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(1井岡山大學附屬醫(yī)院,江西吉安 343000;2井岡山大學醫(yī)學院)

近年來,普遍認為子癇前期發(fā)病與胎盤滋養(yǎng)細胞缺血、缺氧有關。研究表明,機體在缺血、缺氧這種應激狀態(tài)下,作為分子伴侶的熱休克蛋白能提高細胞對應激損傷的耐受性,發(fā)揮抗氧化損傷的作用[1]。2008年 9月～2009年 12月,本研究觀察子癇前期患者胎盤滋養(yǎng)細胞中熱休克蛋白 27(HSP-27)的表達變化,并探討其與子癇前期發(fā)生的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 子癇前期產(chǎn)婦 26例,年齡 22～36歲,孕周 37～40周。其中輕度 12例 (輕度組)、重度 14例(重度組)。健康孕婦 30例(對照組),年齡24～32歲,孕周 37～41周。三組均為單胎。三組產(chǎn)婦年齡、孕周等一般資料相比,P均 ＞0.05。均以剖宮產(chǎn)終止妊娠。

1.2 胎盤組織中 HSP-27的檢測 三組胎盤娩出后,在胎盤臍帶附著處母體面的中心部位,剪下 1 cm×1 cm×1 cm的組織,每組各 2塊。漂洗干凈后,1塊用 10%中性甲醛固定,室溫梯度酒精脫水,石蠟包埋;另 1塊用 EP管裝好后迅速放入 -70℃冰箱保存。采用免疫組化法及 Western blot法測各組胎盤組織中的 HSP-27。①免疫組化檢測結果判定:以細胞核或細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為HSP-27陽性細胞。a.按陽性細胞百分比計分[2]:陽性細胞百分比 ＜5%、5～10%、11%～50%、＞50%分別記 0、1、2、3分 。b.按著色程度計分 :著色淺,但與未著色的陰性對照片有明顯區(qū)別記 1分;染色強度為中等者記 2分;細胞著色與已知陽性照片同樣強記 3分。上述兩項記分相加,0分為 HSP-27陰性、1～2、3～4、5～ 6分分別為弱陽性、陽性 、強陽性。弱陽性～強陽性為 HSP陽性。②Western blot檢測結果分析:用 Fluor-s凝膠成像分析系統(tǒng)對蛋白條帶進行分析,計算蛋白相對含量。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用 SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計量資料比較用方差分析,計數(shù)資料比較用 χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

HSP-27定位于滋養(yǎng)細胞胞質(zhì)和胞核,以胞質(zhì)為主。對照組 HSP-27表達陽性 8例,輕度、重度組分別為 9、13例,三組相比,P均 ＜0.05。對照組、輕度組、重度組 HSP-27蛋白相對表達量分別為 0.33±0.10、0.56±0.16、0.96±0.25,三組相比,P均 ＜0.01。

3 討論

HSP是生物細胞受到熱、病原體、理化因素等有害刺激后啟動合成的蛋白質(zhì)。HSP最主要的功能是在細胞遭受應激損害時,可作為分子伴侶,提高應激狀態(tài)下細胞對應激損傷的耐受性[3,4]。HSP可分為五大家族,分別是 HSP110、HSP90、HSP70家族、中等分子量 HSP60家族和小分子量HSP(sHSP)家族。目前對 sHSP的研究甚少。HSP-27是 sHSP家族重要成員之一。研究[4]顯示,HSP-27在小鼠缺血—再灌注誘導的氧化應激損傷心臟組織中大量表達。

近年來,缺氧引起的氧化應激反應與子癇前期發(fā)生發(fā)展的關系逐漸受到重視。氧化應激反應的增強可能導致子癇前期病情不同程度的加重[5]。Shah等[6]研究發(fā)現(xiàn),在早、中、晚孕的蛻膜間質(zhì)細胞中均可檢測到 HSP-27,其僅在早中孕的合體滋養(yǎng)細胞中表達,主要表達于細胞質(zhì)。Dodge等[7]發(fā)現(xiàn)子癇期胎盤滋養(yǎng)細胞中 HSP-27表達增加。

本研究分別采用免疫組化法及 Western blot法檢測了正常孕婦與輕、重度子癇前期患者胎盤組織的 HSP-27,結果顯示,HSP-27在子癇前期患者合體滋養(yǎng)細胞胞質(zhì)及胞核中表達,且以胞質(zhì)為主,與相關研究結果一致;輕、重度組胎盤組織中 HSP-27蛋白相對表達量高于對照組,且重度組高于輕度組,提示子癇前期患者胎盤組織 HSP-27蛋白表達水平升高,且與子癇前期嚴重程度有關。由此我們推測,缺氧導致的氧化應激參與了子癇前期發(fā)病,而 HSP-27高表達對子癇前期胎盤組織有保護作用。其機制可能為:HSP-27發(fā)揮分子伴侶作用,促進錯誤蛋白質(zhì)的降解,防止蛋白質(zhì)變性,促使胎盤組織細胞從應激中恢復;發(fā)揮抗氧化應激作用,保護細胞及細胞器如線粒體免受損傷,減少 Ca2+內(nèi)流,減輕其引起的細胞毒性及細胞凋亡;抑制炎癥發(fā)展,降低進一步的血管內(nèi)皮損傷及缺血、缺氧。HSP-27在子癇前期胎盤組織中的作用及其確切機制尚待進一步研究。

[1]Malusecka E,K rzyzowska-Gruca S,Gawrychowski J,et al.Stress proteins HSP27 and HSP70 predict survival in non-small cell lung carcinoma[J].Anticancer Res,2008,28(1B):501-506.

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[5]石春燕,孫麗洲,德偉,等.子癇前期患者胎盤組織氧化應激與PeroxiredoxinⅡ[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展,2008,17(12):929-931.

[6]Shah M,Stanek J,Handwerger S.Differential localization of heat shock proteins 90,70,60 and 27 in human deciduas and placenta during pregnaney[J].Histochem J,1998,30(7):509-518.

[7]Dodge ME,Wang J,Guy C,et al.Stress-induced heat shock protein 27 expression and its role in dorsal root ganglion neuronal survival[J].Brain Res,2006,1068(1):34-48.