氣相色譜法測定復(fù)方丹參片中冰片的含量及含量均勻度

黃 捷， 吳桂凡

(廣西食品藥品檢驗所，廣西南寧 530021)

復(fù)方丹參片是由三七、丹參、冰片三味藥加工而成的片劑，具有活血化瘀、理氣止痛的功效［1］580。其中丹參祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩［1］70，三七散瘀止血，消腫定痛［1］11，冰片開竅醒神，清熱止痛［1］136，三味藥相輔相成，缺一不可。復(fù)方丹參片中丹參和三七的成分定量測定研究文獻(xiàn)較多［2-4］，且已采用指紋圖譜的方法進(jìn)行了控制研究，而冰片定量測定報道較少［5-6］，冰片在處方中投料量較少［7-8］，且具有揮發(fā)性，在生產(chǎn)總混不易混勻，為考察本品中冰片的含量均勻度，特制定本法，從而達(dá)到控制本品中冰片的含量均勻度，經(jīng)試驗研究選用氣相色譜法來測定本品中冰片的含量，方法可行，質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

日本島津公司2010氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器;龍腦對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110881-200706，含量以99.2%計，供含量測定用);異龍腦對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號:1512-200201，供含量測定用);其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱 DB-WAX(柱長 30 m，內(nèi)徑 0.53 mm，膜厚度0.25 μm)，進(jìn)樣口溫度180℃，檢測器溫度200℃，柱溫135℃，進(jìn)樣量為 1 μL，分流比5 ∶1。

2.2 對照品溶液的制備

取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含5 mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取龍腦對照品和異龍腦對照品各10 mg，置20 mL量瓶中，加乙酸乙酯使溶解并稀釋至刻度。精密量取5 mL，至10 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加乙酸乙酯至刻度，搖勻即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品10片，糖衣片除去包衣，研細(xì)，精密稱取0.3 g，置10 mL量瓶中，加乙酸乙酯8 mL，超聲處理(功率320 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，加內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

2.4.1 對照品貯備液制備 精密稱取龍腦對照品30.40 mg，異龍腦對照品26.45 mg，置20 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(濃度為1.037 mg/mL)。

2.4.2 線性測定 分別精密吸取2.2項的對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、8.0 mL 至10 mL 量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。進(jìn)樣1 μL。

結(jié)果得龍腦回歸方程為:Y=17.3X－0.094 8(n=6，r=0.999 7)。

異龍腦回歸方程為:Y=17.2X－0.083 7(n=6，r=0.999 7)。

結(jié)果表明:龍腦在進(jìn)樣量為7.6～121.6 ng范圍內(nèi)時，進(jìn)樣量與龍腦峰面積呈良好的線性關(guān)系。異龍腦在進(jìn)樣量為6.6～105.8 ng范圍內(nèi)時，進(jìn)樣量與異龍腦峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

對同一供試品溶液，按正文擬訂的色譜條件，連續(xù)測定6次。結(jié)果6次測定平均含龍腦為2.392 0 mg/片，RSD為0.31%(n=6)，異龍腦為 1.403 8 mg/片，RSD 為 0.38%(n=6)，試驗表明，本法的精密度較好。

2.6 重復(fù)性試驗

對同一批樣品，按定量測定的方法平行測定6份，結(jié)果含龍腦平均值為2.383 8 mg/片，RSD 為 0.79%(n=6)，含異龍腦平均值為1.394 7 mg/片，RSD為0.81%(n=6)，結(jié)果表明，本法的重現(xiàn)性較好。

2.7 穩(wěn)定性考察

對同一供試品溶液，每隔一定時間測定一次，共測定4次，試驗表明，在25 h內(nèi)，被測物穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率測定

2.8.1 對照品貯備液的制備 精密稱取龍腦對照品14.98 mg，異龍腦對照品10.01 mg，置25 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.8.2 回收率的測定 取已測定的樣品(龍腦7.645 mg/g，異龍腦 4.473 mg/g)9 份，稱取約0.15 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，第1～3份精密加入對照品貯備液1 mL，第4～6份精密加入對照品貯備液2 mL，第7～9份精密加入對照品貯備液3 mL，照供試品溶液項下的方法制備、測定。結(jié)果表明，用本法測定龍腦、異龍腦的量，回收率符合規(guī)定。結(jié)果見表 1，表 2。

表1 龍腦加樣回收試驗結(jié)果

圖1 GC色譜圖

表2 異龍腦加樣回收試驗結(jié)果

2.9 干擾試驗

按處方量比例稱取除冰片外其余藥味，按制法制成陰性樣品，照供試品溶液制備項下的方法提取，測定。結(jié)果在龍腦和異龍腦峰相應(yīng)的保留時間無干擾峰，表明處方中其它成分對測定無影響，見圖1。

2.10 樣品的測定

取5批樣品，按2.3項下方法制備供試品溶液，平行測定2份，計算冰片的含量，結(jié)果見表3。

表3 5批樣品冰片測定結(jié)果

2.11 樣品含量均勻度

取本品1片，糖衣片除去包衣，研細(xì)，置10 mL量瓶中，用乙酸乙酯8 mL分次洗滌研缽，洗滌液并入量瓶中，超聲處理30 min，放冷，加內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，按樣品的定量測定方法測定冰片含量均勻度，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 內(nèi)標(biāo)的選擇

表4 5批樣品含量均勻度測定結(jié)果

取水楊酸甲酯和異丙醇，各加乙酸乙酯配制成每1 mL含5 mg，做為內(nèi)標(biāo)溶液。按上述方法測試，結(jié)果水楊酸甲酯出峰時間(24 min)和龍腦峰(18 min)較接近，峰面積大小也較合適，而異丙醇在35 min都未出峰，故內(nèi)標(biāo)溶劑選擇水楊酸甲酯。

3.2 不同廠家，不同的批號之間，冰片的含量差異較大，冰片的均勻度均較差，處方中冰片投藥量較少，每片只有8 mg，從均勻度的測定結(jié)果提示對于少量、易揮發(fā)的冰片，與大量的中藥浸膏較難混合均勻，結(jié)果冰片損失和均勻度出現(xiàn)較大差異。從測定樣品結(jié)果反映出復(fù)方丹參片中冰片的含量和均勻度均有必要進(jìn)一步制定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量控制。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:580.

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