張 穎 高 鵬 許 穎 金 濤 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，吉林 長春 300)

目前帕金森病(PD)的病因和發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，可能是遺傳和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)在許多與細(xì)胞周期性增殖和凋亡相關(guān)的蛋白質(zhì)的降解中起重要作用。UPS可清除真核細(xì)胞內(nèi)突變、損傷及異常折疊的蛋白質(zhì)，起到調(diào)控蛋白質(zhì)和維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的作用。在一些家族性PD中發(fā)現(xiàn)α-synuclein、parkin和UCH-L1發(fā)生基因突變，突變后的三種蛋白質(zhì)與UPS的功能損害密切相關(guān)。尸檢研究表明在散發(fā)PD患者的黑質(zhì)中也存在UPS功能的降低。這提示UPS功能受損可能是不同病因作用的共同途徑。本文就UPS與PD間關(guān)系的研究進(jìn)展做一綜述。

1 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)與蛋白質(zhì)的降解

許多有害蛋白質(zhì)的降解過程是以蛋白質(zhì)與泛素分子鏈的結(jié)合開始的，蛋白質(zhì)與泛素分子結(jié)合是被蛋白酶體識(shí)別和降解的標(biāo)志。靶蛋白的多聚泛素化過程是由一系列酶所介導(dǎo)的〔1〕。首先，泛素單體在ATP依賴的反應(yīng)中由泛素活化酶(E1)激活。激活的泛素被傳遞給一種泛素耦聯(lián)酶(E2)，然后通過ATP依賴的反應(yīng)由一種泛素蛋白連接酶(E3)催化共價(jià)連接到靶蛋白上。上述反應(yīng)重復(fù)進(jìn)行，持續(xù)地將泛素分子加到靶蛋白上導(dǎo)致多聚泛素鏈的形成。多聚泛素化的蛋白質(zhì)由26S蛋白酶體識(shí)別并降解。

蛋白酶體是在胞漿、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核周區(qū)域及真核細(xì)胞的細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)的具有多催化作用的蛋白酶〔2〕。26S蛋白酶體由一個(gè)蛋白水解酶核心(20S蛋白酶體)及其調(diào)節(jié)亞單位(PA700)組成。20S蛋白酶體是由28個(gè)亞單位組成的四個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)軸向堆積而成的一個(gè)中空的圓柱狀結(jié)構(gòu)，可在其內(nèi)部發(fā)生蛋白水解。PA700是26S蛋白酶體主要的調(diào)節(jié)亞單位，PA700至少含有6種ATP酶，執(zhí)行至少3種ATP依賴性功能。PA700和20S蛋白酶體的結(jié)合利于蛋白質(zhì)的進(jìn)入，并為蛋白降解提供能量。26S蛋白酶體介導(dǎo)的水解終產(chǎn)物是小肽片段，這些小肽片段再由其它的蛋白酶進(jìn)一步處理，產(chǎn)生它們的組成氨基酸。

在多聚泛素化的蛋白質(zhì)進(jìn)入蛋白酶體核心之前，泛素C末端水解酶L1(UCH-L1)將多聚泛素鏈與靶蛋白拆開并分解泛素鏈以生成自由的單體泛素分子，后者再進(jìn)入泛素循環(huán)〔1〕。由此可見，蛋白質(zhì)的泛素化是泛素與泛素酶共同作用的動(dòng)態(tài)過程。UPS的功能缺陷將導(dǎo)致蛋白質(zhì)的異常積聚，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)不溶性包涵體的形成及細(xì)胞平衡和完整性的破壞。此外，蛋白質(zhì)的積聚能導(dǎo)致Jun激酶和細(xì)胞凋亡的上調(diào)〔3〕。

2 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)與遺傳性帕金森病

2.1 Parkin突變與PD Parkin蛋白由465個(gè)氨基酸組成，其編碼基因的各種缺失、刪減及點(diǎn)突變可引起常染色體隱性遺傳性少年型帕金森病(AR-JP)。

Parkin具有泛素蛋白連接酶E3的功能。在AR-JP患者腦中發(fā)現(xiàn)變性腦區(qū)和未受影響腦區(qū)parkin的水平和酶活性降低甚至缺乏〔4〕。Parkin突變導(dǎo)致不能清除其底物蛋白質(zhì)，而正常情況下底物蛋白質(zhì)可被parkin泛素化然后被蛋白酶體降解。在細(xì)胞系中表達(dá)突變的parkin可導(dǎo)致蛋白酶體活性降低、氧化應(yīng)激水平增加及自由基介導(dǎo)的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的損害〔5〕。因此，parkin突變通過阻止底物蛋白質(zhì)的正常泛素化及經(jīng)蛋白酶體的降解，最終導(dǎo)致正常細(xì)胞功能的破壞和疾病的發(fā)生。

