蔡 勇，阿依木古麗，臧榮鑫，馬忠仁，喬自林，盧建雄，楊具田，吳建平

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州 730070;2.西北民族大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，蘭州 730030;3.西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，蘭州 730030)

羅格列酮和血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響

蔡 勇1，2，阿依木古麗3，臧榮鑫3，馬忠仁3，喬自林3，盧建雄3，楊具田3，吳建平1

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州 730070;2.西北民族大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，蘭州 730030;3.西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，蘭州 730030)

目的 探討羅格列酮(rosiglitazone，Ros)和血清脂(serum lipid，Lip)對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響及不同組織來(lái)源的前體脂肪細(xì)胞分化影響的差異。方法 用不同濃度的Ros和(或)Lip培養(yǎng)綿羊皮下前體脂肪細(xì)胞和腎周前體脂肪細(xì)胞，通過(guò)測(cè)量3-磷酸甘油脫氫酶(GPDH)活性和油紅O染色萃取液A值分析前體脂肪細(xì)胞的分化程度和脂肪細(xì)胞充脂量的變化，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PPARγ和LPL mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 Ros和Lip提高細(xì)胞GPDH活性和脂滴的沉積量(P＜0.05)，上調(diào) LPL mRNA表達(dá)(P＜0.05)，最佳濃度分別為100 nmol/L和20 μL/mL;最佳濃度條件下Ros的誘導(dǎo)作用強(qiáng)于 Lip(P＜0.05)，Ros顯著提高了 PPARγ mRNA表達(dá)量(P＜0.05)，而Lip對(duì)PPARγ mRNA的表達(dá)沒(méi)有明顯影響(P＞0.05);Ros和 Lip共同誘導(dǎo)與 Ros單獨(dú)作用之間沒(méi)有明顯差異(P＞0.05);在相同誘導(dǎo)分化條件下，皮下前體脂肪細(xì)胞的分化程度高于腎周前體脂肪細(xì)胞(P＜0.05)。結(jié)論 研究結(jié)果表明Ros和Lip可促進(jìn)綿羊前體脂肪細(xì)胞的分化，在相同條件下，皮下前體脂肪細(xì)胞的分化能力強(qiáng)于腎周前體脂肪細(xì)胞。

綿羊;前體脂肪細(xì)胞;細(xì)胞分化;羅格列酮;血清脂

脂肪組織不僅具有儲(chǔ)能功能，而且具有重要的內(nèi)分泌功能，其代謝失?？梢鸶视腿バ罘e過(guò)多，導(dǎo)致多種肥胖相關(guān)疾病的發(fā)生［1］;家畜皮下脂肪、內(nèi)臟脂肪沉積過(guò)度和肌內(nèi)脂肪缺乏嚴(yán)重影響胴體肉品質(zhì)［2］，增加飼養(yǎng)成本。因此，認(rèn)識(shí)脂肪形成的規(guī)律和機(jī)制，調(diào)控體脂沉積，改善動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量在畜牧業(yè)生產(chǎn)中具有重要意義。

