聶華明，余 華，嚴(yán)玉寶，楊光友，古小彬

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川雅安 625014;2.四川出入境檢驗(yàn)檢疫局，四川成都 610041）

棘球蚴?。‥chinococcusis）是帶科（Taeniidae）棘球?qū)伲‥chinococcus）絳蟲(chóng)的中絳期幼蟲(chóng)（棘球蚴）寄生于動(dòng)物和人的肝臟、肺及其它器官而引起的人獸共患寄生蟲(chóng)病，其成蟲(chóng)寄生于犬、狐和狼等犬科動(dòng)物的小腸引起動(dòng)物棘球絳蟲(chóng)病并成為人和動(dòng)物棘球蚴病的主要疫源[1]。

本病呈世界性分布，主要流行于歐洲、非洲北部、亞洲、南美洲和大洋洲，在我國(guó)主要見(jiàn)于新疆、寧夏、青海、西藏、甘肅、四川阿壩和甘孜、云南迪慶、陜西北部和內(nèi)蒙古西部等地[2]。目前全世界報(bào)道棘球?qū)俳{蟲(chóng)有6種，在我國(guó)分布有3種，即細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)（E.granulosus）、多房棘球絳蟲(chóng)（E.multilocularis）和石渠棘球絳蟲(chóng)（E. shiquicus）[1]。其中，嚴(yán)重危害人和動(dòng)物具有公共衛(wèi)生及檢疫意義的蟲(chóng)種為：細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)和多房棘球絳蟲(chóng)[3]。

對(duì)棘球蚴病及棘球絳蟲(chóng)病的診斷與檢疫是防控本病的重要技術(shù)措施之一。目前報(bào)道棘球蚴病的診斷與檢疫方法有：以棘球蚴囊液抗原、原頭節(jié)抗原、分泌抗原以及重組抗原為基礎(chǔ)建立的免疫學(xué)診斷，以及X射線、超聲波、CT掃描和核磁共振等影象學(xué)方法；而動(dòng)物棘球絳蟲(chóng)病的診斷與檢疫方法有：蟲(chóng)體檢查法、糞抗原檢測(cè)法和糞源PCR法[1，4]。通?？刹捎寐?lián)合多種方法從而提高診斷與檢疫方法的敏感性和特異性。本文論述了各種方法的應(yīng)用及其優(yōu)缺點(diǎn)。

1 棘球蚴病的診斷及檢疫

1.1 免疫學(xué)方法

免疫學(xué)方法診斷棘球蚴病具有快速、敏感、特異、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于該病的診斷及檢疫中，輔以影象學(xué)診斷，可達(dá)到早期診斷的目的。天然抗原診斷具有高敏感性，但特異性不強(qiáng)。純化抗原的特異性較高，但敏感性卻有所降低[5]。

免疫學(xué)診斷在敏感性和特異性上存在缺陷，其運(yùn)用也受一定的限制。有人提出用ELISA結(jié)合免疫印跡技術(shù)或arc5測(cè)試（用包囊液抗原和棘球蚴病患者血清進(jìn)行免疫電泳試驗(yàn)，產(chǎn)生了一條沉淀線，將其稱為弧5）是提高診斷敏感性的最佳方式之一[4]。

1.1.1 皮內(nèi)試驗(yàn)（IDT）

皮內(nèi)試驗(yàn)（IDT）診斷包蟲(chóng)病操作簡(jiǎn)單，敏感性高且易于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用但此技術(shù)抗原標(biāo)準(zhǔn)化難度較大、特異性較差。假陽(yáng)性多見(jiàn)于癌癥、結(jié)核、腎病和蠕蟲(chóng)?。ㄓ绕涫歉鞣N絳蟲(chóng)病），且IDT可使部分患者發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)[6-7]。

1.1.2 間接血凝試驗(yàn)（IHA）

間接血凝試驗(yàn)（ IHA）診斷棘球蚴病其敏感性和特異性較為理想。該技術(shù)是以戊二醛醛化紅細(xì)胞，再經(jīng)鞣酸鞣化，用棘球蚴囊液抗原（SHF）致敏紅細(xì)胞后作IHA檢測(cè)，具有簡(jiǎn)便、快速、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)[8]。

