吳修法 摘譯 徐潔潔 審校

南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科(南京 210029)

慢性聲帶瘢痕(chronic vocal fold scar)一般繼發(fā)于喉部創(chuàng)傷、炎癥或者手術(shù)之后，由于聲帶固有層組織結(jié)構(gòu)破壞而使聲帶生物力學(xué)功能發(fā)生改變，可導(dǎo)致聲門功能障礙和嚴(yán)重的發(fā)聲困難。以往組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，聲帶瘢痕存在細(xì)胞外組織結(jié)構(gòu)的改變，如：I型膠原沉積物密集或者紊亂，彈性蛋白和核心蛋白多糖減少，纖連蛋白增加以及透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)降低等。這些組織學(xué)變化說明慢性聲帶瘢痕中成纖維細(xì)胞的表型合成異常，從而導(dǎo)致聲帶組織僵硬，因此，若使聲帶瘢痕恢復(fù)振動(dòng)功能，改變纖維母細(xì)胞的表型以及修復(fù)細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)是必需的。

肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor，HGF)是一種多功能的多肽，其在胚胎形成、血管生成、器官重建和創(chuàng)傷修復(fù)方面起重要作用。HGF具有抗纖維化功能，在動(dòng)物模型的研究中已證實(shí)其對(duì)肝、腎、肺的纖維組織具有預(yù)防纖維化及溶解纖維組織的作用。另有研究表明HGF具有治療聲帶瘢痕的作用，其可增加成纖維細(xì)胞中透明質(zhì)酸的產(chǎn)生并降低膠原沉積。

以往研究表明HGF對(duì)聲帶急性損傷具治療作用，但存在HGF在聲帶注射位點(diǎn)擴(kuò)散過快、存留時(shí)間太短的缺點(diǎn)。本研究建立一種新型的凝膠藥物釋放系統(tǒng)(drug delivery system，DDS)以減緩HGF在聲帶內(nèi)的釋放、擴(kuò)散，并通過犬動(dòng)物模型觀察HGF-DDS對(duì)慢性聲帶瘢痕的修復(fù)作用。實(shí)驗(yàn)用水凝膠由戊二醛和酸明膠交聯(lián)化學(xué)反應(yīng)而獲得，將1 μg的HGF加入水凝膠中制備成HGF水凝膠。選用8只米格犬作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，在直達(dá)喉鏡下將一側(cè)聲帶固有層撕剝達(dá)肌層使聲帶瘢痕化，對(duì)側(cè)聲帶作為正常對(duì)照。6個(gè)月后，將0.5 ml HGF水凝膠(含HGF 1 μg)液通過經(jīng)口聲帶注射器注入實(shí)驗(yàn)組4只犬的瘢痕聲帶上皮下(HGF治療組)；另將0.5 ml PBS水凝膠液(含PBS 1 μg)注入另四只狗的瘢痕側(cè)聲帶內(nèi)(對(duì)照組)，1個(gè)月后再注射1次以強(qiáng)化療效。術(shù)后9個(gè)月所有犬安樂死，取喉體進(jìn)行聲帶振動(dòng)檢測(cè)及組織學(xué)檢查。應(yīng)用壓力傳感器檢測(cè)聲門下壓力,通過高速數(shù)字圖像系統(tǒng)記錄聲帶振動(dòng)狀態(tài),以發(fā)聲壓力閾值(phonation threshold pressure，PTP)評(píng)估聲帶黏膜振動(dòng)，并經(jīng)公式計(jì)算振幅率(amplitude ratio,AR)及標(biāo)準(zhǔn)聲門間隙(normalized glottal gap,NGG)。光學(xué)顯微鏡下觀察每側(cè)聲帶固有層膠原、彈性蛋白及透明質(zhì)酸，通過檢測(cè)固有層厚度判斷瘢痕收縮程度。

振動(dòng)學(xué)檢查結(jié)果表明：HGF治療組聲帶黏膜振動(dòng)明顯好于對(duì)照組，對(duì)照組損傷側(cè)聲帶呈弓形并且黏膜振動(dòng)受限。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明治療組發(fā)聲壓力閾值(PTP)顯著低于對(duì)照組，振幅率(AR)顯著高于對(duì)照組，而兩組間標(biāo)準(zhǔn)聲門間隙(NGG)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組織學(xué)檢查示HGF治療組聲帶恢復(fù)及組織收縮情況明顯好于對(duì)照組。HGF治療組紊亂的膠原沉積很少，彈性蛋白和透明質(zhì)酸排列規(guī)則，與對(duì)側(cè)未損傷的聲帶相似，固有層的厚度亦接近正常；而對(duì)照組有過多的膠原沉積，彈性蛋白和透明質(zhì)酸成分均降低，固有層明顯變薄。

該研究通過犬動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)證實(shí)HGF—DDS能有效改善慢性瘢痕聲帶的振動(dòng)特性。HGF可減少過度的膠原沉積及組織收縮，并促進(jìn)彈性蛋白和透明質(zhì)酸的修復(fù)，對(duì)慢性聲帶瘢痕的治療具有應(yīng)用前景。