宋怡敏,毛跟年,康榮榮,毛瑞娟

(陜西科技大學,陜西西安 710021)

阿膠泡騰顆粒對小鼠免疫功能的影響*

宋怡敏,毛跟年*,康榮榮,毛瑞娟

(陜西科技大學,陜西西安 710021)

研究了阿膠泡騰顆粒對小鼠免疫功能的影響。通過免疫器官重量法,考察了阿膠泡騰顆粒對小鼠中樞免疫器官和外周免疫器官發(fā)育的影響;通過碳廓清試驗,考察了阿膠泡騰顆粒對巨噬細胞吞噬功能的影響;通過遲發(fā)型變態(tài)反應試驗,考察了阿膠泡騰顆粒對小鼠細胞免疫功能的影響。結果表明,阿膠泡騰顆粒能增加免疫抑制小鼠的脾臟、胸腺指數(shù),與空白對照組相比有顯著差異;高劑量的阿膠泡騰顆粒能顯著增加小鼠的碳廓清指數(shù),與空白對照組相比差異極顯著;高、中劑量的阿膠泡騰顆粒能明顯增加小鼠的足腫脹度,與空白對照組相比有顯著差異。表明阿膠泡騰顆粒能增強小鼠的非特異性免疫和細胞免疫功能。

阿膠泡騰顆粒;小鼠;免疫器官指數(shù);碳廓清試驗;遲發(fā)型變態(tài)反應

*通訊作者

阿膠(Colla corii asini)是馬科動物驢(Equus asinusL.)的皮經去毛后熬制而成的膠塊,又名驢皮膠、付致膠,其與人參、鹿茸并稱“中藥三寶”[1]。阿膠的主要成分為膠原蛋白[2]。臨床上常治療血虛萎黃、眩暈心悸、虛風內動、吐血尿血等[3]。阿膠還可用于生產阿膠棗、阿膠奶酪[4]等保健品;已經有口服液、顆粒劑等多種劑型[5],如氨基葡萄糖阿膠制品[6]、阿膠保健口服液等?，F(xiàn)代藥理研究表明,阿膠對血液、造血系統(tǒng)、鈣代謝、免疫系統(tǒng)及腫瘤方面均有明顯作用,且有增強記憶、抗疲勞、耐缺氧等作用[7]。阿膠泡騰顆粒是阿膠經過特殊工藝加工而成的制劑,目前還沒有阿膠泡騰顆粒藥效研究的相關資料。本文通過動物試驗研究了阿膠泡騰顆粒對機體免疫功能的影響,以便為其在實際中的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試樣品 阿膠泡騰顆粒,陜西科技大學生命學院生藥實驗室提供。

1.1.2 試劑 環(huán)磷酰胺,Alfa Aesar公司提供,用生理鹽水配制成7.5 mg/mL的溶液;無水乙醇、氯化鈉、碳酸鈉等均為分析純試劑。

1.1.3 40 mL/L、200 mL/L的雞血紅細胞混懸液將加有抗凝劑的雞血,經2 000 r/min離心 10 min,棄去上清液,沉淀的紅細胞用生理鹽水輕輕吹打,經2 000 r/min離心10 min,反復洗滌3次后,再用生理鹽水分別配制成40 mL/L、200 mL/L的雞紅細胞混懸液。