間接血凝試驗(yàn)的改進(jìn)措施主要包括：制備凍干的致敏紅細(xì)胞和熱穩(wěn)定蛋白抗原，使其與新鮮血球具有相同的敏感性和特異性。制備包蟲(chóng)IHAT凍干抗原和包蟲(chóng)囊壁冰凍切片抗原，該抗原在-20℃可分別保存兩年和3個(gè)月。

1.1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA方法是用已知抗原或抗體，定性或定量測(cè)定特異性抗體（間接法）或抗原（夾心法），據(jù)顯色反應(yīng)的速率和強(qiáng)度判定結(jié)果。其優(yōu)點(diǎn)在于簡(jiǎn)便易行，不需要昂貴的儀器，敏感性高。

ELISA測(cè)定總IgG及各種抗體亞基可提高診斷特異性。有人用ELISA測(cè)定人IgG、IgG2、IgG3和IgG4對(duì)EgTPx（細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)抗原）的免疫反應(yīng)，101例確診的細(xì)粒棘球蚴病人中發(fā)現(xiàn)總IgG陽(yáng)性為83例（83%），IgG4陽(yáng)性為14例（14%），IgG2和IgG3均為陰性[9]。

因包囊寄生部位不同，ELISA方法的敏感性在36%～90%之間波動(dòng)，特異性在65%～96%之間波動(dòng)；該法檢測(cè)肝包蟲(chóng)病，其敏感性高于肺包蟲(chóng)病[2]。包囊大小不同其敏感性也有所變化，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PPV）在寄生包囊>15cm時(shí)其敏感性為69.7%，包囊<15cm時(shí)為78.7%[10]。

因檢測(cè)樣品來(lái)源不同，其檢測(cè)結(jié)果也有明顯的差異。有人采集包蟲(chóng)病人血清、唾液、尿液作ELISA檢測(cè)，結(jié)果顯示：血清、唾液、尿液的敏感性分別是72%，56%和84%，所有樣品的特異性都為76%，且尿檢與唾液檢測(cè)有顯著性差異[11]。

1.1.3.1 斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA）

應(yīng)用該方法在棘球蚴病診斷中，以硝酸纖維素膜代替聚丙乙烯板作為反應(yīng)載體，通過(guò)加樣抽濾使抗原均勻牢固地吸附于硝酸纖維膜上，簡(jiǎn)化包被抗原過(guò)程，縮短酶標(biāo)二抗與抗體抗原結(jié)合物反應(yīng)的時(shí)間。也可用白色聚乙烯（PVC）或聚偏二弗乙烯（PVDF）代替硝酸纖維膜，減少血清稀釋誤差，且洗滌方便、快速[12-13]。

1.1.3.2 間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

間接ELISA技術(shù)利用酶標(biāo)記的抗抗體與已與棘球蚴抗原結(jié)合的抗體具有很強(qiáng)的診斷價(jià)值。賈紅等利用純化的EG95重組蛋白建立間接ELISA，檢測(cè)采自新疆的70份羊包蟲(chóng)陽(yáng)性血清和70份陰性血清進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明該方法與新西蘭wallaceville動(dòng)物研究中心提供的間接ELISA方法符合率為100%，阻斷試驗(yàn)結(jié)果顯示與其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)，批內(nèi)變異系數(shù)介于3.8%～5.6%，批間變異系數(shù)介于5.7%～8.5%，結(jié)果表明該方法特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好[14]。

1.1.3.3 金黃色葡萄球菌A蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（SPA-ELISA）

金黃色葡萄球菌A蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（SPAELISA）以過(guò)氧化物酶標(biāo)記SPA取代酶標(biāo)第二抗體。并升高孵育溫度（41℃），縮短時(shí)間，以快速SPAELISA用以檢測(cè)101例包蟲(chóng)病人血清，驗(yàn)證陽(yáng)性率為85.15%，特異性為 100%[15]。

1.1.3.4 親和素-生物素-酶復(fù)合物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ABC-ELISA）

ABC- ELISA是利用親和素對(duì)生物的高度親和力，導(dǎo)入生物素的酶分子緊密結(jié)合，產(chǎn)生多級(jí)放大作用，提高診斷敏感性。該法比普通ELISA敏感性高出3～80倍，顯色更為清晰且能減少假陽(yáng)性率。有人將ABC-ELISA和常規(guī)ELISA法進(jìn)行了比較，證實(shí)ABC-ELISA法對(duì)那些抗體水平較低的包蟲(chóng)病人更具有診斷價(jià)值[15]。

