許文忠， 李 安， 田 瓊

(1.云南省耿馬縣人民醫(yī)院藥劑科， 云南 耿馬 677500； 2.第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室， 陜西 西安 710038)

燈臺樹(Alstoniascholaris)為夾竹桃科植物，主產(chǎn)云南的西南部，以樹皮、葉或嫩枝入藥，是當(dāng)?shù)孛耖g常用的植物藥。樹皮含吲哚類生物堿：燈臺堿(C22H29O4N2)、燈臺定堿(C2OH22O3N2)及非氮物質(zhì)：燈臺膠素、燈臺蠟素(C30H48O2)、燈臺亭素(C32H53O2)等。其性味平、淡，有毒。具有退熱作用，對實驗動物支氣管炎有祛痰、平喘作用，并對動物腸道平滑肌有解痙作用，可消炎、化痰止咳、止痛[1]。由于燈臺樹含有多種生物藥效成分[2～3]，所以在民間歷史上就一直用其根、皮、葉來治療頭疼、傷風(fēng)、肺炎、百日咳、慢性支氣管炎，還可以治外傷止血、接骨、消腫等[4]。市售的燈臺樹皮很難分辨真?zhèn)?，而燈臺樹堿的鑒定又難找到標(biāo)準(zhǔn)品，故筆者以燈臺樹葉對照藥材建立簡便的鑒定方法，以辨真?zhèn)?。參考文獻(xiàn)報道，燈臺樹含有較多的吲哚類生物堿，如燈臺堿，燈臺定堿，阿枯米辛堿，阿枯米辛堿的氧化物等，除此之外還含有α-香樹醇乙酸酯、羽扇豆醇乙酸酯。還含有揮發(fā)油成分如檸檬醛、香葉醇、檸檬烯、芳樟醇、乙酸芳樟酯(linalylacetate)、α-蒎烯、異松油烯、以及正-二十六烷、羽扇豆醇、β-香樹脂、烏蘇酸、軟脂酸等。本實驗著重從吲哚類生物堿出發(fā)對本品進(jìn)行定性研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 水為雙蒸水，甲醇為色譜純，苯、乙醇、丙酮、丁酮、氯仿、異丙醇、乙酸乙酯均為分析純。所獲得的燈臺樹皮由云南省耿馬縣采藥人提供。經(jīng)第四軍醫(yī)大學(xué)藥物學(xué)家田瓊教授鑒定為夾竹桃科植物燈臺樹(Alstonia scholaris)的樹皮。燈臺樹葉對照藥材購自成都市藥檢所。

1.2 實驗方法

1.2.1 展開劑的選擇 取本品粉末0.5 g，加95%的乙醇15 mL，加熱回流2 h，放冷，轉(zhuǎn)至超聲波清洗機(jī)，超聲20 min，濾過，濾液蒸干，加95%乙醇5 mL溶解，作為供試品溶液。另取對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別以不同的展開劑展開，取出，涼干，噴以10%硫酸乙醇試液，在105 ℃下加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。

展開劑一：(乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1)

展開劑二：(乙酸乙酯-乙醇-濃氨水=17∶2∶1)

展開劑三：(苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨水=6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)

展開劑四：(乙酸乙酯-丁酮-甲酸=10∶6∶1)

展開劑五：(苯-甲醇=10∶7.5)

展開劑六：(丙酮-氯仿=5∶4)

展開劑七：(氯仿-甲醇=9∶1)

相互之間對比，分離效果依次按以下順序增強(qiáng)：(乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1)<(乙酸乙酯-乙醇-濃氨水=17∶2∶1)<(乙酸乙酯-丁酮-甲酸=10∶6∶1)<(丙酮-氯仿=5∶4)<(苯-甲醇=10∶7.5)<(苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨水=6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)<(氯仿-甲醇=9∶1)。

1.2.2 薄層板的選擇 分別稱取本品粉末和對照藥材各0.5 g，處理方法同前，照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各10 μL，點于不同的硅膠板上，以(氯仿-甲醇=9：1)展開。涼干，噴以10%硫酸乙醇，檢測。

薄層板一：以硅膠G為吸附劑，以0.5%的羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠板。展開劑：乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1，365 nm下檢測。

薄層板二：以氧化鋁為吸附劑，采用干法鋪板進(jìn)行展開。展開劑：乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1，365 nm下檢測。

薄層板三：以硅膠GF254為吸附劑，以0.5%的羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠板。展開劑：乙酸乙酯-氯仿-甲醇=4∶4∶1，在254 nm下檢測。

薄層板四：以硅膠G為吸附劑，以0.5%的羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠板。展開劑：丙酮-氯仿=5∶4，365 nm下檢測。

薄層板五：以硅膠G為吸附劑，以0.5%的羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠板。展開劑：氯仿-甲醇(9∶1)，在日光燈下觀察。