2.2 UCH-L1突變與PD UCH-L1異常的常染色體顯性遺傳性PD首先在一對(duì)兄弟間發(fā)現(xiàn)，遺傳分析顯示編碼UCH-L1的基因發(fā)生錯(cuò)譯突變，導(dǎo)致蛋白質(zhì)內(nèi)93位的異亮氨酸由蛋氨酸替代。UCH-L1屬于去泛素酶家族，約占腦組織蛋白質(zhì)總含量的1%，其功能主要是參與單體泛素分子的再循環(huán)〔6〕。UCH-L1突變病人腦中是否存在UCH-L1活性及表達(dá)的改變目前還不清楚。在大腸桿菌中表達(dá)突變的UCH-L1，結(jié)果顯示這種酶的活性下降50%〔7〕。最近的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠中腦腹側(cè)細(xì)胞的培養(yǎng)中用泛素乙醛阻斷UCH-L1作用，可導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元出現(xiàn)劑量依賴性的變性并伴有泛素水平的降低及α-synuclein陽性包涵體的形成〔8〕。因此PD病人UCH-L1的突變可能導(dǎo)致酶活性的喪失，減少泛素自由單體的供應(yīng)，不能正常標(biāo)記底物蛋白質(zhì)，從而影響蛋白質(zhì)的清除，引起黑質(zhì)病理改變。

2.3 α-synuclein突變與PD α-synuclein是Lewy小體中的主要組分。其基因的點(diǎn)突變A53T和A30P引起常染色體顯性遺傳性PD。α-synuclein的正常功能尚不完全清楚，推測(cè)與突觸功能，例如突觸可塑性及多巴胺能神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞有關(guān)。最近的研究提示α-synuclein還與多巴胺的生物合成有關(guān)〔9〕。也有證據(jù)提示α-synuclein能發(fā)揮分子伴侶的作用，參與異常蛋白質(zhì)的再折疊及促進(jìn)異常蛋白質(zhì)進(jìn)入蛋白酶體并在那里降解〔10〕。

在多巴胺能神經(jīng)元和其他培養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)突變的α-synuclein，能誘導(dǎo)神經(jīng)元變性及α-synuclein和泛素陽性包含體形成，并且引起蛋白酶體活性的降低〔11〕。過表達(dá)野生型和突變型αsynuclein的果蠅出現(xiàn)多巴胺能神經(jīng)元喪失和Lewy小體樣包含體形成，共表達(dá)HSP70可以減輕這種異常，而干擾HSP70的活性則能加重α-synuclein介導(dǎo)的毒性〔12〕。然而，在轉(zhuǎn)基因嚙齒類動(dòng)物方面的研究卻出現(xiàn)有爭議的結(jié)果。一些研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)A53T基因鼠在成年出現(xiàn)黑質(zhì)－紋狀體變性、α-synuclein及泛素陽性包含體形成和運(yùn)動(dòng)障礙。然而也有其他的報(bào)道稱該種模型只有紋狀體神經(jīng)纖維喪失而無黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性，也沒有黑質(zhì)包含體形成及運(yùn)動(dòng)障礙。這些研究結(jié)果的差異可能與實(shí)驗(yàn)方法及動(dòng)物品種不同有關(guān)。

α-synuclein突變引起多巴胺能神經(jīng)元死亡的生化機(jī)制可能涉及它對(duì)UPS清除的抵抗及蛋白酶體的損壞〔13〕。突變及損傷的蛋白質(zhì)被認(rèn)為可以飽和并抑制UPS的活性，導(dǎo)致大量的未能被充分降解的蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)聚集。野生型α-synuclein可由蛋白酶體降解，但是突變的α-synuclein相對(duì)地抵抗蛋白水解。此外，在PC12細(xì)胞，突變型的α-synuclein還可抑制UPS的活性，導(dǎo)致不能被充分降解的泛素化蛋白質(zhì)的進(jìn)一步聚集、包含體的形成及細(xì)胞死亡。同時(shí)，表達(dá)突變的α-synuclein后，培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)蛋白酶體抑制劑及氧化應(yīng)激更加敏感，進(jìn)一步提示它對(duì)UPS活性的干預(yù)。事實(shí)上，α-synuclein可直接與PA700相互作用，直接抑制蛋白酶體活性。因此，UPS清除突變的αsynuclein的功能衰竭能夠解釋一部分家族PD病人α-synuclein及其他蛋白質(zhì)在Lewy小體內(nèi)的聚集、細(xì)胞功能的改變及神經(jīng)變性。

