高效液相色譜法檢測(cè)食品中堿性橙染料

佟永薇

（天津市食品研究所有限公司，天津301609）

1 試劑和材料

實(shí)驗(yàn)用水：一級(jí)水。

堿性橙染料標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：堿性橙21：1.076 mg/mL；堿性橙22：1.094 mg/mL；堿性橙2：1.036 mg/mL；堿性橙標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（使用時(shí)配置）：堿性橙21：2.152、10.76、21.52、32.28、43.04 μg/mL，堿 性 橙2：2.188、10.94、21.88、32.82、43.76 μg/mL，堿 性 橙2：2.072、10.36、20.72、31.08、41.44 μg/mL。

高效液相色譜儀；TJIE-29 天平：感量為0.1 mg；TJIE-56 超聲波旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；離心機(jī)；TJIE-10 氮吹儀；電熱板。

2 方法

2.1 試樣制備

將固體樣品放入攪拌機(jī)中攪碎至勻粉狀，液體樣品混勻，含油樣品混勻，分別進(jìn)行前處理。

2.2 試樣前處理

采用文獻(xiàn)[1]中的前處理方法對(duì)固體樣品、液體樣品、含油樣品分別進(jìn)行提取及凈化。

2.3 液相色譜條件

色譜柱：C18 粒徑5 μm，150 mm×4.6 mm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：甲醇65 mL＋乙酸銨35 mL；檢測(cè)波長(zhǎng)：堿性橙2：449 nm；堿性橙21、堿性橙22：485 nm。

2.4 測(cè)定公式

分別吸取樣液注入液相色譜儀，測(cè)得其峰面積，代入式（1）中求得樣液中堿性橙的含量[3]。

式中：X 為試樣中每種堿性橙燃料的含量，（mg/kg）；C 為由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出的試樣液中每種堿性橙染料的濃度，（μg/mL）；V 為樣品最終定容體積，mL；m為試樣質(zhì)量，g。

3 測(cè)定

3.1 校準(zhǔn)曲線繪制

堿性橙21：2.152、10.76、21.52、32.28、43.04 μg/mL；進(jìn)液相色譜儀進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[2]。堿性橙21 標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1，標(biāo)準(zhǔn)濃度、峰面積見(jiàn)表1。

堿性橙22：2.188、10.94、21.88、32.82、43.76 μg/mL；進(jìn)液相色譜儀進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。堿性橙22 標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2，標(biāo)準(zhǔn)濃度、峰面積見(jiàn)表2。

表1 堿性橙21 的標(biāo)準(zhǔn)濃度、峰面積Table 1 The standard concentration and peak area of Alkaline orange 21

表2 堿性橙22 的標(biāo)準(zhǔn)濃度、峰面積Table 2 The standard concentration and peak area of Alkaline orange 22

堿性橙2：2.072、10.36、20.72、31.08、41.44 μg/mL；進(jìn)液相色譜儀進(jìn)行分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。堿性橙2 標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3，標(biāo)準(zhǔn)濃度、峰面積見(jiàn)表3。

表3 堿性橙2 的標(biāo)準(zhǔn)濃度、峰面積Table 3 The standard concentration and peak area of Alkaline orange 2

4 樣品測(cè)定及加標(biāo)回收

4.1 樣品測(cè)定

檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 辣椒粉中堿性橙的檢測(cè)結(jié)果Table 4 The test results of Chili powder in alkaline orange

4.2 加標(biāo)回收率

加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 辣椒粉中堿性橙2 加標(biāo)回收率Table 5 The labeled recovery of Chili powder in alkaline orange 2

表6 辣椒粉中堿性橙21 加標(biāo)回收率Table 6 The labeled recovery of Chili powder in alkaline orange 21

表7 辣椒粉中堿性橙22 加標(biāo)回收率Table 7 The labeled recovery of Chili powder in alkaline orange 22

由表7 結(jié)果顯示，測(cè)定的的回收率為95%～115%，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明本方法有很好的回收率。

4.3 檢出限

計(jì)算最低濃度的加標(biāo)回收樣液信噪比S/N，三倍信噪比時(shí)為檢出限，十倍信噪比時(shí)為定量低限。在樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)堿性橙2：0.126mg/kg，堿性橙21：0.127mg/kg；堿性橙22：0.153 mg/kg；按方法步驟進(jìn)行前處理，提取液經(jīng)液相色譜分析，其堿性橙2，S/N=47，計(jì)算S/N=3時(shí)所對(duì)應(yīng)的檢出限為0.008 mg/kg，其堿性橙21，S/N=47，計(jì)算S/N=3 時(shí)所對(duì)應(yīng)的檢出限為0.008 mg/kg，其堿性橙22，S/N=45，計(jì)算S/N=3 時(shí)所對(duì)應(yīng)的檢出限為0.01 mg/kg，滿足方法的檢出限0.01 mg/kg 要求。

5 結(jié)論

利用高效液相色譜法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)分析，在樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)堿性橙2：0.126 mg/kg；堿性橙21：0.127 mg/kg；堿性橙22：0.153 mg/kg；提取液經(jīng)液相色譜分析，測(cè)定的的回收率為95%～115%，其堿性橙2檢出限為0.008 mg/kg，堿性橙21 檢出限為0.008 mg/kg，堿性橙22 檢出限為0.01 mg/kg。

[1] 湖北省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院.GB/T 23496-2009 食品中禁用物質(zhì)的檢測(cè)堿性橙染料[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2009-07-03

[2] 徐新盛.一種治療蕁麻疹、濕疹的藥物組合物及其制備工藝：中國(guó),CN200610086473.3[P].2007-01-17

[3] 宋小蘭,劉強(qiáng).HPLC 法測(cè)定紅花罌粟中蒂巴因的含量[J].分析測(cè)試技術(shù)與儀器,2005(2):66-68