王煒，武華

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林長春 132109）

牛病毒性腹瀉病毒及其防控

王煒，武華

（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林長春 132109）

自1946年人類首次發(fā)現(xiàn)和報(bào)道牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）以來，該病毒已被人們認(rèn)知60多年，在過去的60多年里，經(jīng)過科研人員和獸醫(yī)工作者的不懈努力，人類對該病毒的認(rèn)識不斷深入?，F(xiàn)已證實(shí)，BVDV屬于黃病毒科(Flaviviridae)，瘟病毒屬(Pestivirus)成員，病毒能引起多種動物、多個(gè)系統(tǒng)發(fā)生疾病，病毒感染牛引起牛病毒性腹瀉-黏膜?。˙VD/MD）,該病在世界范圍流行，給世界養(yǎng)牛業(yè)造成了不可估量的經(jīng)濟(jì)損失。世界動物衛(wèi)生組織將BVD/MD列為必須上報(bào)疫病之一，盡管目前OIE沒有將BVD/MD像口蹄疫一樣作為國際貿(mào)易的壁壘，但隨著歐盟多個(gè)國家將BVD/MD列為疫病根除計(jì)劃，世界范圍的無疫區(qū)逐漸增加，OIE有可能出臺類似的政策。屆時(shí)，BVD/MD流行國家將進(jìn)一步面臨綠色壁壘的限制，影響畜產(chǎn)品的國際貿(mào)易。

我國上個(gè)世紀(jì)80年代報(bào)道分離到該病毒，但到目前為止我國對其研究較為薄弱，防控手段滯后。隨著我國養(yǎng)牛數(shù)量的增加和飼養(yǎng)方式的轉(zhuǎn)變，我國養(yǎng)牛業(yè)受該病威脅增大。對于該病的防制，世界各國根據(jù)本國BVD流行情況制定了不同的防制措施，主要包括疫苗接種計(jì)劃和疫病根除計(jì)劃，均取得了良好的效果。本文擬從疫病的流行特點(diǎn)、疫病造成的經(jīng)濟(jì)損失和疫病防控措施等方面分析其他國家防控經(jīng)驗(yàn)，以對我國預(yù)防控制該病提供一些借鑒。

一、BVDV的致病性

BVDV感染牛造成BVD/MD，各種年齡的牛都易感，病毒可造成急性感染和持續(xù)性感染，新疫區(qū)急性感染病例多，發(fā)病率通常不高，約為5%，其病死率為90%～100%，發(fā)病牛以6～18個(gè)月者居多；老疫區(qū)急性病例很少，發(fā)病率和死亡率很低，但隱形感染率達(dá)50%以上。急性感染病例特征為黏膜發(fā)炎、糜爛、壞死和腹瀉等，還可表現(xiàn)為肺炎、流產(chǎn)、出血性綜合征急性感染等；持續(xù)性感染動物可導(dǎo)致發(fā)生致死性的黏膜病，而且感染動物沒有臨床表現(xiàn)，但可以向外排毒，是疫病傳播的重要來源，因此，鑒別并撲殺持續(xù)性感染動物是減少經(jīng)濟(jì)損失乃至根除疫病的重要措施。病毒感染可造成免疫抑制，感染牛易發(fā)生呼吸道及腸道的繼發(fā)感染，導(dǎo)致病死率升高。

BVDV具有較大的變異性，根據(jù)病毒的基因組差異及其在細(xì)胞培養(yǎng)方面的生物學(xué)特性的不同，將BVDV分為不同的基因型和生物型。2002年，國際病毒學(xué)分類委員會正式確定該病毒的分類地位，將其分為BVDV1和BVDV2兩個(gè)基因型，有文獻(xiàn)報(bào)道有BVDV3。在致病方面BVDV1和BVDV2均可表現(xiàn)出輕微臨床或亞臨床感染。生物分型依據(jù)是病毒在細(xì)胞培養(yǎng)上能否致細(xì)胞病變，分為致細(xì)胞病變型（CP型）和非致細(xì)胞病變型（NCP型）。