3 泛素－蛋白酶體系統(tǒng)與散發(fā)性帕金森病

逐漸增加的證據(jù)提示，蛋白水解應(yīng)激構(gòu)成散發(fā)PD神經(jīng)變性及Lewy小體形成的基礎(chǔ)。在黑質(zhì)氧化蛋白質(zhì)的聚集提示在這一腦區(qū)蛋白質(zhì)的清除是不充分的。也有在黑質(zhì)蛋白質(zhì)沉積增加的證據(jù)，更提示了蛋白質(zhì)在該區(qū)域的聚集。推測(cè)這種蛋白水解應(yīng)激及蛋白質(zhì)聚集可能與散發(fā)PD黑質(zhì)26/20S蛋白酶體結(jié)構(gòu)及功能的缺陷有關(guān)。

對(duì)散發(fā)PD患者尸檢標(biāo)本的研究發(fā)現(xiàn)，黑質(zhì)中存在蛋白酶體活性的選擇性損害及蛋白酶體亞單位表達(dá)的降低〔14〕。事實(shí)上，在散發(fā)PD患者黑質(zhì)20S/26S蛋白酶體三種酶活性的每一種都大約有40%被抑制，而皮層及紋狀體則沒有這種改變。同樣，在散發(fā)PD黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)20S蛋白酶體的α亞單位而不是β亞單位顯著缺失，而在其他腦區(qū)和在年齡匹配的對(duì)照組卻沒有觀察到這種現(xiàn)象。α亞單位的丟失可引起26/20S蛋白酶復(fù)合體的不穩(wěn)定性、蛋白酶體裝配的缺陷及PA700與20S蛋白酶體結(jié)合能力的降低，這些變化均能導(dǎo)致蛋白酶體功能活性的損害。此外，與其他腦區(qū)比較，散發(fā)PD黑質(zhì)中PA700的表達(dá)水平顯著降低，而PA28的表達(dá)水平更是非常顯著地降低，幾乎檢測(cè)不到?？傊陨涎芯烤崾綰PS功能紊亂可能是構(gòu)成散發(fā)PD黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元易感及變性的基礎(chǔ)。

4 泛素－蛋白酶體系統(tǒng)與帕金森病模型

如上所述，PD病人確實(shí)存在UPS功能的損害。然而，還不知道UPS功能的損害是神經(jīng)變性的原發(fā)性還是繼發(fā)性因素。

在大鼠應(yīng)用線粒體復(fù)合體Ⅰ抑制劑魚藤酮，可選擇性地誘導(dǎo)黑質(zhì)－紋狀體通路多巴胺能神經(jīng)變性及富含α-synuclein的胞漿包含體形成，因而可模擬PD的病理特征〔15〕。為了理解UPS和PD發(fā)病機(jī)制間的關(guān)系，在應(yīng)用魚藤酮的大鼠檢驗(yàn)大腦皮層、紋狀體及中腦蛋白酶體的功能，發(fā)現(xiàn)腹側(cè)中腦20S蛋白酶體的酶活性顯著地和選擇性地降低。此外，腹側(cè)中腦中被泛素標(biāo)記的蛋白質(zhì)(蛋白質(zhì)降解的指示劑)的水平也顯著增加，這進(jìn)一步提示26S蛋白酶體降解通路的損害〔16〕。蛋白酶體功能的損害可能由復(fù)合體Ⅰ抑制誘導(dǎo)的能量產(chǎn)生障礙(如ATP的產(chǎn)生)引起，或者由復(fù)合體Ⅰ抑制誘導(dǎo)的自由基形成增加所致。應(yīng)用腹側(cè)中腦原代細(xì)胞培養(yǎng)的研究提示，魚藤酮誘導(dǎo)的蛋白酶體功能損害主要由于ATP的耗竭而非自由基的產(chǎn)生。然而，慢性暴露于低水平的魚藤酮極少引起生物能量變化，但可顯著增加氧化應(yīng)激的水平，提示增加的氧化應(yīng)激可能對(duì)神經(jīng)元變性起更大的作用。在魚藤酮處理后觀察到氧化損傷蛋白質(zhì)水平的增加，這可以通過阻礙UPS或者通過直接氧化修飾蛋白酶體自身的亞單位損害蛋白酶體通路。研究顯示〔17〕，在SH-SY5Y成神經(jīng)瘤細(xì)胞，魚藤酮對(duì)復(fù)合體Ⅰ的抑制通過增加氧化修飾蛋白質(zhì)產(chǎn)物來降低蛋白酶體的活性，這也包括蛋白酶體自身的氧化修飾。因此，增加的氧化應(yīng)激可抑制蛋白酶體的功能并最終導(dǎo)致神經(jīng)元變性。

