雞大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

　　[摘要]本試驗(yàn)通過收集承德某地養(yǎng)雞場臨床疑似患大腸桿菌病的死雞的引臟、脾臟和淋巴結(jié)，進(jìn)行分離培養(yǎng)、生化鑒定、動(dòng)物試驗(yàn)通過藥敏試驗(yàn)，分離出了1株大腸桿菌。藥敏試驗(yàn)表明，病原茵對慶大霉素和恩諾沙星極為敏感而對鏈霉素、四環(huán)素、阿莫西林等藥物的敏感性較低。
　　[關(guān)鍵詞]雞；大腸桿菌；分離；鑒定
　　雞大腸桿菌病是某些致病性血清刑的埃希氏大腸桿菌引起的禽類傳染病的總稱。本病的感染途徑很多，主要通過消化道和呼吸道感染，也可通過種蛋垂直傳播等，臨床上可引起急性敗血癥、眼炎、心包炎、肝周炎、輸卵管炎、氣囊炎、關(guān)節(jié)炎等多種病型。目前該病仍然是影響我國養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要疾病之一，造成了相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)損失Ⅲ。對該病的預(yù)防和治療主要是依靠一些抗菌藥物，尤其是抗生素，導(dǎo)致耐藥菌株越來越多，并且不斷產(chǎn)生一些新的耐藥菌株，從而使這些抗生素在臨床上的應(yīng)用效果很差。因此，臨床治療大腸桿菌病最好先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇敏感藥物治療該病才有較好的療效。我們采集相應(yīng)病料經(jīng)微生物學(xué)檢查、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等方法診斷為大腸桿菌，現(xiàn)將分離鑒定及試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。
　　一、材料與方法
　　1.病料
　　承德某規(guī)模化雞場病雞。無菌采集發(fā)病雞的肝臟、脾臟、淋巴結(jié)以及十二指腸作為病料。
　　2.試劑
　　普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、普通肉湯培養(yǎng)基[3-4]等均為自制。葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸櫞酸鹽等購自杭州天和微生物試劑有限公司。
　　3.方法
　　(1)形態(tài)學(xué)觀察
　　取病料直接涂片，革蘭氏染色鏡檢，觀察記錄菌體形態(tài)和染色特征。
　　(2)細(xì)菌的分離培養(yǎng)
　　以無菌操作的方法，采取病死雞的肝臟、脾臟、淋巴結(jié)以及十二指腸的病料，劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24h后觀察細(xì)菌的生長及菌落特征。取初步分離的細(xì)菌劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，挑選典型菌落進(jìn)一步培養(yǎng)。
　　(3)細(xì)菌生化試驗(yàn)
　　按照參考文獻(xiàn)的方法進(jìn)行糖類發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、M.R試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)和三糖鐵試驗(yàn)生化培養(yǎng)取微量生化管及齊種生化培養(yǎng)基，將分離菌純培養(yǎng)物的菌種接入后封日，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。
　　(4)血清型鑒定
　　按照大腸桿菌0抗原鑒定使用說明書操作方法進(jìn)行細(xì)菌的血清型鑒定。
　　(5)藥敏試驗(yàn)
　　無菌操作下取大腸桿菌純培養(yǎng)物，均勻涂抹于營養(yǎng)瓊脂平板，然后用無菌鑷子取各種抗菌素將藥敏紙片平均分布于培養(yǎng)基表面，倒置平板置于℃恒溫培養(yǎng)18h后測量抑菌圈直徑。
　　二、結(jié)果于分析
　　1.形態(tài)學(xué)觀察
　　經(jīng)鏡檢可見到革蘭氏陰性，兩端鈍圓，長約1.5～3.0υm的短小桿菌，多單在，偶有2～3個(gè)菌體相連，無芽孢。
　　2.大腸桿菌
　　麥康凱瓊脂上形成紅色、圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊、直徑為1.5～2.5mm的小菌落；在伊紅美藍(lán)瓊脂上形成紫黑色、具有金屬光澤的小菌落；在普通瓊脂斜而上的菌落為灰白色；在普通肉湯中旱均勻渾濁，管底有灰白色沉淀，并有糞臭味。
　　3.細(xì)菌生化試驗(yàn)
　　生化試驗(yàn)結(jié)果表明，在病料中分離的細(xì)菌能夠分解葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖和甘露醇，并能夠產(chǎn)酸產(chǎn)氣；而且該細(xì)菌能夠產(chǎn)生吲哚，M.R試驗(yàn)陽性、V-P試驗(yàn)陰性，不能利用枸櫞酸鹽、不能產(chǎn)生硫化氫。初步證明所分離的細(xì)菌為大腸桿菌。
　　4.藥敏試驗(yàn)的結(jié)果
　　按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見表(1)。表1常用藥物敏感程度
　　三、討論
　　藥敏實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該大腸桿菌對慶大霉素、環(huán)丙沙星敏感性高考慮使用；而對磺胺嘧啶鈉、青霉素、阿莫西林產(chǎn)生耐藥，該養(yǎng)殖戶應(yīng)少用。該養(yǎng)殖戶還應(yīng)注意正確的用藥措施，長時(shí)間使用某種藥物易產(chǎn)生耐藥性，細(xì)菌耐藥性的發(fā)生和發(fā)展正是抗菌藥物廣泛應(yīng)用，特別是濫用藥物的結(jié)果。因此廣大養(yǎng)殖戶在治療大腸桿菌病時(shí)必須注意用藥問題，加強(qiáng)抗菌藥物的質(zhì)量監(jiān)督，合理選用藥物，在有限的條件下盡量避免耐藥菌株的產(chǎn)生。近些年來，利用中草藥防治雞大腸桿菌病取得了明顯的效果。
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