[摘要]奶牛傳染性鼻氣管炎對奶牛的產(chǎn)奶量及繁殖性能有影響，奶牛群繼發(fā)性流產(chǎn)有時高達(dá)50％。本研究于2006－2008年對某省部分奶牛場進(jìn)行這5種疫病的血清學(xué)監(jiān)測，以了解這些病的流行情況，盡早控制，減少損失，保障某省奶牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展。
　　[關(guān)鍵詞]乙型肝炎；奶牛傳染??；檢測
　　一、材料與方法
　　1.材料
　　乙型肝炎診斷試劑盒購于上海某生物有限公司；牛傳染性胸膜肺炎補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗原、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清和陽性血清、溶血素補(bǔ)體由某生物制品廠提供；牛傳染性鼻氣管炎抗原、IBR弱毒株、陽性血清購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，陰性血清取自檢查牛；奶牛血清來源于某省市的奶牛場和奶牛專業(yè)戶。
　　2.方法
　　(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測奶牛類人乙型肝炎
　　①每孔加入待檢樣品50μL，設(shè)陰、陽性對照各2孔，每孔50μL，并設(shè)空白對照1孔。②手工洗板，棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿每孔靜置5s，甩干、重復(fù)5次。③每孔加入酶結(jié)合物50μL(空白對照除外)，充分混勻，封板，置37℃孵育30min。④重復(fù)操作②。⑤每孔加顯色劑A液、B液各50μL，充分混勻，封板，置37℃孵育15min。⑥每孔加入終止液50μL，混勻。⑦用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長在450nm，先用空白孔校零，然后讀取每孔D值。
　　(2)類人乙型肝炎病理形態(tài)學(xué)觀察
　　用肝臟穿刺法觀察類人乙型肝炎病理形態(tài)學(xué)。用長12～15cm，內(nèi)徑3mm的長注射針頭對20頭奶牛11～12肋間進(jìn)行穿刺，取肝臟組織活體樣本，將其保存于10％福爾馬林中。同時解剖HBsAg、HBeAg雙陽性奶牛，做病理切片觀察。用HE、VanGieson-氏、過碘酸一苯肼Schiff(PAS)希夫氏染色法分別對肝臟組織切片.進(jìn)行染色，同時用透視電鏡做超微結(jié)構(gòu)觀察。另將一部分肝臟組織活體樣本放在滅菌的平皿中，剪碎研磨，用滅菌生理鹽水稀釋后，吸取上清液1.5mL，置Eppendorf管中，經(jīng)差數(shù)離心和飽和硫酸銨沉淀，初提物再經(jīng)150、300、500g/L蔗糖梯度離心，PEG濃縮后，負(fù)染，電鏡觀察病毒顆粒。
　　(3)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)檢測牛傳染性胸膜肺炎
　　血清(包括被檢血清(樣品血清)、陽性血清(補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)血清)、陰性血清(補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)血清)、致敏紅細(xì)胞(對照)、抗原(對照)孔分別加入抗原(補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)抗原)，陰性血清對照孔、致敏紅細(xì)胞對照孔不加抗原；然后分別加入補(bǔ)體，致敏紅細(xì)胞對照孔不加補(bǔ)體；再加入滅菌巴比妥緩沖液，振蕩混勻后置37℃水浴30min；再加入6％致敏紅細(xì)胞(綿羊紅細(xì)胞與15個單位的溶血素混合液)，振蕩均勻后置37℃30min，2000r/min離心5min，觀察結(jié)果。
　　二、試驗(yàn)結(jié)果
　　1.奶牛乙型肝炎
　　(1)奶牛肝功能檢測
　　對HBsAg、HBeAg雙陽性的奶牛進(jìn)行肝功能檢測，在10頭雙陽性中有8頭的谷氨酸丙酮轉(zhuǎn)氨酶(GPT)≥谷氨酸草酰酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT)，GPT在400～600U/L之間，表現(xiàn)為急性病毒性乙型肝炎(AHB)。2頭奶牛血清GPT緩慢上升，緩慢下降，GPT在200—300U/L之間，表現(xiàn)為慢性病毒性乙型肝炎(CHB)。