脂肪組織的生長(zhǎng)包括脂肪細(xì)胞數(shù)目增加和體積增大兩個(gè)方面，主要是前體脂肪細(xì)胞在一系列轉(zhuǎn)錄因子、基因和酶的作用下，由成纖維樣前體脂肪細(xì)胞分化為充滿脂滴的成熟脂肪細(xì)胞的結(jié)果［3］。包括綿羊和牛在內(nèi)的多種動(dòng)物的前體脂肪細(xì)胞實(shí)現(xiàn)了體外培養(yǎng)并具有增殖和分化能力［4-5］。和其他動(dòng)物一樣，胰島素、地塞米松和PPARγ激動(dòng)劑等多種誘導(dǎo)劑能促進(jìn)綿羊前體脂肪細(xì)胞的分化［5］。Wu等［6］研究發(fā)現(xiàn)在PPARγ激動(dòng)劑的誘導(dǎo)下，牛大網(wǎng)膜前體脂肪細(xì)胞的分化能力比皮下前體脂肪細(xì)胞強(qiáng)，所以，不同組織來(lái)源的綿羊前體脂肪細(xì)胞的分化能力可能存在一定的差異。蘭州大尾羊(Lanzhou fat-tailed sheep)屬于中國(guó)綿羊四大品種中的長(zhǎng)脂尾型，以尾大、脂肪充實(shí)著稱，是研究脂肪局部沉積的理想動(dòng)物模型。本研究以115日齡的蘭州大尾羊胎兒為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)體外培養(yǎng)皮下和腎周前體脂肪細(xì)胞，探討羅格列酮和血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響以及不同脂肪組織來(lái)源的前體脂肪細(xì)胞在體外分化能力的差異，為進(jìn)一步研究反芻動(dòng)物脂肪沉積以及動(dòng)物脂肪局部沉積的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：臨床檢查無(wú)異常的2～3歲蘭州大尾羊母羊，懷孕115d后頸動(dòng)脈放血致死，胎兒連同子宮1h內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 主要試劑：DMEM/F12、M199(Gibco)，I型膠原酶、牛胰島素、三碘甲狀腺原氨酸 (triiodothyronine，T3) 、Oil red-O(Sigma)，胎牛血清(民海生物)，TRIzol總 RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、TaqDNA聚合酶(Invitrogen公司)，SYBR Premix Ex Taq(TaKaRa)，DNA marker、RNase-free 水 (Tiangen)，Ex-cyte(牛血清脂，是從牛血清中分離的一種水溶性脂蛋白細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑，是脂肪酸、膽固醇、磷脂等成分的混合物，Millipore Corp.)，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 綿羊前體脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)：無(wú)菌條件下分別取胎羊腎周脂肪組織和尾部皮下脂肪組織各約3 g，用PBS緩沖液沖洗3次，剪去脂肪組織中可見(jiàn)的血管和其他結(jié)締組織，并將脂肪組織剪成1 mm3左右的小塊，轉(zhuǎn)移至含有玻璃珠的25 mL三角燒瓶中，加入1 mg/mL的Ⅰ型膠原酶消化液，置于37℃水浴中消化50 min(每5 min振蕩1次)，200目鋼篩過(guò)濾，濾液1000 r/min離心5 min棄上清，加入紅細(xì)胞裂解液，懸浮沉淀，室溫靜置10 min，1000 r/min離心5 min，棄上清液，用PBS洗2次，1000 r/min離心5 min，棄上清液，加入含 20% 胎牛血清、2 mmol/L醋酸鈉和2 mmol/L L-谷氨酸的 M199培養(yǎng)液并吹打均勻，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，按5×104個(gè)/mL的密度接種于24孔培養(yǎng)板中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后換液，每2 d換液1次。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)處理：當(dāng)原代細(xì)胞培養(yǎng)至匯合后(約8～9d)，分別用基礎(chǔ)分化培養(yǎng)液(DMEM/F12培養(yǎng)液中添加2 nmol/L T3、300 nmol/L的胰島素)添加不同濃度的羅格列酮和血清脂進(jìn)行誘導(dǎo)分化，誘導(dǎo)分化4 d和8 d時(shí)測(cè)定細(xì)胞的GPDH活性和脂肪含量。

1.2.3 3-磷酸甘油脫氫酶(GPDH)活性測(cè)定：用0.25%胰蛋白酶消化收集細(xì)胞，細(xì)胞重懸在25 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.5，含 1 mmol/L EDTA)中，-80℃凍存24 h后超聲波破碎細(xì)胞，在4℃下12 000 r/min離心 30 min，上清液 -80℃保存。利用紫外分光光度計(jì)，通過(guò)測(cè)定NADH消耗速率來(lái)衡量GPDH活性，反應(yīng)溶液包括100 mmol/L三乙醇胺-HCl緩沖液(pH 7.5)、2.5 mmol/L EDTA、0.1 mmol/L 巰基乙醇、0.4 mmol/L NADH、4 mmol/L磷酸二氫丙酮。測(cè)定A340nm值，每個(gè)活性單位相當(dāng)于每分鐘每毫克蛋白氧化1 nmol NADH，結(jié)果以nmol NADH/min/mg蛋白表示。

