松花粉藥理作用及臨床應(yīng)用研究概況

賴桂萍 楊繼紅 詹小濤

松花粉(Pine pollen)，中藥名松花、松黃，是松屬植物的單性花，泛指馬尾松、油松、赤松、黑松和云南松等松屬植物的雄性配子體，是我國(guó)傳統(tǒng)食藥兼用的花粉品種［1］。最早記載始見于2400年前的漢·《神農(nóng)本草》，將“松黃”列為上品［2］。唐·《新修本草》、宋·《本草衍義》、明·《本草綱目》、清·《本草從新》等中均有記載，歸納為：性味甘平，無毒。功能主治：潤(rùn)心肺，益氣，除風(fēng)止血，治心腹寒熱邪氣，治痢，利小便，消瘀血，治產(chǎn)后壯熱、頭痛、郟索、口干唇焦、多煩躁渴、昏悶不爽;外用善治諸痘瘡傷損并濕爛不痂等;久服輕身益力氣，延年［3］。而松花餅、松花糕、松花酒等一些傳統(tǒng)美食，迄今仍以松花粉為主要原料。松花粉是祖國(guó)醫(yī)學(xué)古籍中收載的僅有的兩種花粉之一，中華人民共和國(guó)1985年版藥典收錄松花粉為傳統(tǒng)藥物，1997年衛(wèi)生部確認(rèn)松花粉為新資源品種，列為普通食品管理［4］。

1 松花粉的有效成分

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，松花粉成分豐富，含有多種蛋白質(zhì)、游離氨基酸(含18種必需氨基酸)、視黃醇、單糖、多糖、維生素、磷脂、葡萄糖氧化酶、核酸、葉酸、脂肪酸、黃酮、生物活性酶、甾醇、微量元素等成分，總量達(dá)200多種［5-8］。其黃酮類化合物成分，主要為黃酮和黃酮醇類，其次是二氫黃酮醇類。另外還有少量黃烷醇類的花青素［9］。以紅外光譜、掃描電鏡和X射線能譜儀分析發(fā)現(xiàn)其含 Mg，Se，Si，Sr，P，S，C1，K，Ca，Mn，F(xiàn)e共11種無機(jī)元素，其中K元素含量最高。此外，破壁馬尾松花粉的元素能譜強(qiáng)度顯著高于天然馬尾松［10］。近期研究在馬尾松花粉中除β2谷甾醇外，還首次發(fā)現(xiàn)了單硬脂酸甘油酯、1-正十六烷酸甘油酯、對(duì)羥基苯甲醛、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、3，3'，5，5'，7-五羥基二氫黃酮醇、雙氫山柰素、對(duì)羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、山柰酚、丁二酸等10種化合物［11］。在蘇格蘭松的花粉中還發(fā)現(xiàn)睪酮、表睪酮和雄甾烯二酮［12］。

2 松花粉的功效

2.1 免疫調(diào)節(jié)及疫苗佐劑作用 喂服破壁松花粉可提高小鼠血清溶血素抗體水平、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力、小鼠抗體生成和小鼠NK細(xì)胞活性及ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化［13］，使小鼠免疫器官的重量增加及網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力增強(qiáng)［14］，一個(gè)以油松花粉進(jìn)行的研究結(jié)果顯示松花粉的種類有可能形成這一作用的細(xì)致差異［15］。此外，實(shí)驗(yàn)還觀察到，破壁松花粉可減輕二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響［13］。在弗氏完全佐劑(含分枝桿菌的水油乳佐劑)和牛Ⅱ型膠原纖維誘發(fā)的小鼠關(guān)節(jié)炎中，松花粉提取物可使炎性細(xì)胞因子的生成顯著減少，表現(xiàn)出明顯的抗炎癥作用，這一作用與松花粉的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制有關(guān)［12］。松花粉的免疫調(diào)節(jié)作用與劑量相關(guān)。而對(duì)破壁與不破壁松花粉的藥理活性是否相同，尚有爭(zhēng)議。但在對(duì)小鼠血清溶血素生成及對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響上，未發(fā)現(xiàn)破壁與不破壁松花粉對(duì)免疫功能作用的明顯差別，不破壁松花粉可直接應(yīng)用［16］。