1.1.4 實驗動物 昆明種小鼠,體重18 g～22 g,西安交通大學醫(yī)學院動物中心提供,合格證號:SCXF(陜)2007-001。

1.1.5 儀器 TDL-40B型電子天平,上海精密科學儀器有限公司;752型紫外分光光度儀,上海光譜儀器有限公司;游標卡尺。

1.2 方法

1.2.1 免疫器官重量法 參照文獻[8]的方法進行試驗。取小鼠48只,雌雄各半,隨機分成 4組,空白對照組、環(huán)磷酰胺組、環(huán)磷酰胺+阿膠泡騰顆粒組、阿膠泡騰顆粒組,每組12只。阿膠泡騰顆粒組、環(huán)磷酰胺+阿膠泡騰顆粒組小鼠灌胃2.8 g/kg體重的阿膠泡騰顆粒,給藥體積0.2 mL/20 g體重;空白組、環(huán)磷酰胺組小鼠灌胃等體積的生理鹽水。各組小鼠每天清晨空腹灌胃1次,連續(xù)10 d。在灌胃至第8天、9天、10天時,環(huán)磷酰胺組、環(huán)磷酰胺+阿膠泡騰顆粒組小鼠均腹腔注射75 mg/kg體重的環(huán)磷酰胺溶液,每天1次。末次灌胃24 h后,稱量各組小鼠體重,然后將小鼠脫臼處死,摘取脾臟、胸腺,稱重,計算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)。

1.2.2 小鼠碳廓清試驗 參照文獻[9]的方法進行試驗。取小鼠48只,雌雄各半,隨機分為 4組,空白對照組、阿膠泡騰顆粒低劑量組、中劑量組、高劑量組,每組12只。阿膠泡騰顆粒低、中及高劑量組小鼠分別灌胃1.4、2.8、5.6 g/kg體重的阿膠泡騰顆粒,給藥體積0.2 mL/20 g體重;空白組灌胃等體積的蒸餾水。各組小鼠每天清晨空腹灌胃1次,連續(xù)10 d。末次灌胃2 h后,各組小鼠均尾靜脈注射用生理鹽水稀釋5倍的墨汁0.01 mL/g體重,立即計時,分別于注射墨汁后2 min、15 min時從尾靜脈采血0.05 mL,移入到含2 mL 1 g/L Na2CO3溶液的試管中,混勻后測定光吸收度,計算碳廓清指數(shù)K(carbon expurgation)。

式中:A1為2 min所采血樣的吸光值;A2為15 min所采血樣的吸光值;t1為2 min,t2為15 min。

1.2.3 小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應試驗 參照文獻[10]的方法,小鼠分組、給藥方法、給藥劑量和時間同“小鼠碳廓清試驗”。在灌胃至第6天時,各組小鼠均腹腔注射40 mL/L的雞紅細胞混懸液0.2 mL/只,進行致敏,在灌胃第10天,各組小鼠于左后足跖部皮下均注射200 mL/L的雞紅細胞混懸液200 μL/只,進行攻擊。同時,于攻擊前及攻擊后24 h測量各組小鼠左后足跖同一部位厚度,采用足跖增厚法計算遲發(fā)型變態(tài)反應值(delayed type hypersensitivity,DTH)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 試驗結果用平均值±標準差表示,各組間數(shù)據(jù)用t檢驗進行分析。

2 結果

2.1 阿膠泡騰顆粒對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

用環(huán)磷酰胺制造免疫抑制小鼠模型,計算小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù),結果見表1。

表1 阿膠泡騰顆粒對小鼠免疫器官指數(shù)的影響Table 1 Effect of E-jiao effervescent granules on immune organ indexes in mice

由表1可見,無論是否灌胃阿膠泡騰顆粒,腹腔注射環(huán)磷酰胺后,各組小鼠的免疫器官指數(shù)均明顯降低,說明造模成功。與空白對照組相比,各組小鼠脾臟指數(shù)均表現(xiàn)出顯著差異(P＜0.05),環(huán)磷酰胺組、環(huán)磷酰胺+阿膠泡騰顆粒組小鼠胸腺指數(shù)有極顯著差異(P＜0.01),阿膠泡騰顆粒組小鼠胸腺指數(shù)則表現(xiàn)出顯著差異(P＜0.05)。對環(huán)磷酰胺型免疫抑制模型小鼠灌胃阿膠泡騰顆粒后,小鼠的免疫器官指數(shù)均明顯回升;與環(huán)磷酰胺組相比,環(huán)磷酰胺+阿膠泡騰顆粒組小鼠脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)無顯著差異(P＞0.05),阿膠泡騰顆粒組小鼠脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)有極顯著差異(P＜0.01)。表明阿膠泡騰顆粒能使環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠的免疫器官指數(shù)有所回升。