1.2.4 油紅O染色提取法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量：細(xì)胞內(nèi)脂肪含量的測(cè)定參考 Ramirez等［7］使用的方法，通過(guò)測(cè)量萃取液A510nm值衡量細(xì)胞內(nèi)的脂肪含量。

1.2.5 引物設(shè)計(jì)與合成：根據(jù) GenBank中登錄的綿羊脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase，LPL，X68308)、過(guò)氧化物體增殖劑活化受體γ(peroxisome proliferator activiated receptor γ，PPARγ，AY137204)和 β-肌動(dòng)蛋白(β-actin，NM_001009784)基因序列，用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，由上海生工生物工程有限公司合成，詳情見(jiàn)表1。以β-actin作內(nèi)參檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志基因的表達(dá)情況。

表1 引物序列與Real-time PCR反應(yīng)參數(shù)Tab.1 Primer sequences and real-time PCR amplification parameters

1.2.6 Real-time PCR：提取細(xì)胞總 mRNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，反應(yīng)體系為25 μL體系，其中含有：SYBR Premax Tag 12.5 μL(已將 DNA 聚合酶、反應(yīng)用 Buffer、dNTP、SYBR?GreenⅠ等試劑預(yù)混在一起，是一種2×濃度的Premix Type 試劑)、上下游引物各 0.25 μL、cDNA樣品 2 μL、水補(bǔ)足至 25 μL;反應(yīng)程序?yàn)椋?5.0℃ 預(yù)變性 10.0 s;95.0℃ 變性 5.0 s、54.0℃ 退火、72.0℃延伸25.0 s，40個(gè)循環(huán)(SLAN熒光定量 PCR儀，Hongshi)。每個(gè)循環(huán)的退火及延伸階段采集熒光信號(hào)數(shù)據(jù)。擴(kuò)增結(jié)束后立即進(jìn)行溶解曲線分析，從60℃開(kāi)始每30.0 s升高1.0℃，直到94.0℃結(jié)束，共35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)待溫度恒定后5.0 s采集熒光信號(hào)數(shù)據(jù)，系統(tǒng)自動(dòng)分析數(shù)據(jù)后生成溶解曲線報(bào)告。反應(yīng)結(jié)束后系統(tǒng)根據(jù)梯度稀釋模板的擴(kuò)增情況自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用 ΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析［8］。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理：所有實(shí)驗(yàn)均設(shè)置5次重復(fù)，實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s，)表示，采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件中的One-way ANOVA進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 羅格列酮對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響

與對(duì)照組相比，不同濃度羅格列酮均能顯著促進(jìn)細(xì)胞GPDH活性的提高(P＜0.05)，當(dāng)濃度為100 nmol/L時(shí)，腎周前體脂肪細(xì)胞和皮下前體脂肪細(xì)胞的GPDH活性均達(dá)到最大值;腎周前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化4 d時(shí)，100 nmol/L和1000 nmol/L羅格列酮之間的差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，但兩者均強(qiáng)于1 nmol/L組和10 nmol/L組(P＜0.05);皮下前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化4 d時(shí)，1000與10、100 nmol/L之間的差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，但均強(qiáng)于1nmol/L組(P＜0.05);誘導(dǎo)分化8 d時(shí)，不同濃度羅格列酮對(duì)腎周前體脂肪細(xì)胞GPDH活性的影響存在明顯差異(P＜0.05)，但對(duì)皮下前體脂肪細(xì)胞10 nnmol/L與1000 nnmol/L之間差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。在羅格列酮的誘導(dǎo)下，皮下前體脂肪細(xì)胞的分化強(qiáng)于腎周前體脂肪細(xì)胞(P＜0.05)(圖1)。

不同濃度的羅格列酮對(duì)脂肪沉積的影響見(jiàn)表2，與對(duì)照組相比，不同濃度的羅格列酮均增強(qiáng)了細(xì)胞中脂肪的沉積量(P＜0.05)。當(dāng)濃度為100 nnmol/L培養(yǎng)8 d后，細(xì)胞中脂肪的沉積量達(dá)到最大值，其對(duì)腎周前體脂肪細(xì)胞的作用與1000 nnmol/L之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)，兩者均顯著高于其他各濃度組(P＜0.05);但對(duì)皮下前體脂肪細(xì)胞的作用除與10 nnmol/L組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)外，均顯著高于其他各濃度組(P＜0.05)。在羅格列酮的誘導(dǎo)下，皮下前體脂肪細(xì)胞的脂肪沉積量大于腎周前體脂肪細(xì)胞(P＜0.05)。

