黨成壽,李增魁

(1.青海省天峻縣畜牧獸醫(yī)站,青海天峻 817200;2.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系,青海西寧 810016)

青海省部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染的血清學(xué)調(diào)查*

黨成壽1,李增魁2

(1.青海省天峻縣畜牧獸醫(yī)站,青海天峻 817200;2.青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系,青海西寧 810016)

應(yīng)用豬圓環(huán)病毒2型抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒,測(cè)定了青海省省內(nèi)8個(gè)豬場(chǎng)的1 000個(gè)血清樣本,對(duì)不同地區(qū)、不同年齡豬的進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查。結(jié)果顯示,青海省8個(gè)豬場(chǎng)均有豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)感染,全省豬的PCV-2感染的平均血清陽(yáng)性率為25.9%,其中母豬、種公豬、生長(zhǎng)育肥豬、保育豬及哺乳仔豬抗體陽(yáng)性率分別35.3%、28.3%、26.2%、25.0%和14.9%;說(shuō)明PCV-2在豬群中的感染非常普遍。

豬圓環(huán)病毒2型;血清學(xué);酶聯(lián)免疫吸附試

*通訊作者

豬圓環(huán)病毒(PCV)是圓環(huán)病毒屬的代表種,它是一種小而無(wú)囊膜、二十面體對(duì)稱、共價(jià)閉合、環(huán)狀、單股DNA病毒,病毒粒子直徑平均為17 nm[1],是目前獸醫(yī)學(xué)上發(fā)現(xiàn)的最小的動(dòng)物病毒。A11an G M等[2]從斷奶豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)病例中分離到的PCV,稱為豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)。目前在德國(guó)[3]、法國(guó)[4]、新西蘭[5]、美國(guó)[6]、加拿大[7]、日本[8]等國(guó)家和地區(qū)已有從PMWS豬中檢測(cè)到PCV-2的報(bào)道。我國(guó)學(xué)者證實(shí)在我國(guó)豬群中有PCV-2的存在[9-10]。這些資料說(shuō)明PCV-2的感染在豬群中很普遍。

據(jù)Kim J等[11]認(rèn)為PCV-2在5月份為發(fā)病高峰,豬群患病率為3%～50%,死亡率在8%～35%。而Pallares F J等[12]認(rèn)為大部分PMWS病例發(fā)生于8周齡～18周齡,10周齡為發(fā)病高峰期。本病發(fā)展緩慢,一次發(fā)病可持續(xù)12月～18月之久,傳播速度慢,易與其他疾病混淆。為了解青海省部分地區(qū)PCV-2的感染、流行分布情況,更好地預(yù)防和控制此病,我們于2009年3月～6月應(yīng)用 ELISA 方法,對(duì)青海省部分地區(qū)的豬場(chǎng)豬血清進(jìn)行了PCV-2抗體檢測(cè),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器設(shè)備 離心機(jī)、恒溫箱、自動(dòng)洗板機(jī)(DG3080)為南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限公司產(chǎn)品;安圖斯酶標(biāo)儀(Anthos2010)為上海森超貿(mào)易公司產(chǎn)品;微量移液器(Gilson)為北京伯樂(lè)生命科學(xué)發(fā)展有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 試劑 PCV-2抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(PCV-2 Antibody ELISA kit),為武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司產(chǎn)品,生產(chǎn)批號(hào)為PC2009022801。

1.2 方法

1.2.1 調(diào)查方法 調(diào)查采用血清學(xué)檢驗(yàn)和流行病學(xué)特點(diǎn)結(jié)合的方式進(jìn)行。

1.2.2 被檢血清 樣品采自青海省互助、樂(lè)都、民和、大通和湟源等地區(qū)。通過(guò)前腔靜脈或耳靜脈采集了1 000份豬靜脈血,經(jīng)過(guò)血清分離后置于滅菌離心管中,4 000 r/min離心5 min,除去沉淀,保留上清,置于冰箱-20℃保存待用。

1.2.3 豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA檢測(cè)

1.2.3.1 洗滌液的配制 濃縮的洗滌液在室溫?fù)u動(dòng)使沉淀的鹽溶解,然后用蒸餾水作20倍稀釋。

1.2.3.2 樣品的稀釋 按1∶40的體積稀釋待檢血清,陽(yáng)性和陰性對(duì)照1∶4稀釋。

1.2.3.3 操作步驟 用稀釋好的洗滌液洗板2次檢測(cè)板(200μL/孔),每次靜置2 min后倒掉,再在干凈吸水紙上拍干;取稀釋好的待檢樣品100 μL加入到檢測(cè)板中;陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔,每孔100 μL;輕輕振勻孔中樣品置 37℃溫育30 min;甩掉板孔中的溶液,用洗滌液洗板3次,200 μL/孔,每次靜置3 min倒掉,再在干凈吸水紙上拍干;每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100 μL,置37 ℃溫育 30 min;洗滌5次(切記每次在干凈吸水紙上拍干);每孔先加底物 A 液 50 μL 、再加底物 B 液 50 μL,混勻 ,室溫(18℃～25℃)避光顯色 10 min;每孔加終止液50 μL,10 min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