從松花粉中提取的松花粉多糖，能提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的抗體水平、血液淋巴細(xì)胞比率、脾臟淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率以及小腸IgA含量，200 mg/kg)劑量的效果即非常顯著，400 mg/kg)劑量能使環(huán)磷酰胺(CTX)誘導(dǎo)的免疫抑制完全恢復(fù)到正常水平［17］。

破壁松花粉作為飼料添加劑，能夠增強(qiáng)雛雞的體液免疫和細(xì)胞免疫水平，而達(dá)到抵抗新城疫病毒的目的。破壁松花粉作為新城疫疫苗佐劑接種易感兔，與普通組織滅活苗接種后的情況比較：組織滅活苗免疫后第10天效價(jià)為2.75 log2，20 d抗體水平達(dá)到6.25 log2，30 d為5.25 log2，已開始有所下降;而松花粉佐劑疫苗免疫后作用快，第10天效價(jià)為3.05 log2，20 d抗體水平已達(dá)7 log2，30 d抗體水平高達(dá)6.75 log2。由此可見，松花粉佐劑疫苗吸收快、產(chǎn)生效價(jià)高且作用持久，明顯優(yōu)于普通組織滅活苗［18］。

2.2 調(diào)節(jié)血脂血糖及銅鋅代謝 研究觀察到喂服添加3.5%松花粉飼料后不僅非常顯著地增加了家豬糞便中甘油三酯、膽固醇及脂肪酸的排泄量，同時(shí)也促進(jìn)了膽酸的排泄。在大鼠的實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)飼料中添加松花粉后可以使大鼠體重得到生理性的控制［19］。在弗氏完全佐劑和牛Ⅱ型膠原纖維誘發(fā)的小鼠關(guān)節(jié)炎中，100 mg/kg)劑量的松花粉提取物治療顯示出明顯的降低低密度脂蛋白-膽固醇、蛋白羰基(protein carbonyl)、后期糖化終產(chǎn)物(advanced glycation endproducts)、脫氫丙二酰(malondialdehyde)和升高高密度脂蛋白-膽固醇的效果［12］。四氧嘧啶致糖尿病的小鼠灌服30 d破壁松花粉后觀測(cè)到，較高劑量(1.5 g/kg)的破壁松花粉能明顯降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠的2 h時(shí)相血糖含量及血糖曲線下面積，提示高劑量破壁松花粉具有增強(qiáng)四氧嘧啶致糖尿病小鼠的糖耐量作用，破壁松花粉有降低血糖的功能。這與歷代本草記載松花粉可治療口干唇焦、多煩躁渴等消渴癥狀相吻合［20］。

此外，在正常生長(zhǎng)雄性鼠、缺鋅幼鼠和前列腺增生大鼠中，還發(fā)現(xiàn)松花粉對(duì)銅、鋅代謝及其分布有調(diào)節(jié)作用［14，21-24］。

2.3 抑制前列腺增生 有研究通過對(duì)前列腺指數(shù)和病理學(xué)觀測(cè)以及對(duì)血清生化學(xué)、抗氧化指標(biāo)、銅鋅含量、激素水平等的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，松花粉能夠明顯改善丙酸睪酮所致大鼠前列腺的病理損傷，對(duì)實(shí)驗(yàn)性前列腺增生具有明顯抑制作用，機(jī)制可能是松花粉不僅能夠通過降低雌激素和雄激素，調(diào)節(jié)微量元素的代謝和過氧化物歧化酶 (SOD)活性而抑制前列腺增生，而且還能通過非激素途徑在細(xì)胞水平發(fā)揮選擇性的抑制作用［14，23-24］。

2.4 抗衰老、抗氧化、抗疲勞、抗炎癥 抗衰老一直是人類渴望攻克的難題。衰老研究成為西方科學(xué)研究的熱點(diǎn)始于上世紀(jì)末，迄今己形成了關(guān)于衰老機(jī)制的各種假說，如端粒假說、DNA氧化損傷假說、自由基假說等，為抗衰老的相關(guān)研究提供了理論依據(jù)和研究方法［25］。