1946年，美國首次報(bào)道BVD/ MD，20世紀(jì)50年代初分離到第一株BVDV，已有的流行病學(xué)資料表明，BVDV1b流行更為普遍，引起牛的肺炎性死亡。但各基因型的亞型之間在血清學(xué)反應(yīng)沒有顯著的差異，這可能與基因亞型分型的方法有關(guān)，基因型是根據(jù)病毒基因組的5'UTR差異分析得出。1994年，美國和加拿大首次從出現(xiàn)病毒血征的病牛中分離到毒性較強(qiáng)的BVDV，通過分子手段分析基因組5'UTR，證實(shí)其屬于另外一個(gè)基因型即BVDV2。該病毒引起牛急性出血性綜合征，死亡率高達(dá)25%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于先前BVDV1引起的死亡率。近些年來，世界上許多國家都有該基因型的報(bào)道。BVDV2強(qiáng)毒引起的牛只死亡在50%～60%，其臨床癥狀往往比較嚴(yán)重，出現(xiàn)高熱、腹瀉、白細(xì)胞減少、甚至死亡，而弱毒感染的臨床癥狀比較輕微。從生物型角度看，兩個(gè)生物型（CP型和NCP型）都能引起牛發(fā)病，但其流行程度不盡相同。譬如引起毒血征的病原為NCP型BVDV2，與BVDV1相比，BVDV2能夠引起嚴(yán)重的病毒血征，然而根據(jù)病毒株的毒力、致病性和基因分型表明，BVDV2表現(xiàn)出不同的差異性，由此表現(xiàn)出不同程度的臨床癥狀。

從BVDV引起的臨床癥狀和危害來看，由BVDV引起的牛繁殖障礙疾病比例逐年增加，對牛群的危害較大，由此導(dǎo)致地持續(xù)性感染增加了BVD/MD控制凈化的難度。一般，懷孕牛在懷孕150 d前感染NCP病毒時(shí)，容易發(fā)生流產(chǎn)、死產(chǎn)等，正常產(chǎn)下的胎兒易產(chǎn)生持續(xù)性感染，持續(xù)性感染牛本身沒有臨床癥狀，但是終身帶毒、排毒，感染病毒能逃避宿主的免疫反應(yīng)，如細(xì)胞凋亡、產(chǎn)生干擾素等，在體內(nèi)低水平復(fù)制。持續(xù)性感染(PI)動物是疫病傳播最為重要的病原，一般來說，抗體陽性率60%～85%的牛場,持續(xù)性感染率在1%～2%。因此防制病毒的持續(xù)性感染是疫病防控的主要環(huán)節(jié)。

二、BVDV感染造成的經(jīng)濟(jì)損失

動物疫病對經(jīng)濟(jì)和社會的危害從三個(gè)方面考慮：⑴疫病對養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失；⑵疫病造成的動物死亡率；⑶疫病是否會造成公共衛(wèi)生問題。就BVD/MD而言，BVD/ MD給養(yǎng)牛業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他兩個(gè)方面。牛感染BVDV后導(dǎo)致牛奶產(chǎn)量下降，牛奶品質(zhì)差，繁殖力降低，生長遲緩和繼發(fā)感染其他病原,這些指標(biāo)與其經(jīng)濟(jì)適用性有很大的關(guān)系。