1.2.3.4 結(jié)果判定 試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630值大于或等于1.0,陰性對(duì)照孔平均OD630值必須小于0.3;于波長(zhǎng)630 nm處測(cè)酶標(biāo)儀上各孔OD630值。樣品OD630值大于0.42,判為陽(yáng)性;樣品OD630值在0.38～0.42之間,判為可疑;樣品OD630值小于0.38,判為陰性。

2 結(jié)果

2.1 不同豬場(chǎng)豬血清PCV-2抗體檢測(cè)結(jié)果

應(yīng)用ELISA方法對(duì)青海省部分地區(qū)某8個(gè)豬場(chǎng)不同年齡豬的1 000份血清樣品進(jìn)行了豬圓環(huán)病毒2型的抗體檢測(cè),共檢出陽(yáng)性血清259份,總陽(yáng)性率為25.9%(表1)。

表1 青海省部分地區(qū)不同豬場(chǎng)豬血清PCV-2抗體檢測(cè)結(jié)果Table 1 T he seral antibody test results of PCV-2 at different swine farms in Qinghai

2.2 不同豬群感染PCV-2的情況

母豬抗體陽(yáng)性血103份,抗體陽(yáng)性率為35.3%;種公豬抗體陽(yáng)性血清13份,抗體陽(yáng)性率為28.3%;生長(zhǎng)育肥豬抗體陽(yáng)性血清 44份,抗體陽(yáng)性率為26.2%;保育豬抗體陽(yáng)性血清71份,抗體陽(yáng)性率為25.0%;哺乳仔豬抗體陽(yáng)性血清30份,抗體陽(yáng)性率為 14.9%(表 2)。

2.3 臨床癥狀和病理變化

對(duì)20例PCV-2陽(yáng)性病例的臨床癥狀觀察,消瘦、被毛粗亂、發(fā)泄、蒼白和黃疸是主要臨床表現(xiàn)。在病豬群中有時(shí)亦見(jiàn)有包括咳嗽、發(fā)熱、胃潰瘍、中樞神經(jīng)障礙、進(jìn)行性呼吸困難等臨床特征。有些初生仔豬斷奶后出現(xiàn)皮膚表面有紫色的小丘疹、淋巴結(jié)腫大,有些保育豬出現(xiàn)過(guò)耳、四肢、臍部呈藍(lán)紫色癥狀,死亡率和淘汰率均較高。剖檢病豬發(fā)現(xiàn)肺部水腫呈橡皮樣,表面黃褐色并有斑點(diǎn),嚴(yán)重者可見(jiàn)肺泡出血;有些病例脾臟腫大,切面呈肉狀,個(gè)別病例脾臟邊緣有暗紅色壞死灶;有些病豬出現(xiàn)頜下、腸系膜及縱膈淋巴結(jié)腫大,切面呈紅白相間的大理石樣花紋狀;心、肝、肺、腎、腸出現(xiàn)肉芽腫性病變。

表2 不同豬群血清PCV-2抗體檢測(cè)結(jié)果Table 1 The antibody test results of PCV-2 from different swine groups

3 討論

通過(guò)對(duì)青海部分地區(qū)1 000只豬血清PCV-2血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,陽(yáng)性血清259份,陽(yáng)性率為25.9%;不同豬群中母豬群的陽(yáng)性率高達(dá)35.3%,而哺乳仔豬的陽(yáng)性率較低,陽(yáng)性率為14.9%;豬只隨飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),PCV-2的感染機(jī)率增大,而使豬血清中的抗體陽(yáng)性率隨年齡的增長(zhǎng)而升高,這與胡慧等[13]報(bào)道的河南地區(qū)PCV-2調(diào)查的數(shù)據(jù)相一致,而與周繼勇等[10]報(bào)道的浙江地區(qū)PCV-2感染情況調(diào)查相反,所以本病的傳播是否與垂直傳播有關(guān),尚需進(jìn)一步證實(shí)。

本次對(duì)豬血清樣品PCV-2抗體的血清學(xué)調(diào)查是隨機(jī)抽樣進(jìn)行的,包括青海省5個(gè)地區(qū)的8個(gè)豬場(chǎng)中不同生長(zhǎng)階段的豬血清樣本,具有一定的代表性。從檢測(cè)結(jié)果看所有被檢測(cè)豬場(chǎng)均存在不同程度的PCV-2感染,說(shuō)明PCV-2的感染是相當(dāng)普遍的。

