韓慶安 ，翟 剛 ，李天艷 ，汝國(guó)林 ，董維亞 ，張德亮 ，韋景平 ，軒秋艷

（1.河北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河北 保定 071000；2.青龍滿族自治縣青龍鎮(zhèn)獸醫(yī)站，河北 青龍 066500；3.河北省遷安市鎮(zhèn)政府，河北 遷安 064400；4.唐山市開平區(qū)農(nóng)林畜牧水產(chǎn)局，河北 唐山 063021）

豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的以母豬發(fā)熱、流產(chǎn)，斷奶前后仔豬死亡率升高，不同年齡豬呼吸障礙等為臨床特征的一種傳染病[1-2]。1991年，荷蘭學(xué)者Terpstra等人在感染豬體內(nèi)分離到歐洲型PRRSV，命名為L(zhǎng)elystad病毒（LV）[1，3]；同年，美國(guó)學(xué)者 Benfield 等人分離到美洲型PRRSV，命名為VR-2332[4]。我國(guó)學(xué)者郭寶清等（1996）首次從國(guó)內(nèi)疑似感染豬群中分離出PRRSV，從而證實(shí)本病在國(guó)內(nèi)的存在[4]。我國(guó)流行的PRRSV為美洲型毒株，當(dāng)前又稱為經(jīng)典PRRSV（classical PRRSV，C-PRRSV）。高致病性豬藍(lán)耳病是由高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒（highly pathogenic porcine reproductive and respiratory ryndorme virus，HP-PRRSV）引起的豬的一種急性傳染病，是PRRSV的變異株，其顯著特點(diǎn)是高發(fā)病率和高死亡率，仔豬發(fā)病率可達(dá)100%，死亡率可達(dá)50%以上，母豬流產(chǎn)率可達(dá)30%以上，也可致育肥豬發(fā)病死亡。該病于2006年的6-8月份集中發(fā)生于我國(guó)的江西、湖南、湖北等南方少數(shù)省份發(fā)生，由于當(dāng)時(shí)確定不了病因，但所有發(fā)病豬只均出現(xiàn)高熱癥狀，故稱為“高熱病”。 隨后該病毒逐漸擴(kuò)散和蔓延到相臨省份以及我國(guó)大部分養(yǎng)豬省份和地區(qū)。截至2007年7月份，我國(guó)農(nóng)業(yè)部通報(bào)全國(guó)已有26個(gè)省、市發(fā)生了高致病性豬生殖與呼吸綜合征，疫點(diǎn)309個(gè)，防控形勢(shì)相當(dāng)嚴(yán)峻。該疫情在全國(guó)范圍內(nèi)廣泛流行，導(dǎo)致生豬大批死亡和淘汰，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了嚴(yán)重?fù)p失[5]。后來(lái)經(jīng)過(guò)中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心證實(shí)，豬“高熱病”的主要致病病原為Nsp2缺失30個(gè)氨基酸的高致病性PRRSV[6]。本研究利用PRRSV鑒別RT-PCR檢測(cè)方法對(duì)2007—2010年采自全省11個(gè)地市樣品進(jìn)行檢測(cè)，旨在了解PRRSV不同毒株在我省豬群中的隱性感染情況，為PRRSV的綜合防制提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

檢測(cè)樣本采自全省11個(gè)地區(qū)272個(gè)縣級(jí)屠宰場(chǎng)（4年分別為40個(gè)、65個(gè)、87個(gè)和80個(gè)）商品豬的肺臟或肺門淋巴結(jié)，共計(jì)2159份（4年分別為108份、383份、958份和710份）。

1.2 主要儀器及試劑

Heraeus臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)：美國(guó)熱電公司生產(chǎn)；Biometra PCR基因擴(kuò)增儀：英國(guó)Whatman公司生產(chǎn)；UVP紫外凝膠成像處理系統(tǒng)：美國(guó)UVP公司生產(chǎn)；Tanon EPS100型電泳儀：北京六一儀器廠生產(chǎn)；DNM-9602型酶標(biāo)分析儀和DNX-9620電腦洗板機(jī)由北京普朗新技術(shù)有限公司生產(chǎn)。PRV PCR檢測(cè)試劑盒、PCV-2 PCR檢測(cè)試劑盒、CSFV RT-PCR檢測(cè)試劑盒均由北京愛德士元亨生物科技有限公司生產(chǎn)。PRRSV鑒別 RT-PCR檢測(cè)試劑盒由中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心監(jiān)測(cè)室提供。