鮑善芬等用四個(gè)體外摸擬人類疾病過程如缺血再灌注、體內(nèi)炎性反應(yīng)等中的生化反應(yīng)系統(tǒng)對(duì)馬尾松花粉的抗炎和抗氧化性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，松花粉對(duì)這些反應(yīng)系統(tǒng)所產(chǎn)生的過氧化氫、超氧自由基、羥自由基和次氯酸等活性氧系具有較好的清除作用，以濃度依賴關(guān)系抑制反應(yīng)的發(fā)生并發(fā)揮抗氧化作用，對(duì)涉及炎癥反應(yīng)的髓過氧化學(xué)物酶(MPO)活性較好的抑制作用［25］。在后期的一個(gè)研究中，他們用銅誘導(dǎo)的LDL氧化反應(yīng)模型和Rose Bengal反應(yīng)模型分別對(duì)松花粉和松針提取物在親脂性體外模型中的抗氧化能力及其機(jī)制進(jìn)行研究。結(jié)果表明，松花粉乙醇提取液具有較好的自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)阻斷劑的作用，能有效地推遲人血漿中低密度脂蛋白(LDL)氧化生成共軛二烯。松針乙醇提取液對(duì)LDL的保護(hù)作用優(yōu)于松花粉。在Rose Bengal系統(tǒng)中，松花粉以清除自由基和螯合銅的兩種機(jī)制抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生，而松針主要作為自由基清除劑發(fā)揮抗氧化作用。即松花粉和松針在兩個(gè)親脂性體外模型中均發(fā)揮很好的抗氧化能力，而抗氧化機(jī)制不盡相同［26］。

幾個(gè)研究以D-半乳糖連續(xù)腹腔注射制作亞急性衰老大鼠模型，采用生物化學(xué)方法檢測(cè)了相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果顯示，D-半乳糖所致亞急性衰老大鼠模型組超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)活力、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-PX)活力和總抗氧化能力(T-AOC)均明顯下降，丙二醛(Maleic Dialdehyde，MDA)含量明顯上升。經(jīng)松花粉給藥后，衰老小鼠腦組織、血清MDA含量及腦、肝組織脂褐質(zhì)(Lf)含量明顯降低，SOD、過氧化氫酶(CAT)、GSH-PX活性及T-AOC均有顯著提高;松花粉中、低劑量給藥可明顯增加衰老大鼠體重，并改善大鼠毛色及活動(dòng);松花粉還可提高D-半乳糖所致亞急性衰老大鼠精子的數(shù)量、活動(dòng)度和存活率。上述作用，松花粉的效果好于維生素E。故認(rèn)為松花粉可顯著提高亞急性衰老大鼠抗氧自由基的能力，提高精子的數(shù)量、活動(dòng)度和存活率，具有延緩衰老的作用［27-30］。此外，松花粉也可能通過明顯改善D-半乳糖衰老模型小鼠T細(xì)胞亞群的變化，顯著增高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬指數(shù)和吞噬活性，增強(qiáng)衰老鼠的免疫功能而延長(zhǎng)老齡鼠的生存時(shí)間［28］。