從BVD/MD發(fā)生的實(shí)際情況來看，BVD/MD造成的影響不單單是因疫病本身造成牛的經(jīng)濟(jì)性能下降帶來的損失，還包括因感染BVDV而繼發(fā)感染其他疾病的風(fēng)險(xiǎn)大大增加，其引起的免疫抑制可使其他疫苗免疫失敗，或感染毒力強(qiáng)的BVDV導(dǎo)致牛的死亡率增大等，感染NCP-BVDV的小牛血清在生物制品的生產(chǎn)中存在較大的風(fēng)險(xiǎn)。BVD/MD對經(jīng)濟(jì)造成的損失評價(jià)難度較大，一般人們習(xí)慣于評估牛的臨床感染對牛本身造成的影響，極少在群體水平和由其引起的間接損失來評估，而且這些評價(jià)指標(biāo)比較復(fù)雜，包括病毒毒力的強(qiáng)弱，感染牛群的免疫狀態(tài)，牛群產(chǎn)奶量及懷孕率的高低等均可影響到對疫病造成的經(jīng)濟(jì)損失的評價(jià)。國際上通行的評測方法是在兩個(gè)不同的層面反映BVD/MD對經(jīng)濟(jì)造成的影響，一是BVDV感染對獨(dú)立養(yǎng)殖群體所造成經(jīng)濟(jì)損失，另外從整個(gè)國家（地區(qū)）養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展角度去評價(jià)BVD/MD造成的經(jīng)濟(jì)損失。

國外統(tǒng)計(jì)表明，因BVDV感染導(dǎo)致的繁殖障礙和持續(xù)性感染造成的損失每頭奶牛在40美元到95美元，如果感染高致病性BVDV或繼發(fā)其他病原感染，每頭奶牛造成的損失將超過400美元。一個(gè)奶牛養(yǎng)殖場因感染BVDV造成的經(jīng)濟(jì)損失在數(shù)百美元到數(shù)千美元，這與牛群的密度等有密切關(guān)系。每百萬頭牛因感染高質(zhì)性病毒株造成的損失可高達(dá)1 000萬到4 000萬美元。由此可見，BVD/MD的流行給經(jīng)濟(jì)造成較大的影響。另外，BVDV感染的小牛血清用于生物制品生產(chǎn)，將直接導(dǎo)致疫苗的免疫效力降低，造成免疫失敗將產(chǎn)生不可估量的經(jīng)濟(jì)損失。

三、BVD的防控

世界上許多國家都將BVD/MD作為重要的疫病加以防控。一般來說，疫病的防控涉及兩個(gè)不同的層次，一是控制，指有病毒存在，但通過多種方法使疫情處于可控狀態(tài)，使疫病在某個(gè)區(qū)域由流行變?yōu)樯l(fā)直至消失，造成的經(jīng)濟(jì)損失降到最低；根除是指在一定時(shí)間內(nèi)，在某個(gè)國家或地區(qū)有計(jì)劃地將某個(gè)病完全消滅、不再發(fā)生。疫病的控制和根除要根據(jù)本國的國情和經(jīng)濟(jì)實(shí)力，制定不同的方法。就BVD/MD而言，要根據(jù)本國牛養(yǎng)殖的數(shù)量和密度及BVD/MD流行狀況制定不同的控制或根除計(jì)劃。如養(yǎng)牛密度低、BVDV血清抗體較低的地方，采取禁用疫苗、篩選持續(xù)性感染動物、淘汰和撲殺的策略根除BVD/MD；養(yǎng)牛密度高、BVDV血清抗體較高的地方，采取疫苗免疫的方法控制BVD/MD，再實(shí)施撲殺持續(xù)性感染動物達(dá)到逐步精化的目的。