薄層板六：以硅膠G為吸附劑，以0.5%的羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠板。展開劑：苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨水=6∶3∶1.5∶1.5∶0.5，在日光燈下觀察。

1.2.3 樣品處理方法的選擇 將樣品采取不同的處理方法，選用以硅膠G為吸附劑而以羧甲基纖維素納為粘合劑的硅膠制板，在分離效果最好的展開系統(tǒng)(氯仿-甲醇=9：1)中展開，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在105 ℃下加熱30 min，至斑點顏色清晰為至。

方法(1)：稱取本品粉末0.2 g，置三角瓶中，加入95%乙醇10 mL，于超聲波清洗機(jī)上超聲處理20 min，濾過，蒸干濾液，加氯仿溶解至2 mL，作為供試品溶液。另取對照藥材0.2 g，同法制得對照藥材溶液，照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取2種溶液各10 μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板。在(氯仿-甲醇=9：1)展開劑中展開，取出，涼干，噴以10%硫酸乙醇，在105 ℃下加熱30 min，至斑點顏色清晰為至。在日光燈下觀察。

方法(2)：稱取本品粉末0.2 g，置三角瓶中，加入適量蒸餾水，超聲處理30 min，濾過，濃縮濾液至2 mL，作為供試品溶液。另取對照藥材0.2 g，同法制得對照藥材溶液。其余步驟同方法(1)。

方法(3)：稱取本品粉末0.2 g，加入鹽酸10 mL，冷浸(部分逐漸溶解)，放置5 h，濾過，加入10 mL氨水堿化，濾過，濾液中加入氯仿10 mL提取2 min，收集氯仿層，濃縮濾液至2 mL，作為對照品溶液。另取對照藥材0.2 g，同法制得對照藥材溶液，照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取2種溶液各10 μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板。在(氯仿-甲醇=9：1)展開劑中展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在105 ℃下加熱30 min，至斑點顏色清晰為至。在日光燈下觀察。

方法(4)：取本品粉末0.5 g，加95%的乙醇15 mL，加熱回流2 h，放冷，轉(zhuǎn)至超聲波清洗機(jī)，超聲20 min，濾過，濾液蒸干，加95%乙醇5mL溶解，作為供試品溶液。另取對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗，吸取上述2種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別以不同的展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇試液，在105 ℃下加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。

1.2.4 薄層鑒別試驗 取本品粉末0.5 g，加95%的乙醇15 mL，加熱回流2 h，放冷，轉(zhuǎn)至超聲波清洗機(jī)，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，加95%乙醇5 mL溶解，作為供試品溶液。另取燈臺樹葉對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液[1]。照薄層色譜法《中國藥典》附錄VIB)試驗，吸取上述2種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(9：1)展開劑展開，取出，涼干，噴以10%的硫酸溶液，在105 ℃下加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點。

3 結(jié)果

3.1 展開劑的確定 其中展開劑三和展開劑七的展開效果最好，進(jìn)一步對比這2種展開系統(tǒng)并結(jié)合藥材所含化學(xué)成分的特性，展開劑三的組成較展開劑七復(fù)雜，在配制過程中，如不嚴(yán)格控制其配比，就會影響展開效果，而導(dǎo)致分離不完全。因此，最終選擇展開劑七為分離最佳的展開系統(tǒng)。

3.2 薄層板的確定 將本品粉末和對照藥材采用相同的處理方法分別制備供試品溶液和對照藥材溶液，選用不同的吸附劑，并在不同的展開劑中展開，經(jīng)檢測結(jié)果顯示，本品以硅膠G為吸附劑分離效果最好。

3.3 樣品處理方法的確定 從4種不同樣品處理方法的色譜圖可以看出，方法(4)的分離效果最好，因此我們最終選擇方法四(4)作為本品的樣品處理方法。

3.4 薄層鑒別結(jié)果 采用展開劑七、以硅膠G及分離方法(4)后，所鑒定的燈臺樹皮粉展開的薄層色譜圖如圖1。

1、3為對照藥材溶液;2、4為供試品溶液

4 討論

燈臺樹是西南少數(shù)民族常用藥物，其生長于北回歸線附近東南亞亞熱帶地區(qū)，對呼吸道疾病有極好的療效[5～7]，在當(dāng)?shù)厥褂脧V泛，而至今我國藥典上未予納入。注射治療豬氣喘病的療效高于丁胺卡那霉素[8～9]。

筆者以燈臺樹葉對照藥材作為對照，對燈臺樹皮進(jìn)行了鑒別研究。從上述色譜圖顯色結(jié)果可知，對照藥材溶液和供試品在同一硅膠G板上相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點，實驗證實可以用薄層法進(jìn)行燈臺樹皮的鑒別。

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