喬 芳 石翠英 何路軍 王振雷 趙志弘 張 虹 田亞娟 劉敬閃 (河北省血液中心，石家莊050071)

一直以來RhD血型因其在臨床輸血和產(chǎn)科學(xué)上的重要性及其自身的復(fù)雜性而成為研究的熱點(diǎn)。RhDel表型是一種變異的極弱RhD陽(yáng)性血型，長(zhǎng)期以來Del型的個(gè)體一直被當(dāng)作RhD陰性對(duì)待，隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)Del型血液可能會(huì)引起Rh真陰性受血者產(chǎn)生抗D［1，2］，其血清學(xué)反應(yīng)特征為鹽水介質(zhì)反應(yīng)和間接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)呈陰性，吸收放散試驗(yàn)呈陽(yáng)性，在分子水平上1227A是其重要的遺傳標(biāo)記［3］。筆者在對(duì)近兩年的石家莊Rh陰性無(wú)償獻(xiàn)血者進(jìn)行Del型篩查分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)有6例具有完整的RhD基因但不具備1227A遺傳特性，鑒定為RhD(711delC)基因型，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 79例受檢樣本均來自河北省血液中心無(wú)親緣關(guān)系的漢族無(wú)償獻(xiàn)血者，IAT確定為RhD陰性，C或E抗原陽(yáng)性，攜帶RhD完整基因。

1.2方法 標(biāo)本的血清學(xué)特征研究方法參見文獻(xiàn)［4］，RhD 基因遺傳特征分析方法參見文獻(xiàn)［5，6］，經(jīng)兩次PCR-SSP實(shí)驗(yàn)確定為RhD1227A(-)的標(biāo)本進(jìn)行RhD全部外顯子序列分析。

2 結(jié)果

攜帶完整RhD基因的79例研究樣本中，73例具有RhD(1227G＞A)遺傳特征，血清學(xué)吸收放散試驗(yàn)陽(yáng)性，確定為Del型;6例(ccEe4例，CcEe1例，Ccee1例)不具有 RhD(1227G＞A)遺傳特征(圖1)，血清學(xué)吸收放散試驗(yàn)為陰性，確定為RhD(-)。序列分析顯示，6個(gè)標(biāo)本的兩條RhD基因均在第5外顯子的711位置缺失一個(gè)C，形成了移碼突變(圖2，3)，為 RhD(711delC)基因型。

圖1 RHD(K409K)等位基因的PCR-SSP結(jié)果Fig．1 The results of PCR-SSP for RHD(K409K)allele

圖2 該例標(biāo)本RHD基因第5外顯子有缺失基因的部分序列圖譜Fig．2 The results of sequencing

圖3 該例標(biāo)本RHD基因第8內(nèi)含子有突變基因的部分序列圖譜Fig．3 The results of sequencing

3 討論

決定人類Rh血型的RhD/CE基因位于染色體1p34.3～36.1，分別由10個(gè)外顯子組成，編碼區(qū)總長(zhǎng)均為1 251 bp，分別編碼417個(gè)氨基酸組成的糖蛋白：D抗原和CcEe抗原。兩個(gè)基因具有極高的同源性(約96%)，其間僅有40個(gè)核苷酸不同，這40個(gè)核苷酸分別位于RhD和 RhCE基因第3、4、5、6、7、9外顯子。因此在PCR試驗(yàn)中，擴(kuò)增引物的3＇末端均是RhD特異性堿基，可準(zhǔn)確檢測(cè)RhD基因的完整性［7］。RhD基因具有多態(tài)性，任何座位上的基因突變都可能影響抗原的表達(dá)或表達(dá)的抗原結(jié)構(gòu)［8］。一般認(rèn)為RhD抗原陽(yáng)性個(gè)體具有 RhD基因，而研究表明有的個(gè)體具有RhD基因但不表達(dá)RhD抗原或有極少表達(dá)，使Rh血型系統(tǒng)中產(chǎn)生了許多D變異的亞型。Del表型就是其中非常特殊的一種，可能是因其完整的 RhD基因上存在 RhD(1227G＞T)突變特征而使其抗原表達(dá)數(shù)量急劇減少。不表達(dá)的RhD基因?yàn)槌聊蚧蚴Щ颍鍖W(xué)檢測(cè)結(jié)果表現(xiàn)為陰性。本研究發(fā)現(xiàn)的6例非RhD(K409K)樣本，擁有完整的RhD基因(見文獻(xiàn)［6］報(bào)道)，血清學(xué)檢測(cè)為RhD陰性，通過對(duì)其RhD基因全長(zhǎng)序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在兩條RhD基因外顯子5的711位置上均缺失一個(gè)C，710～712的CCG變成了CGT，形成了移碼突變，為RhD(711delC)基因型，同時(shí)在內(nèi)含子8的4779位置上檢測(cè)到一個(gè)純合突變，即4779C/T，而外顯子9未發(fā)現(xiàn)異常。該發(fā)現(xiàn)在河北地區(qū)屬首次報(bào)道。

西安地區(qū)報(bào)道RhD陰性個(gè)體RhD(711delC)基因型可能與E抗原有一定的相關(guān)性［9］。而本研究結(jié)果顯示，有1例RhD(711delC)的表型是Ccee，另外5例為E抗原陽(yáng)性，與西安地區(qū)報(bào)道結(jié)果不符，有待于擴(kuò)大樣本進(jìn)一步研究。

另外RhD(711delC)基因型的分子背景中，是否第5外顯子中的缺失與第8內(nèi)含子中的純合突變同時(shí)存在，還需要進(jìn)一步擴(kuò)大研究樣本。

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5 喬 芳，石翠英，何路軍 et al．河北地區(qū)漢族人群RhDel表型血清學(xué)及分子生物學(xué)研究［J］.河北醫(yī)藥，2011;33(7)：1065-1066.6 喬 芳，石翠英，何路軍et al．河北地區(qū)漢族人群RhD陰性血型中De1基因型分布［J］.河北醫(yī)藥，2011;33(19)：3002-3004.

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8 徐 群，張世訓(xùn)，張建業(yè) et al．中國(guó)漢族群體RhD陰性個(gè)體D基因外顯子多態(tài)性研究［J］.中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2001;18(1)：39-42.

9 王滿妮，葉世輝，劉孟黎et al．西安地區(qū)RhD陰性個(gè)體RHD71 1DelC等位基因頻率研究［J］.中國(guó)輸血雜志，2011;24(3)：229-230.