疫苗在BVD/MD控制方面發(fā)揮了積極的作用，其生產(chǎn)和應(yīng)用始于1960年，在養(yǎng)牛密度較高的國家如美國、德國等主要采用疫苗免疫控制該病并且取得了良好的防制效果。目前，世界上已有的商用化疫苗達(dá)數(shù)百種，包括單苗、聯(lián)苗、滅活疫苗和活疫苗等。隨著人們對疫病認(rèn)識的不斷深入，疫苗在疾病防控所起的作用也在不斷變化。早期疫苗主要用于預(yù)防疫病的臨床感染，防制呼吸道癥狀和腹瀉等，疫苗的免疫效力檢驗(yàn)也局限于疫苗是否能夠預(yù)防因疫病導(dǎo)致的發(fā)熱或白細(xì)胞減少等指標(biāo)。然而，當(dāng)人們認(rèn)識到防制持續(xù)性感染牛是BVD/MD控制的主要環(huán)節(jié)時(shí)，疫苗用于防制胎兒的持續(xù)性感染就更加重要，因此，當(dāng)采用疫苗用于BVD/MD控制和根除計(jì)劃時(shí)，應(yīng)將預(yù)防胎兒的持續(xù)性感染作為疫苗使用的重要目標(biāo)。目前，BVD/MD疫苗研究應(yīng)兼顧防制急性感染和持續(xù)性感染。一些研究表明，通過優(yōu)化免疫接種程序（首免注射滅活疫苗，二免注射活疫苗）取得了較好防制效果。特別要注意的是，活疫苗在BVD/MD預(yù)防控制起到良好的作用，但不正確的使用活疫苗會導(dǎo)致嚴(yán)重的后果，例如在采用CP-BVDV制作疫苗時(shí)，應(yīng)避免混入NCP-BVDV，避免造成持續(xù)性感染；另外，CP-BVDV活疫苗免疫持續(xù)性感染動物會造成黏膜病的發(fā)生。因此，在平時(shí)的飼養(yǎng)過程中應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，采用適當(dāng)?shù)臋z測方法定期檢疫，根據(jù)牛的感染狀態(tài)采取不同的疫苗接種方式。

BVD/MD的根除是基于不接種疫苗，采用特異性好、敏感性強(qiáng)的方法監(jiān)測篩選陽性牛、持續(xù)性感染牛，進(jìn)而淘汰撲殺，后期采取有效地生物安全措施等綜合防控措施以保證根除的有效性。有效地鑒別診斷方法是控制和根除BVD/MD的前提，且在根除計(jì)劃的不同階段，采用的診斷和鑒別方法也不盡相同。敏感的診斷方法能將感染畜群和非感染畜群區(qū)分開來，檢測出陽性個(gè)體，確定畜群的BVDV感染水平及狀態(tài)。目前，世界上大多采用免疫組化試驗(yàn)和抗原捕捉ELISA方法檢測病原，這種方法能有效地檢測PI牛，而且不受抗體水平影響。另外，通過檢測牛奶或血清中的抗體，或在牛奶中分離病毒，能在群體水平上確定是否感染BVDV，在BVD/ MD的控制和凈化過程中具有較好的實(shí)用性。

BVD/MD根除的技術(shù)要點(diǎn)為：根據(jù)規(guī)?；B(yǎng)殖條件下牛病毒性腹瀉病毒抗體水平制定不同的控制辦法。在陽性率較高的養(yǎng)殖場，采用疫苗免疫結(jié)合剔除持續(xù)性感染動物逐步實(shí)現(xiàn)疫病的凈化，減少因疫病造成的經(jīng)濟(jì)損失，包括⑴采用滅活疫苗和活疫苗進(jìn)行免疫接種，防制牛病毒性腹瀉病毒感染造成的產(chǎn)奶量下降等損失；⑵疫情平穩(wěn)后，逐步實(shí)施疫病根除計(jì)劃，根據(jù)流行病學(xué)資料判定畜群的狀況；如果畜群中存在持續(xù)型感染動物，鑒別和剔出隱性感染牛，通過RT-PCR方法檢測牛奶或血清中的抗原，單份血清或耳組織樣品檢測采用抗原捕捉ELISA方法檢測抗原；⑶對懷孕母?；虺跎龠M(jìn)行疫苗免疫；⑷采取嚴(yán)格的生物安全控制措施，限制感染牲畜流動；⑸監(jiān)測牛群病毒性腹瀉病毒感染狀態(tài)等程序，可有效的控制并最終根除BVD。在陽性率較低的養(yǎng)殖場，采用不免疫疫苗根除疫病控制的辦法，⑴檢測畜群的牛病毒性腹瀉病毒感染狀態(tài)，采集血清或者牛奶檢測牛病毒性腹瀉病毒抗體判定畜群中的抗體水平；⑵鑒別和剔出隱性感染牛，通過RT-PCR方法檢測牛奶或血清中的抗原，單份血清或耳組織樣品檢測采用抗原捕捉ELISA方法檢測抗原；⑶采取嚴(yán)格的生物安全控制措施，限制感染牲畜流動；⑷監(jiān)測牛群病毒性腹瀉病毒感染狀態(tài)等程序。