圖1 不同濃度羅格列酮對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化中GPDH活性的影響(A：腎周脂肪;B：皮下脂肪)Fig.1 Changes in GPDH activity of(A)perirenal and(B)subcutaneous preadipocytes from fetal ovine during differentiation induced by rosiglitazone at different concentrations.Different letters indicate significant difference(P＜0.05)，the same below.

表2 羅格列酮和血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響(s，n=5)Tab.2Effects of rosiglitazone and serum lipid on differentiation of the preadipocytes.(s，n=5)

表2 羅格列酮和血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響(s，n=5)Tab.2Effects of rosiglitazone and serum lipid on differentiation of the preadipocytes.(s，n=5)

注：結(jié)果為油紅O染色提取法的A510nm值，以(s)，表示。標(biāo)有不同字母者表示差異顯著(P＜0.05)，標(biāo)有相同字母者表示差異不顯著(P＞0.05)。Note：The results are expressed in absorbance at 510 nm using oil red O staining(s).Values that share different superscripts are of significant difference(P＜0.05).

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圖2 不同濃度牛血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化中GPDH活性的影響Fig.2 Effects of of bovine serum lipid at different concentrations on GPDH activity of fetal ovine subcutaneous and perirenal preadipocytes

2.2 血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響

不同濃度牛血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化中GDPH活性的影響如圖2所示，基礎(chǔ)分化培養(yǎng)液中添加不同濃度的牛血清脂培養(yǎng)8 d均能不同程度的增強(qiáng)細(xì)胞中GDPH的活性(P＜0.05)，在血清脂的作用下，腎周前體脂肪細(xì)胞分化作用明顯弱于皮下前體脂肪細(xì)胞(P＜0.05)，這和羅格列酮的作用相似，但無(wú)論是對(duì)腎周前體脂肪細(xì)胞還是對(duì)皮下前體脂肪細(xì)胞，當(dāng)血清脂的濃度為20 μL/mL時(shí)，細(xì)胞的GDPH活性最高，顯著高于5、40 μL/mL和空白對(duì)照組(P＜0.05)，但與10 μL/mL組的差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。

不同濃度的血清脂對(duì)脂肪沉積的影響如表2所示，與對(duì)照組相比，不同濃度的血清脂均增大了細(xì)胞中脂肪的沉積量(P＜0.05)。對(duì)皮下前體脂肪細(xì)胞10 μL/mL組與20 μL/mL組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)，均強(qiáng)于其他各濃度組(P＜0.05);對(duì)腎周前體脂肪細(xì)胞在 4 d時(shí)，10 μL/mL與 20 μL/mL之間無(wú)差異(P＞0.05)，并且均強(qiáng)于其他各濃度組(P＜0.05);到8 d時(shí)，20 μL/mL的作用明顯強(qiáng)于其他各濃度組(P＜0.05)。在血清脂的誘導(dǎo)下，皮下前體脂肪細(xì)胞的脂肪沉積量大于腎周前體脂肪細(xì)胞(P＜0.05)。

2.3 羅格列酮和血清脂共同對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化的影響

羅格列酮和(或)牛血清脂誘導(dǎo)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化8 d，結(jié)果如圖3所示，對(duì)腎周前體脂肪細(xì)胞羅格列酮和血清脂共同誘導(dǎo)與羅格列酮單獨(dú)誘導(dǎo)時(shí)沒(méi)有明顯差異(P＞0.05);而對(duì)皮下前體脂肪細(xì)胞，羅格列酮和血清脂共同誘導(dǎo)不如羅格列酮單獨(dú)誘導(dǎo)時(shí)效果明顯，兩者同時(shí)添加反而降低了細(xì)胞GPDH活性(P＜0.05)。羅格列酮和血清脂同時(shí)作用時(shí)細(xì)胞脂肪的沉積量明顯大于它們各自單獨(dú)作用的細(xì)胞脂肪的沉積量(P＜0.05)。