最新的實(shí)驗(yàn)表明，給成年大鼠系統(tǒng)地注射天然的(epoxomicin)或人工合成的(PSI)蛋白酶體抑制劑，經(jīng)過1～2 w的潛伏期，動(dòng)物出現(xiàn)進(jìn)展型的帕金森綜合征，表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)徐緩、僵直、震顫及姿勢(shì)異常，經(jīng)阿樸嗎啡治療上述癥狀可明顯改善〔18〕。正電子發(fā)射x線斷層攝影證實(shí)，C11標(biāo)記的CFT與紋狀體多巴胺能神經(jīng)末梢的結(jié)合降低，提示黑質(zhì)－紋狀體路徑的變性。尸檢分析顯示紋狀體多巴胺的損耗及黑質(zhì)致密部伴有凋亡及炎癥的多巴胺能細(xì)胞死亡。另外，神經(jīng)變性也發(fā)生在藍(lán)斑、迷走神經(jīng)背側(cè)運(yùn)動(dòng)核及Meynert基底核。在神經(jīng)變性部位，部分殘存的神經(jīng)元可見胞漿內(nèi)嗜曙紅的、含有α-synuclein/泛素的、類似Lewy小體的包涵體。蛋白酶體抑制劑所誘導(dǎo)的動(dòng)物模型很好地模擬了PD的病理特征，為研究PD發(fā)病機(jī)制及藥物治療提供了新的有價(jià)值的模型。

5 泛素－蛋白酶體系統(tǒng)與氧化應(yīng)激

PD與氧化應(yīng)激及線粒體功能紊亂密切相關(guān)。氧化應(yīng)激狀態(tài)可來自于:①有高度活性的自由基產(chǎn)物增加;②清除這些活性基團(tuán)的能力降低;③氧化損傷的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及DNA產(chǎn)生的增加，及③對(duì)細(xì)胞有毒性作用的氧化產(chǎn)物清除的降低。許多細(xì)胞過程可以形成自由基，包括線粒體氧化呼吸鏈及多巴胺代謝。在線粒體電子傳遞鏈的某些位點(diǎn)存在電子泄漏。與PD相關(guān)的電子泄漏位點(diǎn)存在于電子傳遞鏈的復(fù)合體Ⅰ內(nèi)，與魚藤酮等抑制劑的結(jié)合位點(diǎn)極其接近。對(duì)線粒體呼吸鏈來講，并不需要明顯的損害，只要部分抑制便能導(dǎo)致自由基的形成及氧化應(yīng)激。事實(shí)上，大鼠體內(nèi)及成神經(jīng)纖維瘤細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)顯示，魚藤酮處理后的復(fù)合體Ⅰ抑制可導(dǎo)致蛋白質(zhì)羰基水平增加，標(biāo)志氧化應(yīng)激的存在〔19，20〕。此外，在PD病人黑質(zhì)觀察到脂質(zhì)過氧化物及DNA和蛋白質(zhì)氧化損傷的增加。在PD黑質(zhì)中也觀察到了谷胱甘肽水平的降低，谷胱甘肽是一種自由基清除劑，它的降低進(jìn)一步提示PD中存在氧化應(yīng)激。

此外，由于基礎(chǔ)狀態(tài)下多巴胺在自身氧化及代謝過程中可產(chǎn)生自由基，因而多巴胺能神經(jīng)元對(duì)額外增加的氧化應(yīng)激尤為易感〔21〕。多巴胺有自身氧化并生成多巴胺-醌、超氧化物自由基及過氧化氫的傾向，所有這些物質(zhì)或者本身就是高度活性分子或者能夠快速產(chǎn)生自由基。額外的氧化損傷如環(huán)境中線粒體毒素引起的氧化損傷能增加多巴胺能神經(jīng)元的易感性。