以瑞典、德國和美國BVDV防控措施為例， 瑞典自1993年開始實(shí)行BVD/MD根除計(jì)劃，是最早開始實(shí)施BVD/MD根除計(jì)劃的歐洲國家之一，該國牛養(yǎng)殖密度較低，而且不接種疫苗。根除計(jì)劃實(shí)施初期，從奶牛場中牛奶中抗體檢測率達(dá)50%，由該國奶牛協(xié)會發(fā)起根除BVD/MD計(jì)劃，并受到養(yǎng)殖戶的積極支持。起初，根除計(jì)劃所有費(fèi)用都由養(yǎng)殖戶承擔(dān)，1996年，瑞典政府承擔(dān)了根除計(jì)劃的全部費(fèi)用。該計(jì)劃的核心是不接種疫苗、檢測撲殺隱性感染牛。其主要分為4個(gè)步驟，區(qū)分感染動物和非感染動物；持續(xù)監(jiān)測非感染動物的狀況，以保證非感染動物沒有病毒；在非感染動物群體消滅病毒；做好善后預(yù)防措施。主要包括以下幾個(gè)核心要點(diǎn)：群體水平檢驗(yàn)出感染牛；清除隱性感染牛；采取嚴(yán)格的生物安全控制措施，限制感染牲畜流動；監(jiān)測牛群的BVDV感染狀態(tài)。截止到2001年，該國牛群的BVDV陰性率達(dá)87%，而計(jì)劃實(shí)施初期的陰性率僅為35%。然而，該方法在BVD/MD流行較廣的國家難以奏效，一些國家采取疫苗免疫和上述方法相結(jié)合的方法，主要程序?yàn)椋簷z出感染牛；鑒別和剔出隱性感染牛；對懷孕母?；虺跎龠M(jìn)行疫苗免疫；采取嚴(yán)格的生物安全控制措施，限制感染牲畜流動；監(jiān)測牛群BVDV感染狀態(tài)，上述控制系統(tǒng)取得了明顯的效果，歐洲的其他國家積極效仿瑞典的根除辦法，取得了較好的成果。

德國是典型的養(yǎng)牛業(yè)大國，該國的牛奶產(chǎn)業(yè)和牛肉也在其國內(nèi)的畜牧業(yè)生產(chǎn)中占有重要的地位，由于該國牛養(yǎng)殖業(yè)密度較大，該國在部分地區(qū)實(shí)施BVD/MD根除計(jì)劃。其主要程序是控制BVDV流行造成的經(jīng)濟(jì)損失，主要采用疫苗免疫等措施，其次，停止接種疫苗，根除疫病。

美國是最早發(fā)現(xiàn)BVD/MD的國家，經(jīng)過半個(gè)多世紀(jì)的防治，該病在美國仍然流行，也是全球感染較為嚴(yán)重的國家之一，先后發(fā)生了BVDV1和BVDV2，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失和社會影響。迄今為止，美國仍然采用疫苗免疫預(yù)防的方法,對該病控制頗為有效。隨著疫病免疫的逐步控制，美國在部分地區(qū)開始檢測篩選和撲殺持續(xù)性感染動物達(dá)到疫病凈化的程度。

