人工冬蟲夏草不同部位氨基酸含量的測定

陸艷艷，邱細(xì)敏*，黃思玉，肖 依，王檢兵，陳 成

(湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410006)

人工冬蟲夏草不同部位氨基酸含量的測定

陸艷艷，邱細(xì)敏*，黃思玉，肖 依，王檢兵，陳 成

(湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410006)

目的：檢測人工冬蟲夏草不同部位中氨基酸的含量。方法：使用氨基酸分析儀，以茚三酮為衍生試劑，采用柱后衍生法測定人工蟲草不同部位中氨基酸含量。結(jié)果：在蛹蟲草的固體培養(yǎng)殘基、子實(shí)體、菌絲體中都至少含有17種常見氨基酸和8種必需氨基酸，總氨基酸含量分別為8.32%、21.68%和23.19%，必需氨基酸的含量分別為3.74%、8.11%和8.88%。結(jié)論：人工蟲草中不但子實(shí)體含有腺嘌呤、腺苷和蟲草素，菌絲體及固體培養(yǎng)殘基也含有這3種主要核苷類物質(zhì)，具有進(jìn)一步開發(fā)利用價(jià)值。

人工蟲草；子實(shí)體；菌絲體；固體培養(yǎng)殘基；氨基酸

冬蟲夏草是我國傳統(tǒng)名貴的滋補(bǔ)藥用植物。近年來，市場的需求量在不斷增加，由于生長要求的特殊性，野生蟲草已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足當(dāng)前需求。20世紀(jì)70年代以后，我國開始對冬蟲夏草進(jìn)行人工栽培及藥效的研究，取得顯著成果[1-2]。蟲草氨基酸是蟲草增強(qiáng)免疫和滋補(bǔ)強(qiáng)壯作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。目前，人工冬蟲夏草藥用部位主要采用子實(shí)體。本實(shí)驗(yàn)針對工業(yè)生產(chǎn)中的副產(chǎn)物菌絲體未能充分利用及固體培養(yǎng)殘基更是作為廢料處理的浪費(fèi)現(xiàn)象，以湖南益康高科技生物醫(yī)藥有限公司培養(yǎng)的人工冬蟲夏草為樣本，通過比較人工冬蟲夏草不同部位中氨基酸的含量差別，力圖為進(jìn)一步開發(fā)利用人工冬蟲夏草資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

人工冬蟲夏草 湖南益康高科技生物有限公司；Na型陽離子交換柱(4.6mm×60mm)。

氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液 日本日立公司；鹽酸(化學(xué)純)；醋酸鈉、醋酸、丙二醇、檸檬酸二鈉等(均為色譜純)。

AUY120電子分析天平 日本島津公司；L-8800全自動(dòng)氨基酸分析儀 日本日立公司。

1.2 方法

1.2.1 氨基酸分析儀色譜條件

色譜柱：Na型陽離子交換柱；流動(dòng)相：檸檬酸三鈉緩沖液；四元梯度洗脫：pH3.2～4.9；檢測波長：510nm；流速0.4mL/min；柱溫：50℃；柱的衍生條件(柱后衍生)：反應(yīng)液A：L-丙二醇甲醚、390g茚三酮；反應(yīng)液B：丙二醇甲醚-醋酸鈉、醋酸(40:60，V/V)；反應(yīng)溫度：135℃；流速：0.35mL/min[3-5]。

1.2.2 氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密吸取1.00mL混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液，用超純水稀釋到50mL，作為上機(jī)測定用的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)，用氨基酸自動(dòng)分析儀以外標(biāo)法測定樣品溶液中氨基酸的含量[6-7]。在此條件下，18種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品可達(dá)到良好的分離[8]，見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC分析圖Fig.1 HPLC chromatograms of mixed amino acid standard solution and Pro standard

1.2.3 人工冬蟲夏草氨基酸的提取

取人工冬蟲夏草粉碎的固體培養(yǎng)殘基、子實(shí)體、菌絲體分別在40℃干燥30min，分別精密稱取0.5g、置于25mL安瓿瓶中，加入現(xiàn)配的6mol/L鹽酸各5mL，即刻封口，放于(110±1)℃烘箱中恒溫水解24h，冷卻后，再用超純水定容至500mL[9-11]，微孔濾膜過濾，作為供試品溶液，進(jìn)樣20μL。在氨基酸分析儀上按色譜條件進(jìn)行測定。