圖3 羅格列酮和牛血清脂對(duì)綿羊前體脂肪細(xì)胞分化中GPDH活性的影響Fig.3 Effects of rosiglitazone and lipid on GPDH activity of fetal lamb subcutaneous and perirenal preadipocytes

2.4 羅格列酮和血清脂對(duì)LPL和PPARγ mRNA表達(dá)水平的影響

羅格列酮和(或)血清脂誘導(dǎo)培養(yǎng)8 d時(shí) LPL和PPARγ基因mRNA表達(dá)結(jié)果如圖4所示，與對(duì)照組相比，羅格列酮能促進(jìn)PPARγ基因的表達(dá)(P＜0.05)，血清脂對(duì) PPARγ基因表達(dá)沒(méi)有明顯的影響(P＞0.05)，但兩者均能促進(jìn) LPL的表達(dá)(P＜0.05)。

圖4 羅格列酮和牛血清脂對(duì)LPL和PPARγ表達(dá)的影響Fig.4 Effects of rosiglitazone and lipid on the mRNA expression of LPL and PPARγ

3 討論

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor，PPAR)是調(diào)節(jié)目標(biāo)基因表達(dá)的核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子超家族成員，能被脂肪酸樣化合物過(guò)氧化物酶體增殖劑(peroxisome proliferators，PP)激活，PPAR分為α、β和γ三種類型，其中PPARγ主要表達(dá)于脂肪組織及免疫系統(tǒng)，與脂肪細(xì)胞分化、機(jī)體免疫及胰島素抵抗關(guān)系密切，是胰島素增敏劑唾哇烷二酮類藥物(troglitazone，TZDs)作用的靶分子。羅格列酮屬于唾哇烷二酮類抗糖尿病藥物，能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性從而起到降糖作用，是 PPARγ 強(qiáng)大激動(dòng)劑［9］，對(duì)體外培養(yǎng)牛［4］的前體脂肪細(xì)胞的分化具有促進(jìn)作用;Grant［10］研究發(fā)現(xiàn)20～60 μmol/L的曲格列酮(另一種唾哇烷二酮類藥物)能提高體外培養(yǎng)的牛前體脂肪細(xì)胞GPDH活性5倍。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羅格列酮濃度在100 nmol/L以內(nèi)時(shí)它以劑量依賴方式促進(jìn)綿羊前體脂肪細(xì)胞的分化，低濃度的羅格列酮以配體的形式與PPARγ形成異二聚體后結(jié)合到脂肪合成基因啟動(dòng)子的PPAR應(yīng)答元件上，促進(jìn)細(xì)胞的分化和脂肪的形成［11-12］。但1000 nmol/L的高濃度羅格列酮對(duì)前體脂肪細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用減弱，其原因可能是高濃度的羅格列酮對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了細(xì)胞毒性，減弱了細(xì)胞的分化。

血清脂中含有膽固醇、甘油三酯、磷脂和豐富的游離脂肪酸，脂肪酸對(duì)生物體內(nèi)脂肪酸的合成和分解起獨(dú)特的調(diào)控作用［13］，研究發(fā)現(xiàn)，血清脂和亞油酸能促進(jìn)牛前體脂肪細(xì)胞的分化和脂肪的形成［5，14］，花生四烯酸具有增強(qiáng) Ob 1771 細(xì)胞系分化能力的作用［15］。脂肪酸尤其是長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸可能一方面作為三酰甘油脂和磷脂酯化反應(yīng)的底物促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞分化，另一方面它們通過(guò)原型［16］或(和)如前列腺素［15］等類二十烷酸代謝產(chǎn)物作為配體與PPAR結(jié)合后，再與視黃酸類受體(RXR)形成異二聚體，然后與所調(diào)節(jié)基因啟動(dòng)子上游的過(guò)氧化物酶體增殖物反應(yīng)元件(PPRE)結(jié)合而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，從而促進(jìn)細(xì)胞分化［16-17］。

