粱曉嵐,李云耀,何桂霞*,鄒 茜,劉赫男
(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥現(xiàn)代化省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 長(zhǎng)沙 410208)
藤茶中二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物制備工藝研究
粱曉嵐,李云耀,何桂霞*,鄒 茜,劉赫男
(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥現(xiàn)代化省教育廳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖南 長(zhǎng)沙 410208)
目的 研究二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合的最佳工藝。方法 運(yùn)用紫外分光光度計(jì),采用正交實(shí)驗(yàn)法,以包合溫度、包合時(shí)間、β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的比例為考察因素,以二氫楊梅素包合率為指標(biāo),優(yōu)選包合的最佳工藝。結(jié)果 β-環(huán)糊精包合二氫楊梅素的最佳制備工藝為:包合溫度為70℃ ,包合時(shí)間為60min,β-環(huán)糊精與二氫楊梅素為1∶2.5。結(jié)論 優(yōu)選的β-環(huán)糊精包合工藝簡(jiǎn)單,方便實(shí)用。
藤茶;二氫楊梅素;β-環(huán)糊精包合物;制備工藝;正交實(shí)驗(yàn);紫外分光光度計(jì)
二氫楊梅素(Dihydromyricetin,簡(jiǎn)稱DMY)為葡萄科蛇葡萄屬植物藤茶Ampelopsis grossedentala(Hand—Mazz)W.T.Wang中主要化學(xué)成分, 且含量高達(dá)20%多[1-2]。藥理研究表明,二氫楊梅素能對(duì)抗去腎上腺素和高K+所致的兔胸主動(dòng)脈條的收縮反應(yīng)及顯著擴(kuò)血管和鈣阻滯作用,具有消炎、抑菌、止咳、鎮(zhèn)痛、消脂及抗脂質(zhì)過氧化等功效[3-4]。因二氫楊梅素在藤茶中含量高及較明顯的藥用價(jià)值成為近年研究的熱點(diǎn)。由于二氫楊梅素常溫下水溶解性差,生物利用度低,且有多酚羥基結(jié)構(gòu),對(duì)光線、溶液的pH值及鐵、鋁等金屬離子敏感,易氧化變質(zhì),使其應(yīng)用受到較大限制[5]。為改善其物理特性,更好地發(fā)揮其功效,采用β-環(huán)糊精(β-CD)包合技術(shù)[6-7],將二氫楊梅素制成包合物;利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)影響包合率的諸多因素進(jìn)行考察,從而篩選優(yōu)化得到最佳的包合工藝?,F(xiàn)將方法及結(jié)果報(bào)道如下。
K-2501紫外分光檢測(cè)器(北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))有限責(zé)任公司);FA2104萬(wàn)分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠);KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)。二氫楊梅素(DMY)對(duì)照品為自制,1H-NMR光譜分析鑒定結(jié)構(gòu),高效液相歸一化方法檢測(cè),含量在99.0%以上;β-環(huán)糊精 (中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?;瘜W(xué)試劑公司);所用化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。
2.1.1 二氫楊梅素對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制 精密稱取真空70℃干燥至恒重的二氫楊梅素對(duì)照品11.5mg,95%乙醇溶解并定容至25 mL,備用。
2.1.2 吸收波長(zhǎng)選擇 分別將二氫楊梅素、β-環(huán)糊精及二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的95%乙醇溶液在190~400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描,二氫楊梅素溶液在290 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰,二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物與二氫楊梅素的最大吸收波長(zhǎng)一致,而β-環(huán)糊精在此無(wú)吸收,故選擇290 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取二氫楊梅素對(duì)照品儲(chǔ) 備 液 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL, 分 別置50 mL量瓶中,加95%乙醇定容至刻度,搖勻,于290 nm下測(cè)定吸光度,以濃度C為橫坐標(biāo),吸收度A為縱坐標(biāo),得回歸方程
2.1.4 精密度試驗(yàn) 按線性范圍分別配制高、中、低3種濃度的二氫楊梅素乙醇溶液,以95%乙醇為空白,于290 nm處分別1 d內(nèi)測(cè)定5次和5 d內(nèi)測(cè)定5次,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算濃度。結(jié)果日內(nèi)精密度RSD為0.42%,日間精密度RDS為0.78%。
2.1.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物2mg,精密稱定,共9份分成3組,置50 mL容量瓶中加95%乙醇溶解并定容,再量取該溶液1 mL置于10 mL容量瓶中,分別加入0.1、0.2、0.4 mL 二氫楊梅素對(duì)照品儲(chǔ)備液,按“2.1.3”項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度,求加樣回收率。平均回收率為97.86%,RSD 為 1.597%(n=9)。
2.1.6 樣品測(cè)定 取二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物2mg,精密稱定,用95%乙醇定容至250 mL,超聲使之溶解,在290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,按下式計(jì)算出二氫楊梅素包合率:
2.2.1 因素及水平 經(jīng)初步試驗(yàn),選擇β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的比例(A)、包合溫度(B)、包合時(shí)間(C)為考察因素,利用L9(34)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。包合工藝因素水平見表1。
表1 因素水平表