1.3 方法

對(duì)所采集的樣品先進(jìn)行PRRSV病原學(xué)檢測(cè)，然后對(duì)檢測(cè)出的HP-PRRSV和C-PRRSV陽(yáng)性樣品再分別進(jìn)行CSFV、PRV和PCV-2病原學(xué)檢測(cè)。具體檢測(cè)方法按檢測(cè)試劑盒規(guī)定的要求進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

PRRSV病原學(xué)檢測(cè)場(chǎng)總體陽(yáng)性率為38.97%，4年場(chǎng)陽(yáng)性檢出率分別為72.50%、44.62%、28.74%和28.75%（見表1）；樣品總陽(yáng)性率為11.90%，4年樣品陽(yáng)性檢出率分別為44.44%、15.93%、8.77%和9.01%。HP-PRRSV病原學(xué)檢測(cè)樣品總陽(yáng)性檢出率為9.77%，4年樣品陽(yáng)性檢出率分別為40.74%、12.01%、7.31%和7.18%（見表2）；C-PRRSV病原學(xué)檢測(cè)樣品總陽(yáng)性檢出率為2.13%，4年樣品陽(yáng)性檢出率分別為3.70%、3.92%、1.46%和1.83%（見表3）。

表1 屠宰場(chǎng)PRRSV場(chǎng)陽(yáng)性率

表2 HP-PRRSV檢測(cè)樣本陽(yáng)性率

表3 C-PR R SV檢測(cè)樣本陽(yáng)性率

2.2 多病原混合感染情況

PRRSV同CSFV、PRV和PCV-2混合感染所占的總比率為55.64%（143/257）；HP-PRRSV同其他病原體混合感染所占的總比率為58.76%（124/211），C-PRRSV同其他病原體混合感染所占的總比率為41.30%（19/46）。不同年度多病原混合感染情況見表4。

表4 多病原混合感染情況

3 分析與討論

從全省11個(gè)地區(qū)的樣本中均檢測(cè)到PRRSV，且4年樣本的場(chǎng)陽(yáng)性檢出率均較高，說(shuō)明PRRSV在河北省的豬群中普遍存在，污染面積較大。由于不同地區(qū)同一年度樣本場(chǎng)陽(yáng)性率差別不大，表明樣本的陽(yáng)性率高低與樣本來(lái)源地的地理位置、當(dāng)?shù)氐呢i只存欄量的多少無(wú)明顯的相關(guān)性。

從PRRSV鑒別檢測(cè)結(jié)果分析，HP-PRRSV對(duì)豬群的危害相對(duì)較大，C-PRRSV對(duì)豬群的危害相對(duì)較輕。從樣本陽(yáng)性率四年變化趨勢(shì)方面分析，HP-PRRSV基本呈逐年下降趨勢(shì)，且下降趨勢(shì)明顯，尤其是2009年和2010年，陽(yáng)性率已經(jīng)低于8%。該結(jié)果基本反映了河北省近年來(lái)HP-PRRSV的發(fā)病情況。河北省HP-PRRS流行始于2006年9月，傳播途徑是從南向北，從平原向山區(qū)逐步擴(kuò)散，到2007年底，HP-PRRS疫情得到有效的遏制，此后疫情基本穩(wěn)定，未出現(xiàn)大的疫情發(fā)生。C-PRRSV從2006年至2008年對(duì)豬群的危害程度雖然略呈逐年上升趨勢(shì)，但四年的樣本陽(yáng)性率均比較低，且后三年的樣本陽(yáng)性率差別不大。