1.1.4 酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)印跡法（EITB）

免疫印跡技術(shù)診斷棘球蚴病具有非常理想的診斷敏感性和特異性。包囊囊液抗原19，21和63 kDa亞基可用于免疫印跡診斷羊包蟲(chóng)病，其敏感性為97.6%，特異性在100%。而8 kDa亞基作免疫印跡診斷，其敏感性可高達(dá)97.6%，且適合于早期診斷[16]。

經(jīng)SDS–PAGE 分析，囊液抗原的特異性蛋白分子大小分別為29，45，58，68，98和116 kDa，免疫印記結(jié)果顯示116 kDa的囊液抗原為較佳的特異性診斷抗原，其特異性和敏感性分別為88%和84%，其交叉反應(yīng)僅發(fā)生于幾種棘球?qū)俳{蟲(chóng)和囊蟲(chóng)之間[17]。

1.1.5 免疫膠體金技術(shù)

膠體金作為標(biāo)記物具有操作簡(jiǎn)單，省事，無(wú)毒，無(wú)致癌性物質(zhì)，無(wú)需昂貴儀器等特點(diǎn)。固相金斑免疫試驗(yàn)（DIGFA）以微孔濾膜為固相載體，抗原抗體在膜上結(jié)合，滲濾濃縮促進(jìn)反應(yīng)，再以膠體金作為指示劑直觀顯色。郭志宏等利用快速診斷試劑盒對(duì)青海包蟲(chóng)病人進(jìn)行血清學(xué)診斷獲得良好效果[18]。馮曉輝等利用粗提的囊液抗原EgCF，純化的囊液抗原AgB，原頭蚴抗原EgP以及體壁抗原Em2都可作為診斷抗原建立固相金斑試劑盒，具有良好的特異性和敏感性[19]。

1.2 影像學(xué)診斷與檢疫

1.2.1 X射線

X放射儀很早就應(yīng)用于棘球蚴病的診斷上，通過(guò)胸透診斷肺和肝的病變時(shí)能夠看到橢圓而邊緣界限清晰、質(zhì)地均勻的完整包囊。

腹部X射線檢查時(shí)能夠檢查出肝包蟲(chóng)鈣化情況，鈣化現(xiàn)象往往出現(xiàn)在外囊并且呈現(xiàn)典型的弧形，而內(nèi)囊出現(xiàn)鈣化現(xiàn)象則顯示出斑影。X射線檢查肺棘球蚴病時(shí)，如果囊壁破裂則會(huì)出現(xiàn)以下現(xiàn)象：新月癥，雙弓現(xiàn)象與水上浮蓮現(xiàn)象[20]。

有人采用便攜式的X射線儀進(jìn)行大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)有5.5%的人患有包蟲(chóng)病其中肺臟包蟲(chóng)病的概率為1.1%。對(duì)于多房棘球蚴病的診斷很缺乏敏感性，因?yàn)樵诟腥驹缙谑呛懿蝗菀装l(fā)現(xiàn)[21]。

1.2.2 B超

B超與其他診斷發(fā)法相比具有無(wú)侵襲性、便宜的優(yōu)點(diǎn)，它能區(qū)分囊腫與實(shí)質(zhì)包塊，并能提示囊內(nèi)膜的存在。在臨床診斷及流行病學(xué)調(diào)查中具有較高的應(yīng)用價(jià)值[22]。世界衛(wèi)生組織（WHO）公布了各類(lèi)包蟲(chóng)病的超聲學(xué)分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)與該標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)比可得出該類(lèi)棘球蚴病的確診結(jié)果。有人提出應(yīng)用7.5兆赫的探頭，不但可加強(qiáng)囊壁的聲像顯示，而且使包囊之間、鈣化區(qū)、子囊和囊壁厚度等顯示更為清晰[23]。但超生診斷檢測(cè)羊肝棘球蚴病時(shí)敏感性較低，而羊肺棘球蚴病完全不能檢測(cè)[24]。

1.3 CT

1.2.3 CT技術(shù)密度分辨率高，斷面清晰，病變細(xì)節(jié)顯示良好，尤其克服了X平片等顯示不了的細(xì)小鈣化、液化等結(jié)構(gòu)，對(duì)定性診斷很有幫助。

在CT檢查肺小葉動(dòng)脈內(nèi)包囊時(shí)利用影象對(duì)比度而加強(qiáng)囊壁顯影，可對(duì)包囊精準(zhǔn)定位。在CT下囊壁的顯影加倍，血栓卻無(wú)變化，故包囊與血栓區(qū)分明顯[25]。