　　(2)奶牛乙型肝炎病毒形態(tài)學(xué)觀察
　　將HB-sAg、HBeAg雙陽性奶牛肝臟組織做電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)肝臟組織中有密集的HBV顆粒，包括大球形Dane顆粒、小球形顆粒、管球形顆粒3種。這些顆粒與人HBV的顆粒相似(圖1)。
　　(3)奶牛乙型肝炎病理組織學(xué)觀察
　　病牛肝臟主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞的變性：胞漿疏松、氣球樣變(水腫變性)、脂肪變性、嗜酸性變、毛玻璃樣變，肝細(xì)胞壞死，炎癥細(xì)胞浸潤，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞增生和間質(zhì)組織增生(圖2、3)。
　　(4)奶牛乙型肝炎超微結(jié)構(gòu)觀察
　　肝細(xì)胞胞漿內(nèi)線粒體變性、壞死、溶解、消失。核膜的雙層膜不清晰或破裂，核孔增大。膠質(zhì)纖維變性、嚴(yán)重腫脹、變性、壞死(圖4、5)。
　　2.奶牛傳染性鼻氣管炎
　　傳染性鼻氣管炎抗體滴度測定結(jié)果
　　對29份陽性反應(yīng)奶牛血清中和抗體滴度進(jìn)行測定，血清兩倍遞增稀釋，從1：1～1：32，結(jié)果均為陽性反應(yīng)(中和指數(shù)在50％以上為陽性)(表1)。
　　三、治療
　　目前奶牛乙型肝炎、傳染性鼻氣管炎尚無有效的治療藥物，只有對癥治療。為防止細(xì)菌的繼續(xù)感染，可應(yīng)用抗病毒藥物和廣譜抗生素或磺胺類藥物進(jìn)行治療，高熱時可注射復(fù)方氨基比林20～40mL。同時，也可強(qiáng)心、補(bǔ)液、解毒治療，如林格氏液1000～3000mL/次，安鈉加2～5g/次、VC2～4g/次，每日2次。如關(guān)節(jié)痛可注射水楊酸鈉溶液。
　　四、綜合防制措施
　　從科學(xué)養(yǎng)殖人手，改善飼養(yǎng)環(huán)境，加強(qiáng)綜合管理，采用合理的免疫程序。
　　1.預(yù)防注射
　　免疫是預(yù)防各種疫病的有效手段，特別是目前需要免疫的疫苗種類很多，一定要制定合理的免疫程序，適時做好奶牛類人乙型肝炎、傳染性鼻氣管炎的免疫。用牛傳染性鼻氣管炎滅活苗免疫奶牛，經(jīng)過半年的觀察，臨床癥狀好轉(zhuǎn)；對疫區(qū)和受威脅區(qū)6月齡以上的牛，必須每年接種1次牛傳染性鼻氣管炎滅活苗。當(dāng)暴發(fā)本病時，應(yīng)立即隔離，同時對所有牛進(jìn)行牛傳染性鼻氣管炎的疫苗接種。牛傳染性鼻氣管炎疫苗目前有3種：鼻內(nèi)注射苗、匈牙利熱穩(wěn)定苗和滅活疫苗(即為甲醛滅活的氫氧化鋁膠濃苗)，可根據(jù)疫苗說明書選用。不從疫區(qū)引進(jìn)牛，發(fā)病地區(qū)建議在首次免疫后或緊急免疫后21～28d進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫。建議規(guī)模化奶牛場加強(qiáng)牛群免疫抗體的監(jiān)測，抗體水平低下時應(yīng)及時補(bǔ)免。
　　2.嚴(yán)格執(zhí)行檢疫制度
　　從沒有疫情的地方購進(jìn)奶牛，購買前要查看檢疫證明，購進(jìn)后一定要隔離飼養(yǎng)14d以上，無異常情況再混群飼養(yǎng)。
　　3.加強(qiáng)飼養(yǎng)管理
　　采用全進(jìn)全出的養(yǎng)殖模式。冬天既要注意牛舍的保暖，又要注意通風(fēng)。在高熱季節(jié)，做好奶牛舍的通風(fēng)和防暑降溫，提供充足的清潔飲水。保持牛舍干燥，保持合理的飼養(yǎng)密度，降低應(yīng)激因素。保證充足的營養(yǎng)，增強(qiáng)奶牛群抗病能力。
　　4.對飼養(yǎng)環(huán)境執(zhí)行嚴(yán)格消毒
　　搞好環(huán)境衛(wèi)生，及時清除奶牛舍糞便及排泄物，對各種污染物進(jìn)行無害化處理。使用復(fù)合醛類等消毒劑對飼養(yǎng)場、奶牛舍內(nèi)及周邊環(huán)境進(jìn)行消毒，農(nóng)村散養(yǎng)奶牛專業(yè)戶的牛圈舍可使用新鮮的生石灰進(jìn)行消毒。
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