鐘馨等以在國(guó)際上普遍認(rèn)可的自然衰老小鼠和自然衰老人胚肺二倍體細(xì)胞作為動(dòng)物和細(xì)胞衰老的研究模型，從器官、組織、細(xì)胞、分子和基因等多個(gè)水平著手，選取形態(tài)學(xué)、自由基、端粒酶、線粒體為衰老研究指標(biāo)，系統(tǒng)地研究了松花粉的抗衰老效果及其分子機(jī)制。已完成的實(shí)驗(yàn)，證實(shí)松花粉具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制自由基表達(dá)、提高端粒酶活性和降低線粒體mtDNr977突變率等作用，從抑制衰老誘發(fā)因素的負(fù)效應(yīng)、促進(jìn)細(xì)胞增殖等方面驗(yàn)證了松花粉的抗衰老效果。后期又從松花粉對(duì)兩條衰老相關(guān)的內(nèi)在基因調(diào)控途徑，即p53-p21-pRb和p16-pRb途徑中p16及p21基因表達(dá)的影響進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)：①松花粉具有促DNA增殖，改善G1期阻滯(Glcycleaxrest)的作用。②在年輕細(xì)胞中p16INK4A與P2lcIP-1的mRNA均維持較低的表達(dá)。而在衰老細(xì)胞中，p16INK4^mRNA表達(dá)量出現(xiàn)顯著上升，并在松花粉處理后出現(xiàn)顯著的下降，且下降程度與劑量具有相關(guān)性。P2lcIP-1mRNA表達(dá)量在衰老細(xì)胞中也出現(xiàn)顯著上升，但松花粉處理組與衰老模型組中其表達(dá)無顯著性差異。說明松花粉對(duì)P2lcIP-1mRNA表達(dá)無影響，但顯著抑制了p16INK4mRNA的表達(dá)，并通過p16-cyclinD-cDK4/6-RB通路延緩了細(xì)胞衰老的啟動(dòng)和衰老進(jìn)程，這可能是松花粉抗細(xì)胞復(fù)制性衰老的主要分子［31］。

相關(guān)研究顯示，松花粉能顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，降低運(yùn)動(dòng)后小鼠血乳酸含量和血清尿素氮含量，且運(yùn)動(dòng)后肝糖原含量高于對(duì)照組，證實(shí)松花粉具有抗疲勞作用［32］。

松花粉及其提取物還有明顯的抗炎癥作用和減低痛敏感性，該作用與松花粉及其提取物抵制前炎性介質(zhì)的產(chǎn)生有關(guān)，尤其是那些與脂氧化酶和環(huán)氧合酶通路相關(guān)者［12，33-34］。

2.5 抗腫瘤 Lipovova等用從黑松花粉提取的核酸酶與牛精液核糖核酸酶比較研究體內(nèi)外抗腫瘤活性。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，黑松花粉核酸酶在體外的抗腫瘤作用與牛精液核糖核酸酶相比下是微不足道的。然而，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果則大為相異，在這種核酸酶和動(dòng)物核糖核酸酶及脫氧核糖核酸酶1治療的小鼠中，觀察到人黑素瘤的體積顯著縮小。然而，在使用10次更高劑量后，用松花粉核酸酶給予荷瘤裸鼠，其腫瘤體積縮小46%，而用牛精液核糖核酸酶治療的腫瘤生長(zhǎng)僅稍有縮小。而且，與牛精液核糖核酸酶相比，黑松花粉核酸酶的免疫源性明顯地更弱，抗黑松核酸酶抗體在體內(nèi)不引起生物學(xué)效應(yīng)。表明黑松核酸酶與動(dòng)物牛精液核糖核酸酶相比，在體內(nèi)對(duì)裸鼠生長(zhǎng)中的人黑素瘤有更高抗腫瘤活性［35］。

另一研究以馬尾松花粉多糖和硫酸酯化的馬尾松花粉多糖處理人肝癌細(xì)胞株HepG2。經(jīng)馬尾松花粉多糖硫酸酯處理后，HepG2細(xì)胞的增殖受到抑制，細(xì)胞形態(tài)趨于正常。與對(duì)照組相比，馬尾松花粉多糖硫酸酯組G0/G1期細(xì)胞數(shù)增加，S期細(xì)胞數(shù)減少，G2/M細(xì)胞數(shù)減少;［Ca2+］I降低;甲胎蛋白表達(dá)降低，白蛋白分泌量上升，γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶與堿性磷酸酶活力降低，胎盤型堿性磷酸酶的比例降低。而馬尾松花粉多糖處理組細(xì)胞沒有明顯變化。因此認(rèn)為，硫酸酯化賦予了馬尾松花粉多糖抑制HepG2細(xì)胞的活性，其作用機(jī)理可能是降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn)其惡性［36］。