四、我國BVD流行和研究概況

我國于上個(gè)世紀(jì)80年代首次從國外引進(jìn)牛的流產(chǎn)胎兒脾臟中分離并鑒定出BVDV，隨著我國牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，活?？缡〗灰最l繁，該病幾乎遍及我國各個(gè)省區(qū)，流行病學(xué)調(diào)查表明，我國部分省市的牛群中BVDV抗體陽性率高達(dá)80%。根據(jù)國外機(jī)構(gòu)對BVD損失的估算方式計(jì)算，我國每年因BVDV感染引起的經(jīng)濟(jì)損失應(yīng)在億元以上，但BVD/MD在我國還未引起足夠的重視。

我國對BVDV的病原研究方面較為薄弱，就目前已有的研究資料來看，我國在1984年首次從流產(chǎn)胎兒中分離到一株BVDV，即CC-184；1995年從疑似豬瘟的豬體內(nèi)分離到另外一株BVDV即通常的ZM-95，這兩個(gè)毒株都屬于BVDV1型；2008年,國內(nèi)某研究單位第一次從牛體內(nèi)分離到BVDV2，證實(shí)BVDV2在我國的存在。2008～2010年間，特產(chǎn)研究所收集186份牛腹瀉糞便樣品和158份鼻拭子樣品，應(yīng)用RTPCR/PCR方法對采集的糞便樣品和鼻拭子樣品進(jìn)行牛病毒性腹瀉病毒流行病學(xué)檢測。共檢測出32份牛病毒性腹瀉病毒陽性樣品，平均陽性率為25.2%（47/186），其中牛病毒性腹瀉病毒陽性樣品經(jīng)RT-PCR分型鑒定，均屬于1a或1b亞型。

對于該病的防制，我國目前尚無商品化診斷試劑盒和疫苗。近些年來，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所開展了牛病毒性腹瀉病毒診斷試劑和疫苗的研究，進(jìn)展良好。

五、我國BVD防制對策與建議

由于我國幅員遼闊，地區(qū)差異較大，我國對BVD/MD的防控應(yīng)借鑒國際有效經(jīng)驗(yàn)，根據(jù)不同地區(qū)飼養(yǎng)特點(diǎn)，圍繞其控制和根除制定差異化、針對性的防控政策，達(dá)到疫病的控制或根除。

1.充分認(rèn)識和重視BVD/MD對畜牧業(yè)的危害。現(xiàn)階段，我國動物疫病防控部門和基層養(yǎng)殖戶對該病的危害缺乏了解和認(rèn)識，防疫意識淡薄。而有效的防制該病必須認(rèn)識到該病的危害及基本防疫措施，特別是行業(yè)主管部門應(yīng)做好該病的宣傳使養(yǎng)殖戶了解該病的危害。歐盟很多國家通過政府組織和實(shí)施該病撲滅和根除計(jì)劃取得了巨大的成效，極大的降低了該病對養(yǎng)牛業(yè)的危害。

2.加強(qiáng)監(jiān)測，做好技術(shù)和物資儲備。加強(qiáng)流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測，做好我國BVDV毒株庫構(gòu)建工作，掌握我國BVDV毒株流行和遺傳背景，研究出與國際接軌的簡便快速和敏感的診斷試劑，盡快研制出符合我國疫情特點(diǎn)的抗原譜廣、應(yīng)用效果良好的活疫苗和滅活疫苗。

3.實(shí)施疫苗免疫為主的綜合控制措施。國內(nèi)外防控經(jīng)驗(yàn)表明，疫苗是防制該病的有效手段之一，鑒于我國目前牛飼養(yǎng)模式存在牛群分布廣泛、牛只數(shù)量較大和BVD感染率較高的現(xiàn)狀，我國應(yīng)借鑒美國BVD/MD控制策略，采取以疫苗免疫為主的綜合防治辦法，可在一些有條件的地區(qū)實(shí)施BVD根除計(jì)劃。

（略）