三七丹參片預(yù)處理對(duì)心肌缺血再灌注大鼠SOD及MDA的影響

胡清茹 王中曉 魯宜夏

1 南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校藥理教研室，河南省南陽(yáng)市 473001； 2 成都中醫(yī)藥大學(xué)

經(jīng)過(guò)多年的臨床驗(yàn)證，中藥三七丹參片具有舒肝理氣、活血化淤、鎮(zhèn)靜安神之功效。其主要成分為三七和丹參：三七味甘、微苦、性平，歸肝、胃經(jīng)，有散淤止血，消腫定痛的作用；丹參味苦、微寒，入心、肝經(jīng)，可活血通絡(luò)，并能涼血養(yǎng)血，以止心痛之發(fā)；兩藥合用尤其能夠協(xié)同增加冠狀動(dòng)脈血流量，改善心肌缺氧。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察三七丹參片對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷（IR）模型超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量的影響，并探討其作用機(jī)制，為其臨床治療冠心病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD健康成年大鼠60只，雄性，體重（280±20）g，購(gòu)于河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 主要藥品與試劑 三七丹參片：由貴州德良方藥物股份有限公司提供。MDA、SOD試劑盒：由上海朗頓生物科技有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 BSM－7105床邊監(jiān)護(hù)儀（上海泰益醫(yī)療儀器設(shè)備有限公司），動(dòng)物呼吸機(jī)（成都泰盟科技有限公司），2－16PK低溫冷凍離心機(jī)（德國(guó)SIGMA公司），心電監(jiān)護(hù)儀（深圳市奧生科技有限公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 給藥及實(shí)驗(yàn)分組。將雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組15只。假性處理組：連續(xù)15d灌胃生理鹽水（2ml／d），于最后1次灌胃1h后開(kāi)胸完成冠狀動(dòng)脈前降支下置線(xiàn)不結(jié)扎。再灌注損傷組（IR組）：連續(xù)15d灌胃生理鹽水（2ml／d），于最后1次灌胃1h后建立IR模型。IP組：連續(xù)15d灌胃生理鹽水（2ml／d），于最后1次灌胃1h后建立IP模型。三七丹參組：每天灌胃中藥三七丹參片2ml（4.68g／kg，劑量按人體表面積的0.018計(jì)算）連續(xù)灌胃15d，于最后1次灌胃1h后建立IR模型。

1.4.2 心肌缺血再灌注大鼠模型的建立。腹腔注射20%烏拉坦（5ml／kg）麻醉大鼠，固定背位，胸部去毛，酒精消毒，行氣管插管，連接人工呼吸機(jī)（頻率60次／min，潮氣量20ml／kg），采用心電監(jiān)護(hù)儀監(jiān)測(cè)心電變化。沿著左鎖骨中線(xiàn)，縱行將皮膚切開(kāi)約2cm，在胸骨左緣第4肋骨處開(kāi)胸，暴露心臟，將心包剪開(kāi)，輕輕按壓胸壁，將心臟擠出。迅速穿線(xiàn)于冠狀動(dòng)脈左前降支，將其結(jié)扎后再將心臟送回胸腔。IR組：結(jié)扎30min，剪斷結(jié)扎線(xiàn)之后再灌注100min。IP組：缺血5min，再灌注5min，反復(fù)3次后缺血30min，再灌注100min。假性處理組只穿線(xiàn)不結(jié)扎。造模后的左室發(fā)紺，心電圖有異常表現(xiàn)：T波高聳或倒置呈弓背向上單向曲線(xiàn)和（或）T段抬高標(biāo)志著冠狀動(dòng)脈結(jié)扎缺血的成功；再灌注損傷模型成功的標(biāo)志是再灌注后，抬高的ST段和（或）R波恢復(fù)，發(fā)紺心肌顏色變紅。

1.4.3 觀(guān)察指標(biāo)及測(cè)定SOD、MDA含量。大鼠腹主動(dòng)脈取血，以3000r／min的速度離心5min，分離血清，用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定血清SOD含量，硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量，具體操作按SOD、MDA試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟執(zhí)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。采用單因素方差分析計(jì)量資料，采用q檢驗(yàn)進(jìn)行組間多重比較，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠心肌組織MDA、SOD含量（）

表1 各組大鼠心肌組織MDA、SOD含量（）

注：與IR組比較，P＜0.05。

組別 n MDA（nmol／mg.pro） SOD（U／mg.pro）假性處理組 15 4.66±1.68287.17±21.25 IR組 15 129.38±2.37 141.42±20.86 IP組 15 6.76±2.19 196.29±23.43三七丹參組 15 6.93±2.01203.35±24.45

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，預(yù)適應(yīng)是目前已知效果最強(qiáng)的、心臟固有的自我保護(hù)機(jī)制。它既可以有效地對(duì)抗心肌缺血再灌注所造成的各種心肌損傷，又能夠改善心肌中離子異常及生化物質(zhì)，同時(shí)可以減少自由基引起的細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化損傷等。丙二醛（MDA）是生物膜不飽和脂肪酸與自由基相互作用下生成的過(guò)氧化物，機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的程度能夠通過(guò)其含量來(lái)反映。SOD是體內(nèi)的一種特異性清除酶，該酶活性發(fā)生改變可反映體內(nèi)抗氧化功能情況。因此測(cè)定血清SOD、MDA含量可間接了解自由基產(chǎn)生和清除情況。

本實(shí)驗(yàn)假性處理組及三七丹參組術(shù)后的心肌組織SOD活性、MDA含量無(wú)明顯差異。缺血再灌注組SOD活性明顯下降、MDA含量升高，與假性處理組及三七丹參組比較，差異顯著，說(shuō)明心肌缺血再灌注的急性期有大量的自由基產(chǎn)生，使MDA含量升高，SOD活性下降，明顯破壞了心肌組織。缺血預(yù)適應(yīng)組、三七丹參組術(shù)后SOD活性明顯提高、MDA含量下降，與缺血再灌注組比較具有顯著性差異。提示缺血預(yù)適應(yīng)、三七丹參預(yù)處理可通過(guò)內(nèi)源性抗氧化物質(zhì)的增加而對(duì)缺血心肌組織起保護(hù)作用。

［1］ 范催生，主編.中藥采收鑒別應(yīng)用全書(shū)〔M〕.南昌：江西科技出版社，1995：92.

［2］ 方文賢，宋崇順，周立孝，等.醫(yī)用中藥藥理學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：900.

［3］ 謝勇，蔡光先，劉柏炎，等.大鼠心肌缺血再灌注損傷模型的改進(jìn)〔J〕.中華臨床醫(yī)學(xué)研究雜志，2008，14（7）：903－904.

［4］ 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：938－940.

［5］ 朱妙章，袁文俊，吳博威，等.心血管生理學(xué)與臨床〔M〕.北京：高等教育出版社，2004：633－635.