1.2.4 磁共振技術(shù)（MRI）

核共振技術(shù)（MRI）開(kāi)始應(yīng)用于泡狀包蟲(chóng)病的診斷，特別適用于沒(méi)有發(fā)生鈣化的棘球蚴病診斷。該技術(shù)能檢測(cè)出包蟲(chóng)寄生部位鄰近組織的詳細(xì)情況，為器官大面積切除和移植提供參考[26]。

2 棘球絳蟲(chóng)病的診斷與檢疫

2.1 沉淀及計(jì)數(shù)法（SCT）

在犬科動(dòng)物棘球絳蟲(chóng)病診斷中，沉淀和計(jì)數(shù)法（SCT）一直被認(rèn)為是最精準(zhǔn)的檢測(cè)手段。該技術(shù)要求剖開(kāi)犬類(lèi)動(dòng)物腸道，灌入生理鹽水進(jìn)行孵育，刮取腸粘膜，收集腸道中的蠕蟲(chóng)，在雙目顯微鏡下觀察腸粘膜沉淀并進(jìn)行蟲(chóng)體計(jì)數(shù)。該診斷手段敏感性高，但須以嚴(yán)格的防護(hù)措施為保障[27]。

2.2 檳榔堿誘瀉法

檳榔堿誘瀉法運(yùn)用于活體犬科動(dòng)物棘球絳蟲(chóng)病的診斷與檢疫。將犬科動(dòng)物灌服氫溴酸檳榔堿，30min～60min后通過(guò)檢測(cè)其排瀉物中的蟲(chóng)體而進(jìn)行棘球絳蟲(chóng)病的診斷。該技術(shù)在評(píng)估糞抗原和糞源DNA檢測(cè)試驗(yàn)中具有重要參考價(jià)值，其特異性高達(dá)100%且可用于定量研究。

然而，催瀉法在現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中具有高危性且氫溴酸檳榔堿對(duì)犬科動(dòng)物具有強(qiáng)烈的副作用。此外，該技術(shù)敏感性較低，運(yùn)用于診斷細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)病時(shí)為38%，診斷多房棘球絳蟲(chóng)病時(shí)為21%[27-28]。

2.3 糞抗原ELISA（Copro-ELISA）

帶科絳蟲(chóng)（Taenia spp.）成蟲(chóng)寄生于犬科動(dòng)物的腸道，僅通過(guò)糞樣檢查從蟲(chóng)卵形態(tài)學(xué)上對(duì)棘球絳蟲(chóng)病進(jìn)行診斷與檢疫十分困難。糞抗原ELISA（Copro-ELISA）用特定的抗體進(jìn)行包被，能夠敏感地檢測(cè)出棘球絳蟲(chóng)成蟲(chóng)體壁抗原以及其分泌物抗原的存在。有學(xué)者運(yùn)用糞抗原ELISA（Copro-ELISA）診斷細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)其特異性高達(dá)96%，通過(guò)氫溴酸檳榔堿誘瀉法驗(yàn)證其敏感性在77%～88%之間。同時(shí)，該學(xué)者將糞抗原ELISA法與其它方法進(jìn)行了比較分析顯示：糞抗原ELISA（Copro-ELISA）診斷棘球絳蟲(chóng)病其總體敏感性和特異性都高于沉淀及計(jì)數(shù)法（SCT）和檳榔堿傾瀉法[29-30]。

糞抗原ELISA（Copro-ELISA）在早期診斷野生犬科動(dòng)物自然感染棘球絳蟲(chóng)病中也具有很高的應(yīng)用價(jià)值。該技術(shù)可診斷出處于潛伏期的棘球絳蟲(chóng)，且ELISA診斷效果與寄生蟲(chóng)量有關(guān)。當(dāng)寄生的成蟲(chóng)體數(shù)量＞100時(shí)其敏感性好，而蟲(chóng)體數(shù)量較少時(shí)其敏感性也隨之降低[27]。

