐物2份，患者直腸拭子12份，從業(yè)人員直腸拭子5份。

2.2 檢驗(yàn)項(xiàng)目與方法

志賀菌、沙門菌、致瀉性大腸埃希菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌。按GB/T 4789-2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》[1]、《霍亂防治手冊(cè)》（第五版）[2]和GB 14938-94《食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)處理總則》[3]進(jìn)行檢驗(yàn)和判斷。

2.3 樣品處理及分離鑒定

2.3.1 直腸拭子直接劃線接種于SS、Mac、4號(hào)瓊脂平板、堿性瓊脂平板、血平板及氯化鈉結(jié)晶紫平板，37℃孵育24h。

2.3.2 所有樣品都經(jīng)GN、MM、3.5%氯化鈉結(jié)晶紫、7.5%氯化鈉肉湯、堿性胨水增菌后，劃線接種于SS、Mac、4號(hào)瓊脂平板、堿性瓊脂平板、血平板及氯化鈉結(jié)晶紫平板，37℃孵育24h。

2.3.3 挑取SS、Mac平板上扁平、無(wú)色、透明或半透明、光滑、細(xì)小的可疑菌落，接種三糖鐵斜面和3.5%氯化鈉三糖鐵斜面。

2.3.4 挑取 4號(hào)瓊脂平板、堿性瓊脂平板上扁平、無(wú)色、半透明、光滑的可疑菌落，與O1、O139群霍亂診斷學(xué)清不凝集。

2.3.5 挑取氯化鈉結(jié)晶紫平板扁平、無(wú)色、透明的可疑菌落，接種3.5%氯化鈉三糖鐵斜面。

2.3.6 挑取血平板上溶血、無(wú)色、扁平、細(xì)小的可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，為革蘭陰性桿菌，兩端鈍園。接種三糖鐵斜面和3.5%氯化鈉三糖鐵斜面。

2.3.7 根據(jù)三糖鐵的結(jié)果，選取底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，斜面不變的培養(yǎng)物，挑取菌苔分別與志賀菌、沙門菌診斷學(xué)清做玻片凝集試驗(yàn)，同時(shí)接種11種微量生化反應(yīng)管和做藥敏試驗(yàn)。

2.4 結(jié)果

從2份食物留樣、6份患者直腸拭子中分離出一株可疑菌，三糖鐵的結(jié)果為底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，斜面不變，無(wú)動(dòng)力，不產(chǎn)H2S。氧化酶陰性。與志賀四種多價(jià)血清、痢疾志賀菌2型血清凝集，鹽水對(duì)照不凝集。11種微量生化反應(yīng)為：發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；鳥(niǎo)氨酸陽(yáng)性；賴氨酸、H2S、靛基質(zhì)、乳糖、衛(wèi)矛醇、苯丙氨酸、尿素、枸櫞酸鹽均為陰性。根據(jù)血清學(xué)結(jié)果，結(jié)合生化反應(yīng)，初步判定該菌為痢疾志賀菌2型。但與患者無(wú)明顯里急后重的癥狀不吻合。再用侵襲性大腸埃希菌診斷血清做凝集試驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)該菌與侵襲性大腸埃希菌OK多價(jià)Ⅰ、O28ac∶K73血清發(fā)生凝集。于是懷疑該菌不是痢疾志賀菌。由于我室條件有限，立即向上級(jí)請(qǐng)求技術(shù)資源。

四川省CDC的老師趕到我室，對(duì)該菌重新鑒定，發(fā)現(xiàn)該菌除與痢疾志賀菌2型血清凝集外，還與侵襲性大腸埃希菌血清凝集，即作出“不確定為痢疾志賀菌2型”的判斷。因基層試驗(yàn)條件有限，帶回省CDC做進(jìn)一步鑒定。經(jīng)全面生化，最后鑒定為“類志賀鄰單胞菌”。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌對(duì)氯霉素、四環(huán)素、痢特靈、先鋒霉素、復(fù)方TMP敏感，對(duì)青霉素、鏈霉素耐藥。

3 討 論

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、患者臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，依據(jù)GB 14938-94《食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)處理總則》，判斷這是一起由類志賀鄰單胞菌引起的食物中毒。

氧化酶試驗(yàn)是腸桿菌科與弧菌科細(xì)菌鑒定的“分水嶺”。該菌氧化酶試驗(yàn)四川省CDC為陽(yáng)性，而我室卻為陰性。原因是在滴加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液后，顯淡粉紅色，再加α-萘酚溶液后，不顯藍(lán)色，因此錯(cuò)誤判斷為陰性，為該菌的誤判埋下了伏筆。

類志賀鄰單胞菌為弧菌科鄰單胞菌屬中的一個(gè)種，菌體一端有數(shù)根鞭毛，動(dòng)力陽(yáng)性。而本菌動(dòng)力卻為陰性，可能與該菌是從食物留樣中分離出來(lái)，細(xì)菌在加熱過(guò)程中受損有關(guān)。

此次病原菌的分離，暴露出基層疾控中心的很多問(wèn)題。如檢驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)不足、設(shè)備簡(jiǎn)陋、應(yīng)急物資的準(zhǔn)備不充分等。提醒我們應(yīng)該加強(qiáng)業(yè)務(wù)培訓(xùn)，從不同渠道獲取專業(yè)知識(shí)，積極積累經(jīng)驗(yàn)，以提高自身業(yè)務(wù)水平。在細(xì)菌鑒定過(guò)程中，不能僅憑血清凝集及部分生化結(jié)果吻合就下結(jié)論。另外建議疾控中心設(shè)有用于購(gòu)買應(yīng)急物資的專項(xiàng)資金，不將這部分成本也計(jì)入檢驗(yàn)科，保證我們有足夠的貯備以應(yīng)對(duì)不時(shí)之需。

[1] GB/T 4789-2003《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)》[S].2003.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部疾病控制司.霍亂防治手冊(cè)[S].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社,1999..

[3] GB 14938-94《食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)處理總則》[S].1994.