第五永長(zhǎng) 許建秦 賈妮

任何與慢性炎癥有關(guān)的過程都會(huì)削弱胰島素作用，造成胰島素抵抗的產(chǎn)生;作為惡性循環(huán)，胰島素抵抗又會(huì)使炎癥惡化引起一系列機(jī)體內(nèi)環(huán)境的改變［1］。在胰島素抵抗與老年性癡呆(Alzheimer’s disease，AD)聯(lián)系的病理生理機(jī)制中，炎癥起著非常重要的作用。研究表明，AD患者存在慢性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥免疫反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)觀察了具有改善胰島素敏感性作用的助脾散精復(fù)方顆粒對(duì)胰島素抵抗模型大鼠海馬及皮質(zhì)炎癥因子TNF-α、IL-1β水平的影響，以期探索干預(yù)胰島素抵抗相關(guān)的AD病理進(jìn)展的新方法。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

助脾散精復(fù)方顆粒由人參、蒼術(shù)、黃連、虎杖等藥物組成(1 g提取物顆粒相當(dāng)于2.94 g生藥)，由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心代加工。鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)，Merck公司產(chǎn)品，批號(hào):S0130。主要試劑:ELISA法TNF-α、IL-1β測(cè)定試劑盒，武漢博士德生物工程公司產(chǎn)品。

1.2 動(dòng)物與分組

健康雄性清潔級(jí)SD大鼠60只，約2月齡，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)0034642。

適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)取45只大鼠按30 mg/kg尾靜脈注射STZ并普食喂養(yǎng)2周。以葡萄糖耐量試驗(yàn)法篩選糖耐量異常大鼠18只，分為助脾散精復(fù)方顆粒組、羅格列酮組和模型組各6只。并以同批6只未造模大鼠做為正常對(duì)照組。

助脾散精復(fù)方顆粒組:將助脾散精復(fù)方顆粒以含5%羧甲基纖維素的PBS溶液稀釋(0.218 g/ml)，按2.18 g·kg-1·d-1體重劑量給大鼠灌服藥物，每天1次。

羅格列酮組:灌服羅格列酮6 μg·kg-1·d-1。

模型組:灌服與助脾散精復(fù)方顆粒組等體積的含5%羧甲基纖維素的PBS溶液。

以上3組在治療期間喂高糖高脂飲食，蔗糖∶豬油∶奶粉∶雞蛋∶普通飼料 =30∶20∶4∶2∶63(質(zhì)量比)。

正常對(duì)照組:以普通飼料喂養(yǎng)，不作任何特殊處理。

1.3 腦組織處理及檢測(cè)

全部實(shí)驗(yàn)大鼠按4.0 ml/kg的劑量腹腔注射10%水合氯醛麻醉，脫頸處死，完整取出鼠腦，冰上剝離海馬及皮層，取一側(cè)海馬及皮層以低溫(4℃)高速勻漿機(jī)制成10%勻漿，在低溫離心機(jī)(4℃)3000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘，分別按照TNF-α、IL-1β測(cè)定試劑盒說明以ELISA法進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠海馬及皮質(zhì) TNF-α、IL-1β水平明顯增高，差異有顯著性(P＜0.01)。與模型組比較，助脾散精復(fù)方顆粒組及羅格列酮組治療后海馬及皮質(zhì)TNF-α、IL-1β水平明顯下降，差異有顯著性(P＜0.01)。羅格列酮組和助脾散精復(fù)方顆粒組比較，TNF-α、IL-1β水平均無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

表1 助脾散精復(fù)方顆粒對(duì)胰島素抵抗模型大鼠海馬及皮質(zhì)TNF-α、IL-1β 水平的影響(±s，n=6)

表1 助脾散精復(fù)方顆粒對(duì)胰島素抵抗模型大鼠海馬及皮質(zhì)TNF-α、IL-1β 水平的影響(±s，n=6)

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3 討論

既往研究顯示，在AD患者腦內(nèi)，受彌漫性或纖維性淀粉樣蛋白(Amyloid β-protein，Aβ)的刺激，腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞由靜止?fàn)顟B(tài)快速活化，產(chǎn)生許多前炎性介質(zhì)(IL-1、IL-6、TNF-α等)及有神經(jīng)毒性潛能的物質(zhì)，引起大腦局灶或廣泛性損傷直至神經(jīng)元丟失［2］。其中，白介素-1(IL-1)可能是導(dǎo)致AD病理改變的關(guān)鍵性因子，在AD患者腦內(nèi)，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞所表達(dá)的IL-1幾乎能達(dá)到相同年齡對(duì)照組的30倍［3］。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是目前發(fā)現(xiàn)與胰島素抵抗關(guān)系最為密切的炎癥因子，并且在AD腦內(nèi)，活化的小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá) TNF-α 上調(diào)［4］。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，胰島素抵抗模型大鼠海馬及皮質(zhì)TNF-α、IL-1β水平明顯增高，提示胰島素抵抗大鼠腦組織存在明顯的炎癥免疫反應(yīng)。具有改善胰島素敏感性作用［5］，功能燥濕解毒、助脾散精的中藥復(fù)方助脾散精復(fù)方顆粒能夠明顯降低胰島素抵抗模型大鼠海馬及皮質(zhì)TNF-α、IL-1β的水平。提示該方可能通過影響腦組織炎癥免疫反應(yīng)及胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)起到干預(yù)胰島素抵抗相關(guān)性AD病理進(jìn)展的作用。有關(guān)該方潛在的防治AD認(rèn)知損害及病理改變的深層機(jī)制，有待于進(jìn)一步深入研究。

［1］Fernndez-Real JM，Ricart W.Insulin resistance and chronic cardiovascular inflammatory syndrome［J］.Endocrine Reviews，2003，24(3):278-301.

［2］Xiang Z，Haroutunian V，Ho L，et al.Microglia activation in the brain as inflammatory biomarker of Alzheimer's disease neuropatho1ogy and clinical dementia［J］.Dis Markers，2006，22:95-102.

［3］Griffin WS.Inflammation and neurodegenerative disease［J］.Am J Clin Nutr，2006，83(2):470-474.

［4］Weisman D，Hakimian E，Ho GJ.Interleukins，Inflammation，and Mechanisms of Alzheimer’s Disease［J］，Vitam Horm，2006，74:505-530.

［5］第五永長(zhǎng)，陳榮，高潔，等.ZPSJ方對(duì)2型糖尿病胰島素抵抗患者胰島素敏感性的影響［J］.國際中醫(yī)中藥雜志，2009，31(4):299-300.