為提高診斷敏感性，將細(xì)粒棘球蚴原頭蚴分泌抗原免疫兔獲得兔抗原頭蚴IgG，將其純化后偶聯(lián)上生物素酶類(lèi)可檢測(cè)犬科動(dòng)物糞中的分泌性抗原[31-32]。此外，在提高糞糞抗原ELISA（Copro-ELISA）診斷特異性方面，也有多項(xiàng)技術(shù)出現(xiàn)。利用雜交瘤細(xì)胞接種SCID小鼠制備EmA9單克隆抗體，用于Sandwich-ELISA可診斷紅狐感染多房棘球絳蟲(chóng)病。也有人制備了兩種鼠抗細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)原頭蚴分泌抗原單克隆抗體（E.granulousus E/S IgM MAbs）分別命名為 EgC1和EgC2。將兩種單克隆抗體應(yīng)用于犬科動(dòng)物細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)病診斷，結(jié)果顯示該單克隆抗體在攻蟲(chóng)后35天和試驗(yàn)結(jié)束的55天都能發(fā)生良好反應(yīng)，且未出現(xiàn)假陽(yáng)性[33]。

該技術(shù)能同時(shí)應(yīng)用于尸體和活體檢疫，從而可全面診斷與檢疫棘球絳蟲(chóng)病，但由于與其他蠕蟲(chóng)抗原有交叉反應(yīng)，診斷結(jié)果與預(yù)期可能存在較大差異。

2.4 糞源PCR（Copro-DNA Test）

隨著分子生物學(xué)研究的深入，具有高特異性的PCR技術(shù)已經(jīng)運(yùn)用于診斷和檢測(cè)犬科動(dòng)物糞便和糞便中分離出來(lái)的蟲(chóng)卵。通過(guò)對(duì)樣品中分離出來(lái)的蟲(chóng)卵進(jìn)行PCR診斷，對(duì)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)病的診斷敏感性達(dá)到78%，多房棘球絳蟲(chóng)病的診斷敏感性為50%。該技術(shù)不僅能區(qū)分幾種形態(tài)學(xué)上相似的幾種帶科絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵，而且能確定蟲(chóng)卵量[34]。

2.4.1 糞樣中抽取DNA

糞源DNA診斷技術(shù)需要獲得足量且單一的樣品。用酚、氯仿等有機(jī)溶劑對(duì)糞樣進(jìn)行反復(fù)抽提，離心上柱，盡量除去樣品中的蛋白質(zhì)。也可通過(guò)將糞樣連續(xù)篩慮；或通過(guò)氯化鋅漂浮步驟，利用毛細(xì)管的虹吸原理獲得高純度蠕蟲(chóng)蟲(chóng)卵，減少PCR抑制物對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)的干擾。然而在紅狐與犬糞PCR反映的抑制效應(yīng)很少得到關(guān)注，故要求增加一個(gè)額外的孵化步驟以及一個(gè)洗脫DNA吸附的步驟[35-36]。

2.4.2 PCR

盡管從糞樣中分離蠕蟲(chóng)蟲(chóng)卵的方法已經(jīng)得到很大的改進(jìn)，很大程度上除去了PCR擴(kuò)增抑制物，但PCR擴(kuò)增之前應(yīng)有再純化步驟。依靠設(shè)立對(duì)照擴(kuò)增樣品，并且對(duì)于平行的每個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物都摻加示蹤物，減少交叉污染。在PCR擴(kuò)增緩沖液中加入牛血清蛋白（BSA）可提高擴(kuò)增效率[35]。

2.4.3 多房棘球絳蟲(chóng)（E. Multilocularis）

現(xiàn)今，U1 snRNA基因和線粒體12S基因應(yīng)用于犬科動(dòng)物腸道多房棘球絳蟲(chóng)病的PCR診斷，但U1 snRNA基因特異性引物還能擴(kuò)增出細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)（E.granulosus）馬株序列。通過(guò)巢式PCR擴(kuò)增線粒體12SrRNA部分基因能特異地把多房棘球絳蟲(chóng)（E.multilocularis）從細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)（E.granulousus）、狐 絳 蟲(chóng)（Taenia ceassiceps）、泡 狀 帶 絳 蟲(chóng)（Taenia hydatigena），馬堤絳蟲(chóng)（Taenia martis）、鼠絳蟲(chóng)（Taenia mustela）、羊帶絳蟲(chóng)（Taenia ovis）、豆?fàn)顜Ы{蟲(chóng)（Taenia pisiformis）、多刺絳蟲(chóng)（Taenia polyacantha）、鋸齒帶絳蟲(chóng)（Taenia serialis）、巨頸帶絳蟲(chóng)（Taenia taeniaformis）、中殖孔絳蟲(chóng)（Mesocestoides leptothylacus）以及幾種從狐貍上分離出來(lái)的帶科絳蟲(chóng)鑒別開(kāi)來(lái)。將其應(yīng)用于250只野生狐貍的絳蟲(chóng)病糞源DNA診斷，通過(guò)腸內(nèi)容物刮取術(shù)（ICS）驗(yàn)證，其特異性為100%[37]。