鼠和人的前體脂肪細(xì)胞分化研究中發(fā)現(xiàn)，在相同的誘導(dǎo)分化條件下，來(lái)自不同脂肪組織的前體脂肪細(xì)胞的分化能力具有很大的差異，鼠不同組織來(lái)源的前體脂肪細(xì)胞分化差異的研究主要集中在附睪和腎周脂肪組織［18-19］，然而對(duì)皮下前體脂肪細(xì)胞分化的研究結(jié)果存在很大的差異，它們或好于［20］，或差于［21］附睪前體脂肪細(xì)胞，存在很大的種間差異，可能是由于不同物種不同組織產(chǎn)生PPARγ天然配體的能力不同所致，但真正的原因還不清楚。本文研究發(fā)現(xiàn)，在添加了T3、胰島素、羅格列酮和(或)血清脂的DMEM/F12培養(yǎng)液中，蘭州大尾羊胎羊皮下前體脂肪細(xì)胞的分化能力強(qiáng)于腎周前體脂肪細(xì)胞，這與蘭州大尾羊?qū)匍L(zhǎng)脂尾型、尾部具有很強(qiáng)的脂肪沉積能力的個(gè)體發(fā)育特征相一致，為進(jìn)一步研究脂肪局部沉積的分子機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Ros和Lip均促進(jìn)綿羊前體脂肪細(xì)胞的分化;最佳誘導(dǎo)濃度下，Ros的誘導(dǎo)作用強(qiáng)于Lip;在相同誘導(dǎo)條件下，綿羊皮下前體脂肪細(xì)胞的分化能力強(qiáng)于腎周前體脂肪細(xì)胞。

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Effects of rosiglitazone and serum lipid on differentiation of ovine preadipocytes

CAI Yong1，2，Ayimuguli3，ZANG Rong-xin3，MA Zhong-ren3，QIAO Zi-lin3，LU Jian-xiong3，YANG Ju-tian3，WU Jian-ping1
(1.Animal Science and Technology，Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，China;2.Science Experimental Center;3.College of Life Science and Engineering;Northwest University for Nationalities，Lanzhou 730030，China)

Objective To investigate the effects of rosiglitazone(Ros)and serum lipid(Lip)on differentiation of ovine subcutaneous and perirenal preadipocytes，and explore the differences in their differentiation in vitro.Method The preadipocytes from fetal lamb subcutaneous and perirenal tissues were cultured，and treated with Ros and(or)Lip at different concentrations.The cell differentiation was assessed by changes in activity of the GPDH and quantitation of oil red O staining.PPARγ and LPL mRNA were analyzed by real-time PCR after different inducing treatments.Results Ros and Lip enhanced GPDH activity and increased lipogenesis of preadipocytes，up-regulated mRNA expression of LPL in comparison with the controls(P＜0.05).The optimal inducing concentrations of Ros and Lip for preadipocytes differentiation were 100 nmol/L and 20 μL/mL，respectively.With the optimal inducing concentration，Ros showed more effective on preadipocytes differentiation(P＜0.05)，and significantly up-regulated mRNA expression of PPARγ(P＜0.05)，while Lip hadno significant effect on PPARγ(P＞0.05).It showed no significant difference between the effects of single Ros and the combination of Ros and Lip.Preadipocytes from perirenal differentiated less well than that from subcutaneous tissue when exposed to the same differentiation-inducing media(P＜0.05).Conclusions The results of this study suggest that Ros and Lip induce differentiation of ovine preadipocytes in vitro.With the same inducing media，preadipocytes from perirenal differentiate less well than that from subcutaneous tissue.

Ovine;Preadipocyte;Differentiation;Ros;Lip Rosiglitazone;Serum lipid

Q95-33;Q493.5

A

1005-4847(2011)01-0006-06

10.3969/j.issn.1005-4847.2011.01.002

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(NO.30871811);國(guó)家民委科研項(xiàng)目(2009-158-09XB02);甘肅省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究與應(yīng)用開(kāi)發(fā)項(xiàng)目(GNSW-2009-13)。

蔡勇(1979-)，男，講師，在讀博士，主要從事生物化學(xué)和基因工程方面的教學(xué)、研究工作。E-mail：caiyong1979@163.com。

吳建平，教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：wujp@gsau.edu.cn

2010-07-01