李 梅 ，趙全興 ，國 林 ，馬建平 ，王 剛 ，劉新喜 ，刁有祥

（1.山東眾成健康養(yǎng)殖工程公司，山東 肥城 271600；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東 泰安 271018）

禽流感（AI）又稱雞瘟、真性雞瘟和歐洲雞瘟，是由A型流感病毒（AIV）引起的禽類的一種疾病綜合癥，雞、火雞以及鴨、鵝、鵪鶉和海鷗等家禽、水禽、野鳥均可感染，病禽表現(xiàn)為死亡、產(chǎn)蛋量下降、嚴(yán)重的呼吸道疾病、系統(tǒng)綜合癥或隱性感染等多種病型[1-2]，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，并嚴(yán)重威脅著人類公共衛(wèi)生安全。目前，當(dāng)流感疫苗免疫接種和嚴(yán)格的生物安全措施相結(jié)合仍是預(yù)防和控制該病的主要措施。近年來，我們對禽流感實施高密度的免疫接種，通過疫苗免疫可使雞群得到有效保護，但是過頻免疫會產(chǎn)生免疫抑制。為此本試驗連續(xù)采用三批海蘭褐蛋雞進行全程的AI抗體跟蹤，綜合分析禽流感抗體動態(tài)變化規(guī)律，探討禽流感的免疫間隔，尋找禽流感疫苗的接種規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

1日齡健康海蘭褐蛋雞購于泰安東岳種禽有限公司。

1.2 試驗材料

96孔V型微量反應(yīng)板、移液器、生理鹽水、1%雞紅細(xì)胞懸液。

禽流感H9亞型血凝抑制試驗抗原由中國科學(xué)院提供。

禽流感滅活疫苗（H9亞型），雞新城疫病毒（Lasota株）、禽流感病毒（H9亞型）二聯(lián)滅活疫苗購于廣州市華南農(nóng)大生物制品有限公司。

1.3 試驗動物的處理

連續(xù)采用三批1日齡健康海蘭褐蛋雞，每批3000只，第三批雞隨機又分為A、B、C三組，每組1000只，試驗在相同的環(huán)境下，采用同種飼料進行飼喂，每批雞的禽流感免疫程序如下表1、表2、表3，疫苗的接種劑量按照生產(chǎn)廠家的建議劑量進行免疫。30 d之前，采用心臟采血的方法，30 d之后，采用翅靜脈采血，每隔3 d隨機選取50只雞采血，分離血清，根據(jù)HI法檢測雞只的抗體水平，根據(jù)平均值繪制抗體消減曲線。

表1 第一批海蘭褐蛋雞免疫程序

表2 第二批海蘭褐蛋雞免疫程序

表3 第三批海蘭褐蛋雞免疫程序

1.4 抗體水平檢測

采用血凝（HA）與血凝抑制試驗（HI）（《高致病性禽流感診斷技術(shù)》中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18936-2003）。

2 結(jié)果

2.1 第一批雞禽流感免疫間隔期比較

開產(chǎn)后，每隔3～4個月防疫一次禽流感滅活疫苗，抗體水平大都在7 log2以上，抗體滴度平均值在7 log2時大約維持3～4個月。根據(jù)圖1的抗體消減規(guī)律走勢，禽流感不同滴度下的抗體維持期如下表4。

2.2 第二批雞禽流感免疫間隔期比較

表4 禽流感不同水平下的抗體維持期比較

開產(chǎn)后防疫3次禽流感滅活疫苗，抗體水平大都在8 log2以上，且此滴度抗體水平大約維持3個月。根據(jù)圖2的抗體消減規(guī)律走勢，禽流感不同滴度下的抗體維持期如下表5。

表5 禽流感不同水平下的抗體持續(xù)期比較

2.3 第三批雞禽流感免疫間隔期比較

禽流感滅活疫苗的首次免疫，無論采用A、B、C組哪種疫苗組合，在哪個時間進行免疫都很難形成良好的抗體水平。45日齡之后免疫禽流感疫苗，抗體水平迅速上升，抗體滴度平均值維持在6 log2以上，產(chǎn)蛋期231日齡再防疫一次禽流感滅活疫苗，抗體滴度平均值6 log2基本上能夠維持到產(chǎn)蛋雞淘汰。根據(jù)圖3的抗體消減規(guī)律走勢，禽流感不同滴度下的抗體維持期如下表6。

3 討論

H9的免疫間隔期與雞的日齡和油苗的免疫次數(shù)密切相關(guān)，總體來說雞得日齡越大，免疫次數(shù)越多，免疫抗體維持期越長。

表6 禽流感不同水平下的抗體持續(xù)期比較

總體來看：1～50日齡抗體的變化呈現(xiàn)“V”字形曲線，無論是11日齡的新流二聯(lián)疫苗免疫，還是8日齡的禽流感（H9+H5）二聯(lián)疫苗免疫和8日齡的新支流三聯(lián)疫苗免疫，都很難起到良好的免疫效果。既然如此，此階段的H9疫苗免疫是否可以取消，需要進一步的試驗論證。

從禽流感（H9）滅活疫苗20日齡前的免疫可以看出：油苗的過早免疫并不能阻止母源抗體的下降，也不能起到良好的抗體提升作用，更不能阻止免疫空白期的出現(xiàn)。這就要求我們必須加強該階段的飼養(yǎng)管理和生物安全控制。51～500日齡，該階段抗體的變化隨免疫接種時間而呈弧形變化，出現(xiàn)明顯的抗體上升期、平臺期、抗體下降期，而且隨著免疫次數(shù)的增加和雞群日齡的增大，平臺期不斷增長。

綜合大量的臨床試驗發(fā)現(xiàn)，將雞群禽流感（H9）抗體持續(xù)保持在8 log2的抗體水平是難于做到的，8 log2的抗體滴度免疫持續(xù)期相對較短，這就需要增加免疫次數(shù)，然而在雞的整個產(chǎn)蛋期內(nèi)需要肌肉注射的油苗眾多，頻繁的油苗注射反而形成雞體的吸收障礙，使得單次疫苗注射很難形成良好的抗體平臺期。因此要靠抗體的維持來杜絕禽流感疾病的發(fā)生是不現(xiàn)實的，但目前來說控制H9流行最有效的方法就是疫苗的接種，這就需要尋找一個契合點，即能有效的控制禽流感（H9）的流行又具有現(xiàn)實的可操作性。經(jīng)過反復(fù)試驗發(fā)現(xiàn)四次禽流感（H9）疫苗的免疫，可以維持整個育成、產(chǎn)蛋期6 log2以上的抗體水平，更為重要的是該抗體水平的雞群不但生產(chǎn)性能穩(wěn)定，而且并未出現(xiàn)禽流感疾病的流行。四次時機恰當(dāng)、搭配合理的禽流感（H9）疫苗免疫基本上能使得95%以上產(chǎn)蛋期抗體維持于7 log2以上。