2.2 阿膠泡騰顆粒對小鼠碳廓清指數(shù)的影響

用紫外-可見分光光度儀,選取波長680 nm,測血樣光吸收度,計算小鼠碳廓清指數(shù),結果見表2。

由表2可見,灌胃阿膠泡騰顆粒后,雖然各組小鼠的碳廓清指數(shù)均有所升高,但與空白對照組相比,阿膠泡騰顆粒低、中劑量組小鼠碳廓清指數(shù)無顯著差異(P＞0.05),而高劑量組小鼠碳廓清指數(shù)則表現(xiàn)出極顯著差異(P＜0.01)。表明高劑量的阿膠泡騰顆粒能顯著提高小鼠的碳廓清指數(shù)。

表2 阿膠泡騰顆粒對小鼠廓清指數(shù)的影響Table 2 Effect of E-jiao effervescent g ranules on the clearance of carbon particle in mice

2.3 阿膠泡騰顆粒對小鼠足腫脹度的影響

用游標卡尺測定足跖厚度。按照上述方法試驗后計算小鼠DTH值,結果見表3。

表3 阿膠泡騰顆粒劑對小鼠DTH值的影響Table 3 Effect of E-jiao effervescent granules on DTH in mice

由表3可見,灌胃阿膠泡騰顆粒后,各組小鼠的DTH雖然均有所升高,但與空白對照組相比,阿膠顆粒低劑量組小鼠DTH未見顯著性差異(P＞0.05),中、高劑量組小鼠DTH值均表現(xiàn)出顯著差異(P＜0.05)。表明阿膠泡騰顆粒能不同程度的提高小鼠的足腫脹度。

3 討論

阿膠為傳統(tǒng)中藥,在我國的應用已經有2 500多年的歷史。阿膠中含有膠原蛋白、多肽、氨基酸、硫酸皮膚素及硒、鋅等多種微量元素。現(xiàn)代醫(yī)學研究已經證明,阿膠具有補血、抗疲勞、提高機體免疫功能等多種功效。阿膠泡騰顆粒是以傳統(tǒng)阿膠為主要原料,經過現(xiàn)代工藝技術研制而成的一種新劑型。為了明確阿膠泡騰顆粒對機體免疫功能的影響,本文以成人每日推薦的阿膠使用量為基礎,根據(jù)阿膠泡騰顆粒中阿膠的實際含量,換算出小鼠的等效劑量為中等劑量,擴大兩倍或縮小兩倍為高劑量及低劑量,分組對小鼠進行灌胃。

胸腺為中樞免疫器官、脾臟為外周免疫器官,這些免疫器官指數(shù)的高低在一定程度上能夠反映機體免疫機能的強弱。環(huán)磷酰胺是一種免疫抑制劑,能使實驗動物胸腺萎縮、脾臟變小,抑制機體的免疫功能。對環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠灌胃阿膠泡騰顆粒,結果顯示小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均有所增加,表明阿膠泡騰顆粒能夠促進中樞和外周免疫器官發(fā)育,提高機體的免疫功能。

碳廓清試驗是檢測機體非特異性免疫功能的常用方法之一。顆粒狀異物(如碳粒)靜脈注射進入血液循環(huán)后,能迅速被巨噬細胞吞噬,若將異物量恒定,測定異物在血液中的消除速率,可以反映巨噬細胞的吞噬功能[11]。碳廓清試驗結果顯示,給小鼠灌胃阿膠泡騰顆粒后,小鼠的碳廓清指數(shù)有所增加,提示阿膠泡騰顆粒能提高小鼠巨噬細胞的吞噬能力,增強機體非特異性免疫功能。