2 結(jié)果與分析

圖2 人工冬蟲夏草的氨基酸HPLC分析圖Fig.2 HPLC chromatograms of total amino acids and Pro from the residual solid left after the culture of Cordyceps sinensis and its fruit bodies and mycelia

表1 人工冬蟲夏草不同部分的氨基酸含量比較Table 1 Comparison of amino acids in different parts of cultured Cordyceps sinensis%

由圖2和表1可知，在人工冬蟲夏草固體培養(yǎng)殘基，子實(shí)體和菌絲體中都含有17種常見氨基酸，并且都包含8種人體必需氨基酸。其中谷氨酸和脯氨酸的含量較高，固體培養(yǎng)殘基、子實(shí)體和菌絲體中谷氨酸含量分別為1.25%、3.01%、3.61%。固體培養(yǎng)殘基、子實(shí)體和菌絲體的總氨基酸含量別為8.32%、21.68%和23.19%。采用 SPSS軟件對各不同部位蟲草氨基酸含量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，固體培養(yǎng)殘基與菌絲體、子實(shí)體氨基酸比較，存在顯著性差異(P＜0.01)，即子實(shí)體和菌絲體氨基酸顯著高于固體培養(yǎng)殘基，菌絲體和子實(shí)體氨基酸含量(P＞0.05)差異不顯著。

3 討 論

谷氨酸(Glu)有較高的營養(yǎng)價(jià)值，它能解除代謝過程中氨的毒害作用，具有保肝護(hù)肝作用，且能改進(jìn)維持大腦機(jī)能，對于治療神經(jīng)損傷、癲癇均有一定療效。脯氨酸(Pro)在穩(wěn)定生物大分子結(jié)構(gòu)、解除氨毒等方面起重要作用，且能堅(jiān)固牙齒、治療神經(jīng)組織退化等疾病[15]。因此人工冬蟲夏草可能在治療這些疾病方面有更明顯的效果，這一推測有待于進(jìn)一步論證。

由實(shí)驗(yàn)可知，人工冬蟲夏草的子實(shí)體、菌絲體、固體培養(yǎng)殘基中都提取出了較大比例的氨基酸，子實(shí)體總氨基酸含量與文獻(xiàn)報(bào)道[12-16]相當(dāng)。菌絲體中氨基酸含量最高，達(dá)到23.19%，必需氨基酸含量也達(dá)到8.88%，與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道(野生蟲草中總氨基酸含量為20.00%～21.53%，必需氨基酸占5.24%～8.45%)比較[2,17-18]，含量略高。固體培養(yǎng)殘基中總氨基酸含量為8.32%，必需氨基酸含量達(dá)到3.74%。目前市場上，人工冬蟲夏草菌絲體沒有被充分利用[19]，而固體培養(yǎng)殘基更是作為廢料撂棄，占97%的固體培養(yǎng)殘基被直接排放掉，不僅造成環(huán)境污染而且浪費(fèi)蟲草資源。本實(shí)驗(yàn)研究旨在為進(jìn)一步開發(fā)利用人工冬蟲夏草資源提供有價(jià)值的參考。

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Determination of Amino Acid Profiles in Different Parts of Cultured Cordyceps sinensis

LU Yan-yan，QIU Xi-min*，HUANG Si-yu，XIAO Yi，WANG Jian-bing，CHEN Cheng
(College of Medical, Hunan Normal University, Changsha 410006, China)

The amino acid profiles of different parts of cultured Cordyceps sinensis were determined using amino acid analyzer in combination with post-column derivatization with ninhydrin. At least, 17 common amino acids and 8 essential amino acids were found in the residual solid left after the culture of Cordyceps sinensis and its fruit bodies and mycelia, respectively, which contained 8.32%, 21.68% and 23.19% total amino acid contents and 3.74%, 8.11% and 8.88% essential amino acid contents, respectively.Furthermore, not only the fruit bodies and mycelia of cultured Cordyceps sinensis but also the residual solid left contained adenine,adenosine and cordycepin. All of them are therefore potential candidates for further exploitation and utilization.

cultured Cordyceps sinensis；fruit body；mycelium；residual solid；amino acid

R914.1

A

1002-6630(2011)08-0259-03

2010-05-27

湖南省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(10A071)；國家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目(043-0094)

陸艷艷(1985—)，女，碩士，主要從事中草藥分離分析研究。E-mail：weixiaopast99@126.com

*通信作者：邱細(xì)敏(1954—)，女，教授，主要從事中草藥成分分析測定方法研究。E-mail：qiuximin@tom.com