2.4.4 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)（E. Granulosus）

糞樣PCR診斷細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)病具有重要作用。據(jù)報(bào)該法檢測(cè)目標(biāo)重復(fù)序列（EgG1HaeIII），整個(gè)基因?yàn)?69 bp，目標(biāo)片段為133 bp敏感性高，一枚蟲(chóng)卵即可檢測(cè)。其電泳條帶亮度隨蟲(chóng)卵數(shù)增加而增加，但該片段是帶科絳蟲(chóng)中存在的高度保守序列，特異性較差[38-39]。

依據(jù)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)線粒體基因COI設(shè)計(jì)出了一對(duì)通用引物對(duì)兼并引物：上游引物：5'-GTAAATAA MACTATAAAAGAAAYMC-3'，下游引物 ：5'-TCATA TTGTTTGAGKATYAGTKC-3'。應(yīng)用于細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)6種蟲(chóng)株和少節(jié)棘球絳蟲(chóng)（E.oligarthrus）以及福氏棘球絳蟲(chóng)（E.vogelia）的鑒別診斷。但該技術(shù)還沒(méi)有在糞便和環(huán)境材料診斷及檢疫上得到有效確認(rèn)[40]。

在犬科動(dòng)物棘球絳蟲(chóng)病診斷中，糞源PCR技術(shù)耗材耗時(shí)，一般不作為常規(guī)診斷與檢疫手段。絳蟲(chóng)卵不規(guī)則脫落，故定量PCR技術(shù)也僅局限于檢測(cè)一些來(lái)自少數(shù)動(dòng)物的單個(gè)糞樣。進(jìn)行糞源PCR診斷時(shí)抽取DNA量與蟲(chóng)體腸道寄生的階段（一般指從感染原頭蚴后到排孕卵節(jié)片之前）有關(guān)，所以該技術(shù)作早期診斷效果不佳。

2.5 棘球絳蟲(chóng)病的血清學(xué)診斷

用ELISA對(duì)犬腸道寄生的細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)和狐貍腸道寄生的多房棘球絳蟲(chóng)診斷表明：診斷敏感性和特異性以及早期感染缺乏有效的特異性抗體都是本技術(shù)運(yùn)用的障礙[41]。犬既是棘球絳蟲(chóng)的中間宿主，也是其終末宿主，血清學(xué)診斷聯(lián)合糞抗原診斷或糞源DNA檢測(cè)能夠準(zhǔn)確地反應(yīng)犬棘球絳蟲(chóng)病感染情況[42]。

3 結(jié)語(yǔ)

建立系統(tǒng)高效的診斷與檢疫手段對(duì)防控棘球蚴病與棘球絳蟲(chóng)病具有重要意義。診斷與檢疫方法研究與疫苗研發(fā)相互促進(jìn)，將推動(dòng)包蟲(chóng)病防治工程的發(fā)展。

棘球蚴病與棘球絳蟲(chóng)病的診斷與檢疫方法存在的問(wèn)題在于：缺少具有標(biāo)準(zhǔn)意義的診斷方法及抗原制備法。目前，動(dòng)物棘球蚴病與棘球絳蟲(chóng)病的診斷與檢疫最終可通過(guò)尸體剖解法進(jìn)行確診，而人棘球蚴病以免疫學(xué)診斷方法輔以影像學(xué)檢查可達(dá)到較為理想的診斷效果。

今后尚需解決的問(wèn)題是：尋找更多具有較高免疫學(xué)診斷價(jià)值的天然抗原與重組抗原；通過(guò)改變反應(yīng)載體或者反應(yīng)放大技術(shù)提高診斷與檢疫效率；棘球蚴線粒體基因篩選以促進(jìn)棘球絳蟲(chóng)糞源分子生物學(xué)診斷的發(fā)展。

[1]Moro P，Schantz P M. Echinococcosis：a review[J]. Int J of Infec Dis，2009，13（2）：125-133.