雞血紅細胞誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應是由特異性致敏效應T細胞介導的細胞免疫反應,其中的T細胞在排斥自身免疫和腫瘤免疫等方面起著關鍵作用,是檢測細胞免疫功能的常用方法之一。遲發(fā)型變態(tài)反應結果顯示,給小鼠灌胃阿膠泡騰顆粒后,能不同程度的提高小鼠的DT H值,提示阿膠泡騰顆粒能夠激發(fā)小鼠T細胞介導的細胞免疫應答,增強小鼠的細胞免疫功能。

[1]吳長虹,王若光.阿膠的歷史沿革,研究現(xiàn)狀及相關思考[J].湖南中醫(yī)藥大學學報,2008,28(6):77-79.

[2]劉文義,王莉麗.阿膠補益成分分析方法的研究進展[J].齊魯藥事,2009,28(11):682-684.

[3]毛跟年,郭 倩,瞿建波,等.阿膠化學成分及藥理作用研究進展[J].動物醫(yī)學進展,2010,31(11):83-85.

[4]劉桂芹,程 霜,王 會,等.阿膠奶酪的工藝研究[J].食品研究與開發(fā),2010,31(2):103-106.

[5]張紅梅,王文靜,李興元.X射線熒光光譜法測定螺旋藻和阿膠中微量元素[J].光譜實驗室,2008,25(2):150-151.

[6]曹 斌,曹家銘,瞿振華.一種氨基葡萄糖阿膠制品及其制備方法[P].中國專利:101366730A,2009-2-18.

[7]常德有,楊 靖,董福慧.阿膠對體外培養(yǎng)大鼠成骨細胞增殖、分化功能的影響[J].中國老年學雜志,2009,29(24):3230-3232.

[8]崔金玉,賈天柱.阿膠及不同炮制品的藥理作用研究[J].中成藥,2008,30(12):1841-1842.

[9]丁永芳,周玲玲,方泰惠.紫七軟肝顆粒對小鼠免疫功能的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2003,10(5):20-21.

[10]袁紅波,趙 文,趙仁邦,等.金絲小棗糖漿對小鼠免疫功能的影響[J].中國食品學報,2008,8(1):13-16.

[11]楊 蓮,段小花,李松梅,等.普洱茶對免疫低下小鼠單核-巨噬細胞洗脫碳粒廓清功能的影響[J].云南中醫(yī)中藥雜志,2008,29(10):43-44.

Effect ofColla Corri AsiniEffervescent Granules on Immune Function in Mice

SONG Yi-min,MAO Gen-nian,KANG Rong-rong,MAO Rui-juan

(Shaanxi University of Science and Technology;Xi＇an,Shaanxi,710021,China)

The effect ofColla corri asinieffervescent granules on immune function was studied.The development of central immune organs and peripheral immune organs with E-jiao effervescent granules was inspected by immune organ weight method;the test of carbon clearance was applied to determine the effect ofColla corri asinieffervescent granules on macrophage phagocytic function;through the test of delayed hypersensitivity,the effect ofColla corri asinieffervescent granules on cellular immune function was studied.The results showed that theColla corri asinieffervescent granules could increase spleen index and thymus index of the immunosuppressive mice,which had a significant difference comparing with the blank control group;the high doses of the E-jiao effervescent granules could obviously enhance the clearance of carbon particle in mice,which had a very significant difference comparing with the blank control group;the high and middle doses of E-jiao effervescent granules could enhance the paw swelling in mice obviously,which had a significant difference comparing with the blank control group.These results indicated thatColla corri asinieffervescent granules could enhance the nonspecific immunity and cellular immunity in mice.

E-jiao effervescent granules;mouse;immune organ index;carbon clearance test;delayed type hypersensitivity test

S859.7

A

1007-5038(2011)09-0073-03

2011-06-13

宋怡敏(1986-),女,山西臨汾人,碩士研究生,主要從事藥物新材料研究。