2.2.2 β-環(huán)糊精包合物制備工藝 精密稱取一定量β-環(huán)糊精,加入純化水,超聲使成飽和溶液。另精密稱取一定量二氫楊梅素,用95%乙醇溶解,超聲下將其緩緩滴入β-環(huán)糊精飽和溶液中,超聲處理一定時(shí)間,放冷至室溫,然后放入冰箱中冷藏12 h,抽濾,固體物先用乙醇洗滌,再用純化水洗滌,抽干,于60℃真空干燥10 h,得二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物,稱質(zhì)量。以二氫楊梅素包合率為評(píng)價(jià)指標(biāo),篩選最佳工藝條件。
2.2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果 二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合工藝條件篩選的正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。影響包合的因素排列順序?yàn)锳>C>B,最佳因素水平為A2B2C3,即最佳包合工藝條件為β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的分子比為1∶2.5、包合溫度為60℃、包合時(shí)間為90min,含藥量為32.24%。方差分析表明,β-環(huán)糊精與二氫楊梅素的分子比對(duì),實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響,而包合時(shí)間和包合溫度對(duì)包合率影響不顯著。見表3。
表2 包合工藝正交試驗(yàn)結(jié)果
表3 以包合率為指標(biāo)的方差分析
2.3.1 薄層色譜法 將二氫楊梅素對(duì)照品乙醇溶液、二氫楊梅素對(duì)照品乙醚溶液、二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醇溶液、二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醚溶液點(diǎn)于同一硅膠G板上,置展開劑甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶8∶5)中展開,將層析板取出晾干,噴 3%三氯化鐵乙醇溶液顯色,結(jié)果前3個(gè)樣品均在Rf值0.6處出現(xiàn)相同的紫色斑點(diǎn),而二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醚溶液樣品色譜中未出現(xiàn)與前三者相同的斑點(diǎn),說明二氫楊梅素被β-環(huán)糊精包合。
2.3.2 紫外光譜法 將二氫楊梅素及二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物乙醇溶液在200~400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描,結(jié)果,二氫楊梅素和二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的吸收?qǐng)D譜完全一致,說明包合前后二氫楊梅素未發(fā)生化學(xué)變化,而是通過物理包合作用形成了包合物。
近年來β-環(huán)糊精包合物在中藥制劑中的應(yīng)用研究日漸廣泛,β-環(huán)糊精包合物可用于改善難溶性藥物的溶解度,可使液體藥物粉末化與防揮發(fā),掩蓋藥物不良臭味和降低刺激性,提高藥物的穩(wěn)定性等[8]。目前β-環(huán)糊精包合技術(shù)主要有飽合水溶液法、溶液-攪拌法、研磨法、超聲波等。超聲波是機(jī)械振動(dòng)能量的傳播,可在液體中形成有效的攪動(dòng)與流動(dòng),破壞介質(zhì)的結(jié)構(gòu),能達(dá)到普通低頻機(jī)械攪動(dòng)達(dá)不到的效果,超聲波法制備包合物具有時(shí)間短、包合率較高、條件易控制、工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[9-10]。本論文篩選制備二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的最佳工藝,包合率為86.77%,二氫楊梅素的含量為32.24%,制得的包合物為白色無(wú)味的粉末。關(guān)于二氫楊梅素β-環(huán)糊精包合物的溶出度、穩(wěn)定性和藥效的觀察有待于進(jìn)一步研究。
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Preparation of inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin from ampelopsis grossedentala
LIANG Xiao-lan,LI Yun-yao,HE Gui-xia,ZOU Qian,LIU He-nan
(Pharmacy College,TCM University of Hunan,Changsha,Hunan 410208,China)
ampelopsis grossedentala; dihydromyricetin;complex of β -cyclodextrin;preparation;orthogonal test;UV spectrophotometer
R283.6
B
10.3969/j.issn.1674-070X.2011.01.012.043.03
〔Absrract〕Objective To study the optimized process for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin β-cyclodextrin.Methods The orthogonal design and ultraviolet spectrophotometer were used,and the including temperature,including time,the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin were studied,and inclusion ratio were used as optimizing index.Results The optimized preparation conditions of dihydromyricetin-β-cyclodextrin included that the ratio of β-cyclodextrin and dihydromyricetin was 1:2.5,the inclusion temperature 70℃ and the stirring time 60 min.Conclusion The optimizied process is simple, functional and convenient for preparation of the inclusion complex of dihydromyricetin-β-cyclodextrin.
2010-03-12
湖南省教育廳科學(xué)研究資助項(xiàng)目(07C498);湖南省教育廳中藥學(xué)重點(diǎn)學(xué)科和“十一五”校級(jí)重點(diǎn)學(xué)科中藥化學(xué)與分析的項(xiàng)目資助。
梁曉嵐(1988-),女,湖南益陽(yáng)人,碩士研究生,從事中藥化學(xué)與制劑工藝研究。
* 何桂霞,博士,教授,碩士生導(dǎo)師,E-mail: heguixia65@yahoo.cn。
(本文編輯 徐愛良)