肺泡巨噬細(xì)胞是PCV-2感染的主要靶細(xì)胞,其在感染初期機(jī)體清除病毒和啟動(dòng)特異性免疫應(yīng)答過(guò)程中承擔(dān)著重要作用,因此PCV-2感染對(duì)豬肺泡巨噬細(xì)胞活力、吞噬及細(xì)胞因子表達(dá)等免疫功能的有一定的影響。巨噬細(xì)胞除可以吞噬和殺滅多種病原微生物、處理凋亡損傷的細(xì)胞外,還可以對(duì)細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行加工、處理和遞呈,進(jìn)而啟動(dòng)特異性免疫應(yīng)答。本次調(diào)查中據(jù)豬場(chǎng)工作人員反饋,經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果看,母豬的CSFV和FMDV抗體合格率均很高,而保育豬和肥育豬的抗體合格率都很低,普遍在50%以下。這與大部分母豬是經(jīng)產(chǎn)母豬,已經(jīng)過(guò)多次疫苗免疫接種有關(guān),仔豬由于豬場(chǎng)存在不同程度的PCV-2的感染,造成母源抗體提供的保護(hù)不足,使得CSFV和FMDV疫苗免疫接種效果不佳[14-15]。

[1]Lukert P,Boer D E,Dale G F,et al.The Circoviridae.In Virus Taxonomy:Six th report of the international committee on tax onomy of viruses[C].New York:Springer Verlag,1995:166-168.

[2]Allan G M,McNeilly F,Kennedy S,et al.Isolation of po rcine circovirus-like viruses from pigs with a wasting disease in the USA and Europe[J].J Vet Diag n Invest,1998,10(1):3-10.

[3]Mankertz A,Dominogo M,Folch J M,et al.Character isation of PCV2 isolates from Spain,Germany and France[J].Virus Res,2000,66(1):65-77.

[4]Madec F,Eveno E,M orvan P,et al.Post-weaning multisystemic wasting syndrome(PMWS)in pig s in France:clinical observations from follow-up studies on affected farms[J].Livestock Production Science,2000,63(3):223-233.

[5]Horner G W.Pig circovirus antibodies present in New Zealand pigs[J].Survillance Wellington,1991,18(5):23.

[6]Draft B,Nordhausen R W,Latimer K S,et al.Interstitial poeumonia and lymphadenopathy associated with circoviral in a six week-old pig[J].Proc Am Assoc Vet Lab Diag,1996,66(14):32-39

[7]Clark,E G.Clark E G.Post weaning multi systemic wasting syndrome[C].Proceeding s of the American Association of Swine Practitioners,1997:499-501.

[8]Onuki A,ABE K,Togashi K,et al.Detection of porcine circovirus from lesions of pig with wasting disease in Japan[J].J Vet Med Sci,1999,61(10):1116-1123.

[9]郎洪武,張廣川,吳發(fā)權(quán),等.斷奶豬多系統(tǒng)衰弱綜合征血清抗體檢測(cè)[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,2000,30(3):3-5.

[10]周繼勇,陳慶新,葉菊秀,等.豬圓環(huán)病毒2型感染的血清學(xué)分析[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2004,24(1):1-3.

[11]Kim J,Chung H K,Jung T,et al.Postweaning multisystemic wasting sy ndrome of pigs in Korea:prevalence microscopic lesions and coexisting microorganisms[J].Vet Med Sci,2002,64(1):57-62.

[12]Pallares F J,Halbur P G,Opriessning T,et al.Porcine circovirus ty pe 2(PCV-2)coinfections in US field cases of postweaning multisy stemic wasting syndrome(PM WS)[J].Vet Diagn Invest,2002,14(6):515-519.

[13]胡 慧,王亞賓,陳麗穎,等.河南地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染的血清[J].畜牧與獸醫(yī),2010,42(10):70-72.

[14]李 達(dá),吳雅玲.應(yīng)用ELISA檢測(cè)豬瘟免疫抗體[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,2003,33(4):66-67.

[15]趙啟祖,謝慶閣.家畜口蹄疫疫苗簡(jiǎn)介[J].中國(guó)獸醫(yī)科技,2000,30(6):43-44.

Serological Investigation on Porcine Circovirus 2 in Qinghai Province

DANG Cheng-shou1,LI Zeng-kui2

(1.Animal Husbandry and Veterinary Staion of T ianj un,Tianjun,Qinghai,817200,China;
2.College of Agriculture and Animal Science,Qinghai University,Xining,Qinghai,810016,China)

In order to understand the prevalence of porcine circovirus 2(PCV-2)in Qinghai province,1 000 serum samples from 8 pig farms in Qinghai province were examined for antibody against PCV-2 by enzymelinked immunosorbent assay kit(ELISA).The results showed that PCV-2 were detected in all 8 pig farms,259 positive samples were detected,with the 25.9%positive rate.The positive rates of sow,boar,finishing pig,nursery pig and suckling pig were 35.3%,28.3%,26.2%,25.0%and 14.9%,respectively.The results indicated that PCV-2 prevalence was relatively severe in pig herds in Qinghai.

Porcine circovirus 2;serology;ELISA

S852.659.2

B

1007-5038(2011)09-0129-03

2011-05-06

黨成壽(1973-),男,青海湟中縣人,獸醫(yī)師,主要從事動(dòng)物疾病防控。