氧化應(yīng)激可直接或間接地影響UPS。蛋白酶體組分要么直接被氧化〔22〕要么被增加的氧化蛋白產(chǎn)物所抑制，這都可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)損傷蛋白質(zhì)的毒性聚集。多巴胺也能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞UPS的抑制，這部分依賴于自由基的產(chǎn)生及多巴胺的再攝取〔23〕。此外，PD病人黑質(zhì)低水平的蛋白酶體激活因子也能使黑質(zhì)多巴胺能細(xì)胞對(duì)氧化及水解應(yīng)激更易感〔24〕。

6 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)的抑制、蛋白質(zhì)的沉積及多巴胺細(xì)胞的死亡

理解UPS在PD發(fā)病機(jī)理中作用的一個(gè)方法是看UPS的損害能否復(fù)制PD的病理特征，這包括胞漿包含體的形成及選擇性的黑質(zhì)-紋狀體通路的破壞。有人〔25〕將蛋白酶體抑制劑注射至紋狀體，導(dǎo)致酪氨酸羥化酶及DAT免疫染色的丟失，但是沒有明顯的GAD67免疫染色的丟失，這提示藥物引起紋狀體多巴胺終末的選擇性丟失。此外，紋狀體多巴胺及其代謝物DOPAC的水平是降低的，而5-羥色胺的水平?jīng)]有變化，證實(shí)了UPS抑制對(duì)黑質(zhì)-紋狀體多巴胺能通路的選擇性毒性作用。紋狀體UPS抑制也導(dǎo)致黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的退行性變及殘留黑質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)胞漿包涵體的形成。體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)顯示，抑制多巴胺的合成可減輕蛋白酶體抑制劑誘導(dǎo)的毒性，而增加多巴胺可用性的藥物則增強(qiáng)蛋白酶體抑制劑誘導(dǎo)的毒性，這提示UPS抑制對(duì)多巴胺能神經(jīng)元及其終末的選擇性毒性作用依賴于內(nèi)源性多巴胺的可用性〔26〕。但是，這并不能解釋為什么VTA多巴胺能神經(jīng)元不受影響?？赡艿慕忉屖堑鞍酌阁w亞單位在黑質(zhì)及VTA神經(jīng)元的差異性表達(dá)或者在這兩個(gè)區(qū)域蛋白酶體的功能角色不同。

新近報(bào)道，在SH-SY5Y成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系，低水平的慢性蛋白酶體抑制可通過增加自由基的產(chǎn)生及降低復(fù)合體Ⅰ和復(fù)合體Ⅱ的活性顯著地改變線粒體的動(dòng)態(tài)平衡〔27〕，這些改變有助于氧化應(yīng)激。UPS的抑制可復(fù)制PD的突出的特征，因而證實(shí)了PD發(fā)病機(jī)制中涉及UPS功能的損害。

1 Pickart CM.Mechanisms underlying ubiquitination〔J〕.Annu Rev Biochem，2001;70:503-33.

2 Voges D，Zwickl P，Baumeister W.The 26S proteasome:a molecular machine designed for controlled proteolysis〔J〕.Annu Rev Biochem，1999;68:1015-68.

3 Sherman MY，Goldberg AL.Cellular defenses against unfolded proteins:a cell biologist thinks about neurodegenerative diseases〔J〕.Neuron，2001;29(1):15-32.

4 Shimura H，Hattori N，Kubo S，et al.Familial Parkinson disease gene product，parkin，is a ubiquitin-protein ligase〔J〕.Nat Genet，2000;25(3):302-5.

5 Hyun DH，Lee M，Hattori N，et al.Effect of wild-type or mutant parkin on oxidative damage，nitric oxide，antioxidant defences and the proteasome〔J〕.J Biol Chem，2002;277(32):28572-7.

6 Solano SM，Miller DW，Augood SJ，et al.Expression of alpha synuclein，parkin，and ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1 mRNA in human brain:genes associated with familial Parkinson's disease〔J〕.Ann Neurol，2000;47(2):201-10.