對(duì)4年來(lái)檢測(cè)的PRRSV陽(yáng)性的樣品分別進(jìn)行CSFV、PRV和PCV-2病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果表明多病原混合感染比較普遍。從病原體數(shù)量上分析，混合感染多以二重和三重感染為主，沒有出現(xiàn)了4重感染現(xiàn)象；從病原體種類上分析，HP-PRRSV多與PRV和PCV-2混合感染為主，與CSFV混合感染現(xiàn)象出現(xiàn)較少，尤其是在2007年。沒有檢測(cè)的HP-PRRSV和CSFV混合感染的樣品。根據(jù)資料報(bào)道，HP-PRRSV與其他病原體混合感染已非常普遍。王連想（2009）等[7]研究結(jié)果表明，PRRSV變異株同CSFV、PRV、PCV2混合感染陽(yáng)性率分別為5.35%、0.89%、15.6%，25個(gè)場(chǎng)（群）存在病毒二重和三重混合感染，其中與PCV2混合感染比率較高；鞠厚斌（2010）等[8]、高許雷（2009）等[9]認(rèn)為混合感染主要以二重感染為主。他們的結(jié)論與我們的進(jìn)行結(jié)論相符。范仲鑫（2008）等[10]用RT-PCR的方法對(duì)采集湖南的3個(gè)市級(jí)定點(diǎn)屠宰場(chǎng)50份豬肺門淋巴結(jié)進(jìn)行高致病性豬藍(lán)耳病病毒的檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性率為 16%（8/50）；高許雷（2009）等[9]對(duì)2008—2009年我國(guó)五省區(qū)發(fā)病豬場(chǎng)235份、屠宰場(chǎng)的218份樣品進(jìn)行了高致病性豬藍(lán)耳病病毒（HP-PRRSV）RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果表明，屠宰場(chǎng)的檢出率平均44%；而我們相同年度的檢測(cè)結(jié)果分別為12.01%（46/383）和 8.65%（116/1341），他們的檢測(cè)結(jié)果相對(duì)較高。

在調(diào)查中我們發(fā)現(xiàn)，在同一份樣品中不能同時(shí)檢測(cè)到HP-PRRSV和C-PRRSV，這表明HP-PRRSV和C-PRRSV不能同時(shí)感染同一頭豬。檢測(cè)結(jié)果同時(shí)也表明，在河北省豬群中存在HP-PRRSV和C-PRRSV共同感染現(xiàn)象，增添了對(duì)PRRS防治的難度，這就要求養(yǎng)殖戶在以后控制PRRS時(shí)考慮對(duì)HP-PRRSV和C-PRRSV進(jìn)行區(qū)別，采取不同的措施應(yīng)對(duì)PRRSV的感染。

4 小結(jié)

C-PRRSV隱性感染陽(yáng)性率雖然在河北省豬群中一直較低，但其略呈上升的趨勢(shì)；而HP-PRRSV隱性感染陽(yáng)性率雖然在河北省豬群中呈逐年下降趨勢(shì)，但其污染面積較大，應(yīng)值得高度重視。

[1]Wensvoort G，Terpstra C，Pol JM，et al.Mystery swine disease in The Netherlands：the isolation of Lelystad virus[J].Vet Q，1991，13（3）：121-130.

[2]姜平，陳溥言，姜志華，等.我國(guó)兩個(gè)不同地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF5基因序列比較[J].病毒學(xué)報(bào)，2000，16（3）：70-72.

[3]Albina E.Epidemiology of porcine reproductive and respiratory syndrome（PRRS）：an overview[J].Vet Microbiol，1997，55（1-4）：309-316.

[4]郭寶清，陳章水，劉文興，等.從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離 PRRSV 的研究[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，1996，2（2）：1-5.

[5]馬靜云，李浩波，王玲玲，等.高致病性PRRSV的分離及其Nsp2和ORF5基因的序列分析[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2008，38（8）：650-657.

[6]侯麗麗，趙鐵柱，遇秀玲，等.高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，29（6）：667-682.

[7]王連想，馬靜云，謝青梅，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株與豬瘟病毒等混合感染的調(diào)查與分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2009，45（10）：3-5.

[8]鞠厚斌，曹火仁，張維誼，等.近年來(lái)上海地區(qū)病死豬主要病毒感染狀況調(diào)查 [J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2010，18（1）：40-44.

[9]高許雷，吳發(fā)興，朱紫祥，等.我國(guó)五省區(qū)部分豬場(chǎng)高致病性豬藍(lán)耳病毒感染情況檢測(cè)與分析[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，30（11）：32-36.

[10]范仲鑫，劉道新，何世成，等.湖南高致病性豬藍(lán)耳病隱性感染情況調(diào)查 [J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2008，25（12）：34-36.