[2]彭毛. 玉樹(shù)縣放牧羊棘球蚴病感染情況調(diào)查[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2009，26（12）：43.

[3]Wang Z H，Wang X M，Liu X Q. Echinococcosis in China，a Review of the Epidemiology of Echinococcus spp[J].Ecohealth，2008，5（2）：115-126.

[4]Carmena D，Benito A，Eraso E. Antigens for the immunodiagnosis of Echinococcus granulosus infection： an update[J]. Acta trop，2006，98（1）：74-86.

[5]Eckert J，Deplazes P. Biological， epidemiological， and clinical aspects of echinococcosis， a zoonosis of increasing concern[J]. Clin Microbiol Rev，2004，17（1）：107-135.

[6]馮麗萍. 肝包蟲(chóng)病的超聲聲像圖特征及其診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志，2009（1）：69-71.

[7]朱勇，柳建發(fā). 棘球蚴病的免疫學(xué)診斷研究進(jìn)展[J]. 地方病通報(bào)，2007，22（5）：116-118.

[8]Ghorbanpoor M，Razi Jalali M，Hoghooghi Rad N， et al.Detection of specif i c hydatid antigens and antibodies in serum and urine of experimentally infected sheep[J]. Vet parasitol，2006，142（1/2）：91-94.

[9]Margutti P，Ortona E，Delunardo F，et al. Thioredoxin peroxidase from Echinococcus granulosus：a candidate to extend the antigenic panel for the immunodiagnosis of human cystic echinococcosis[J]. Diagn Microbiol Infect Dis， 2008，60（3）：279-285.

[10]Manterola C，Cuadra，Mu oz S，et al. In a diagnostic test study the validity of three serodiagnostic test was compared in patients with liver echinococcosis[J]. J Clin Epidemiol，2005，58（4）：401-406.

[11]Sunita T，Dubey M，Khurana S，et al. Specific antibody detection in serum，urine and saliva samples for the diagnosis of cystic echinococcosis[J]，Acta trop，2007，101（3）：187-191.

[12]陳興旺，李調(diào)英， 楊筠，等. Dot-ELISA試劑盒在快速診斷包蟲(chóng)病中的應(yīng)用[J]. 寄生蟲(chóng)病與感染性疾病，2005，3（2）：77-78.

[13]Siavashi M R，Taherkhani H，Rezaei K， et al. Comparison of dot-ELISA and sandwich ELISA diagnostic tests in detection of human hydatidosis[J]. Iran Biomed J，2005，9（2）：91-94.

[14]賈紅，劉丹，侯紹華，等. 羊細(xì)粒棘球蚴病抗體間接 ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，42（1）：65-70.

[15]張岐蜀，姜國(guó)華，胡小元，等. 棘球蚴病免疫診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)獸藥雜志，2007，41（6）：26-28.

[16]安曉雪，余華，嚴(yán)玉寶，等. 細(xì)粒棘球蚴病診斷抗原研究進(jìn)展 [J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展， 2010，31（4）：85-89.

[17]Simsek S，Koroglu E. Evaluation of enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）and enzyme-linked immunoelectrotransfer blot（EITB）for immunodiagnosis of hydatid diseases in sheep[J]. Acta trop，2004，92（1）：17-24.

[18]郭志宏，彭毛，李永壽，等. 青海省部分地區(qū)人包蟲(chóng)病的流行調(diào)查[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2008，25（5）：32-33.

[19]Feng X，Wen H，Zhang Z，et al. Dot immunogold fi ltration assay （DIGFA）with multiple native antigens for rapid serodiagnosis of human cystic and alveolar echinococcosis[J].Acta trop，2010，113（2）：114-120.

[20]Khanfar N. Hydatid disease：a review and update[J]. Current Anaesthesia & Critical Care，2004，15（3）：173-183.

[21]Gavidia C M，Gonzalez A E，Zhang W，et al. Diagnosis of cystic echinococcosis，central Peruvian Highlands[J]. Emerg Infect Dis，2008，14（2）：260-266.

[22]李艷芳，李德壽. 海晏地區(qū)棘球蚴病流行情況調(diào)查[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2010，27（5）：38-38.