7 Leroy E，Boyer R，Auburger G，et al.The ubiquitin pathway in Parkinson's disease〔J〕.Nature，1998;395(6701):451-2.

8 McNaught KSP，Mytilineou C，JnoBaptiste R，et al.Impairment of the ubiquitin-proteasome system causes dopaminergic cell death and inclusion body formation in ventral mesencephalic cultures〔J〕.J Neurochem，2002;81(2):301-6.

9 Perez RG，Waymire JC，Lin E，et al.A role for alpha-synuclein in the regulation of dopamine biosynthesis〔J〕.J Neurosci，2002;22(8):3090-9.

10 Souza JM，Giasson BI，Lee VM，et al.Chaperone like activity of synucleins〔J〕.FEBS Lett，2000;474(1):116-9.

11 Tofaris GK，Layfield R，Spillantini MG.alpha-Synuclein metabolism and aggregation is linked to ubiqutin independent degradation by the proteasome〔J〕.FEBS Lett，2001;509(1):22-6.

12 Auluck PK，Chan E，Trojanowski JQ，et al.Chaperone suppression of alpha-synuclein toxicity in a Drosophila model of Parkinson's disease〔J〕.Science，2002;295(5556):865-8.

13 McNauqht KS，Olanow CW.Proteolytic stress:A Unifying Concept for the Etiopathogenesis of Parkinson's disease〔J〕.Ann Neurol，2003;53(suppl 3):S73-S84.

14 Mc Naught KS，Belizaire R，Isacson O，et al.Altered proteasomal function in sporadic Parkinson's disease〔J〕.Exp Neurol，2003;179(1):38-46.

15 Sherer TB，Kim JH，Betarbet R，et al.Subcutaneous rotenone exposure causes highly selective dopaminergic degeneration and alpha-synuclein aggregation〔J〕.Exp Neurol，2003;179(1):9-16.

16 Betarbet R，Sherer TB，Lund S，et al.Rotenone Models of Parkinson's Disease:Altered Proteasomal Activity Following Sustained Inhibition of Complex I〔J〕.Abstr Soc Neurosci，2003;28:59-64.

17 Shamoto-Nagai M，Maruyama W，Kato Y，et al.An inhibitor of mitochondrial complex I，rotenone，inactivates proteasome by oxidative modification and induces aggregation of oxidized proteins in SH-SY5Y cells〔J〕.J Neurosci Res，2003;74(4):589-97.

18 McNaught KS，Perl DP，Brownell AL，et al.Systemic exposure to proteasome inhibitors causes a progressive model of Parkinson's disease〔J〕.Ann Neurol，2004;56(1):149-62.

19 Sherer TB，Betarbet R，Testa CM，et al.Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease〔J〕.J Neurosci，2003;23(34):10756-64.

20 Sherer TB，Betarbet R，Stout AK，et al.An in vitro model of Parkinson's disease:linking mitochondrial impairment to altered α-synuclein metabolism and oxidative damage〔J〕.J Neurosci，2002;22(16):7006-15.

21 Perez RG，Hastings TG.Could a loss of alpha-synuclein function put dopaminergic neurons at risk〔J〕?J Neurochem，2004;89(6):1318-24.

22 Reinheckel T，Ullrich O，Sitte N，et al.Differential impairment of 20Sand 26S proteasome activities in human hematopoietic K562 cells during oxidative stress〔J〕.Arch Biochem Biophys，2000;377(1):65-8.

23 Keller JN，Huang FF，Dimayuga ER，et al.Dopamine induces proteasome inhibition in neural PC12 cell line〔J〕.Free Radic Biol Med，2000;29(10):1037-42.

24 McNaught KS，Belizaire R，Jenner P，et al.Selective loss of 20S proteasomealpha-subunits in the substantia nigra pars compacta in Parkinson's disease〔J〕.Neurosci Lett，2002;326(3):155-8.

25 Fornai F，Lenzi P，Gesi M，et al.Fine structure and biochemical mechanisms underlying nigrostriatal inclusions and cell death after proteasome inhibition〔J〕.J Neurosci，2003;23(26):8955-66.

26 Xu J，Kao SY，Lee FJ，et al.Dopamine-dependent neurotoxicity of alphasynuclein:a mechanism for selective neurodegeneration in Parkinson disease〔J〕.Nat Med，2002;8(6):600-6.

27 Sullivan PG，Dragicevic NB，Deng JH，et al.Proteasome inhibition alters neural mitochondrial homeostasis and mitochondria turnover〔J〕.J Biol Chem，2004;279(20):20699-707.