2.6 護(hù)肝、調(diào)節(jié)慢性應(yīng)激性腸道微生態(tài)紊亂、對(duì)抗砷中毒等

在酒精及四氯化碳引起的肝損傷模型鼠中，觀察到服用一定量松花粉或松花粉總黃酮能降低肝損傷小鼠肝組織丙二醛(MDA)、甘油三脂(TG)含量，提高肝組織還原型谷光甘肽(GSH)含量和SOD的活性，抑制肝損傷所致的ALT和AST的升高，減輕肝組織脂肪變性和壞死程度。表明松花粉和松花粉總黃酮能對(duì)抗酒精及四氯化碳引起的肝損傷，具有有效的護(hù)肝作用，抗氧化是其主要機(jī)制之一［2，37，38］。

在大鼠飼料中添加功能性低聚糖水蘇糖可以改善模擬失重大鼠腸道菌群失調(diào)狀態(tài)，白樹民等在大鼠慢性應(yīng)激動(dòng)物模型的研究中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，進(jìn)食含5%松花粉飼料能夠有效地防護(hù)慢性應(yīng)激導(dǎo)致的腸道微生態(tài)失調(diào)，且其作用優(yōu)于功能單一的低聚糖［39］。

此外，松花粉還能降低砷中毒大鼠血砷含量，提高血清GSH-PX活性，降低砷中毒后小鼠肝腎的損傷程度，抵抗砷中毒死亡，且具有一定防治皮膚潰爛等病損的作用［40-41］和提高砷中毒鼠的T淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性而提高機(jī)體免疫力［42］。更早期的研究還發(fā)現(xiàn)松花粉對(duì)血小板激活因子的有顯著抑制作用［33］。

3 松花粉的毒副作用研究

經(jīng)毒理研究，破壁松花粉可通過急性毒性、微核試驗(yàn)、精子畸形試驗(yàn)和30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)［43］，安全無毒，與古醫(yī)籍記載相吻合。而其可能的過敏反應(yīng)在松樹開花季節(jié)只發(fā)生在過敏人群的3.5%［44］。

4 松花粉的臨床應(yīng)用

松花粉被用作抗疲勞、延緩衰老、調(diào)節(jié)胃腸功能、護(hù)肝、益心肺等的滋養(yǎng)藥物已2000余年，也用于治療前列腺疾病和貧血、糖尿病、高血壓、氣喘、鼻炎等多種疾?。?4］。但目前松花粉的臨床應(yīng)用研究報(bào)道尚不多見，僅見于高血脂［45］、高血壓［46］、前列腺疾病［47-49］及外用于水痘、壓瘡等皮損［50-52］治療的研究中。在這些研究中，松花粉呈現(xiàn)出極有潛力的治療效果，尤其是在無毒副作用及綜合治療效應(yīng)上更具得天獨(dú)厚的優(yōu)異性。

我國(guó)松屬植物資源豐富，其中數(shù)量較多的有產(chǎn)于東北長(zhǎng)白山和小興安嶺的紅松，主產(chǎn)于華北的油松，產(chǎn)于西南的云南松，分布在長(zhǎng)江流域以南且數(shù)量最多的馬尾松，以及產(chǎn)于陜西、河南、甘肅、四川等地的華山松，此外，還有從國(guó)外引進(jìn)的黑松等［53］。與類似具有廣泛作用的冬蟲夏草［54-55］相比，確有成本低廉、周而復(fù)生、取之不盡的優(yōu)勢(shì)。但不同種類的松花粉，其成分及含量也有區(qū)別，有必要對(duì)不同種屬松花粉進(jìn)行成分及含量的進(jìn)一步比較研究，以利于在開發(fā)應(yīng)用松花粉時(shí)，能根據(jù)松花粉的品種量材施用。

關(guān)于松花粉藥理藥效的前期報(bào)道多為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或體外實(shí)驗(yàn)中的作用研究，在臨床治療、保健及至預(yù)防的應(yīng)用研究目前尚不多見，有待在各相關(guān)領(lǐng)域廣泛開拓。此外，松花粉還含有多種酶和多種脂類，這方面的研究也尚待深入。

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