[23]Mohapatra M，Sahoo P，Pattnaik S， et al. Imaging of rupture cardiac hydatid cyst located on the interventricular septum with pulmonary embolism， a case report[J]. Indian J of Radiol Imaging， 2003，13（2）：203-205.

[24]Lahmar S，Chehida F B，Ptavy A， et al. Ultrasonographic screening for cystic echinococcosis in sheep in Tunisia[J]. Vet parasitol， 2007，143（1）：42-49.

[25]周東海，周海霞，雷軍強(qiáng)， 等. MRI 對(duì)肝包蟲(chóng)病的診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)影像雜志，2006， 17（7）： 381-384.

[26]Dursun M，Terzibasioglu E，Yilmaz R，et al. Cardiac hydatid disease ：CT and MRI findings[J]. A J Roentgenol，2008，190（1）：226-232.

[27]Torgerson P，Deplazes P. Echinococcosis： diagnosis and diagnostic interpretation in population studies[J]. Trends parasitol， 2009， 25（4）： 164-170.

[28]陳潔. 犬感染細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的診斷研究進(jìn)展及展望[J]. 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2011， 34（3）： 251-253.

[29]Allan J，Craig P，Garcia Noval J， et al. Coproantigen detection for immunodiagnosis of echinococcosis and taeniasis in dogs and humans[J]. Parasitology， 1992， 104（2）： 347-355.

[30]Allan J，Craig P. Coproantigens in taeniasis and echinococcosis[J]. Parasitol Int，2006，55（S）：75-80.

[31]Benito A，Carmena D. Double-antibody sandwich ELISA using biotinylated antibodies for the detection of Echinococcus granulosus coproantigens in dogs[J]. Act trop， 2005， 95（1）：9-15.

[32]黃燕，David H D，Antone J， 等. 犬糞便棘球絳蟲(chóng)抗原的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)法建立與應(yīng)用[J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2008，24（6）：407-411.

[33]Casaravilla C，Malgor R，Rossi A， et al. Production and characterization of monoclonal antibodies against excretory/secretory products of adult Echinococcus granulosus， and their application to coproantigen detection[J]. Parasitol Int，2005， 54（1）：43-49.

[34]Ziadinov I，Mathis A，Trachsel D，et al. Canine echinococcosis in Kyrgyzstan： epidemiology and transmission analysis incorportaing diagnostic uncertainty[J]. Int J for parasitol，2008，38 ：1179-1190.

[35]溫浩，張亞樓，Mathieu Bsrt J，等. 犬體內(nèi)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)和多房棘球絳蟲(chóng)的混合感染[J]. 中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志，2006，24（1）：10-13.

[36]Boufana B，Campos-Ponce M，Naidich A， et al.Evaluation of three PCR assays for the identif i cation of the sheep strain （genotype 1） of Echinococcus granulosus in canid feces and parasite tissues[J]. The American journal of tropical medicine and hygiene，2008，78（5）：777-783.

[37]Dinkel A，von Nickisch-Rosenegk M，Bilger B， et al.Detection of Echinococcus multilocularis in the def i nitive host：coprodiagnosis by PCR as an alternative to necropsy[J]. J Clin Microbiol，1998，36（7）：1871-1876.

[38]Abbasi I，Branzburg A，Campos-Ponce M， et al. Coprodiagnosis of Echinococcus granulosus infection in dogs by amplif i cation of a newly identif i ed repeated DNA sequence[J]. Am J of Trop Med Hyg，2003，69（3）：324-330.

[39]張亞樓， 溫浩，馬旭東，等. PCR方法診斷家犬感染細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的特異性及在臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 中國(guó)地方病學(xué)雜志， 2006，25（5）：565-567.

[40]Cabrera M，Canova S，Rosenzvit M， et al. Identification of Echinococcus granulosus eggs[J]. Diagn Microbiol Infect Dis，2002，44（1）：29-34.

[41]Staebler S，Grimm F，Glaus T， et al. Serological diagnosis of canine alveolar echinococcosis[J]. Vet parasitol，2006，141（3/4）：243-250.

[42]Benito A，Carmena D，Joseph L，et al. Dog echinococcosis in northern Spain： comparison of coproantigen and serum antibody assays with coprological exam[J]. Vet parasitol，2006，142（1/2）：102-111.