王 煒，李 芳，段國威，吳曉玲，宋 青

(1河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，石家莊050000;2河北井陘縣醫(yī)院;3河北深澤縣醫(yī)院)

哮喘是由多種細胞和細胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病。近年來隨著對哮喘發(fā)病機制的深入研究，發(fā)現(xiàn)免疫耐受的破壞也是哮喘發(fā)病的重要環(huán)節(jié)［1］。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞是一群能夠有效地調(diào)節(jié)或抑制其他免疫活性細胞功能，在誘導(dǎo)免疫耐受中發(fā)揮著重要作用的細胞［2］。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞在多種免疫性疾病中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用［3］。而目前有關(guān)誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性 T淋巴細胞(Foxp3+IL-10+)在哮喘兒童中的變化以及其與病情關(guān)系的研究尚無報道。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 根據(jù)2008年中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)會呼吸學(xué)組制定的《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》中兒童支氣管哮喘的診斷標(biāo)準，2009年7月～2010年12月，選擇80例對戶塵螨過敏(戶塵螨過敏原皮膚點刺試驗陽性，風(fēng)團反應(yīng)范圍≥++)的中度支氣管哮喘患兒，按臨床表現(xiàn)分為急性期組和緩解期組，每組40例，兩組患兒在性別、年齡、病程、伴隨疾病、皮膚點刺試驗結(jié)果的陽性過敏原分布情況等方面均無差異。兩組患兒采血前4周內(nèi)未全身使用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑，均未用過抗過敏藥物;均間斷應(yīng)用小至中等劑量的吸入型糖皮質(zhì)激素(布地奈德吸入劑)，必要時應(yīng)用β2受體激動劑(硫酸沙丁胺醇吸入劑)，不合并使用長效抗組胺及抗白三烯類藥物。同時選擇30例健康查體患兒作為對照組，此組患兒戶塵螨過敏原皮膚點刺實驗陰性。急性期組男22例、女18例，年齡(8.26± 2.72)歲;緩解期組男23例、女17例，年齡(8.83± 2.64)歲;對照組男16例、女14例，年齡(8.52± 2.47)歲。3組在性別、年齡方面無統(tǒng)計學(xué)差異。

1.2 實驗方法 全部患兒及對照組均于清晨留取外周肝素鈉抗凝靜脈血3 mL，應(yīng)用淋巴細胞分離液分離外周血單個核細胞(PBMC)，用含10%小牛血清的完全RPMI 1640培養(yǎng)基調(diào)整淋巴細胞濃度為2 ×106/mL，接種于24孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)，每孔1 mL，并給予戶塵螨浸出液20 μg/mL刺激后將PBMC于37℃ 5%CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束后按試劑盒說明書處理標(biāo)本，經(jīng)FACSCantoⅡ流式細胞分析儀進行檢測并分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)均采用±s表示。各組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗和Nemenyi檢驗。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞水平和哮喘疾病嚴重程度相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.2 相關(guān)性分析 支氣管哮喘患兒誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞水平與病情呈負相關(guān)(r=－0.652，P＜0.01)。

3 討論

調(diào)節(jié)性T淋巴細胞是指既可天然產(chǎn)生又可以經(jīng)誘導(dǎo)而產(chǎn)生的具有免疫抑制功能的細胞亞群。它主要包括自然調(diào)節(jié)性T淋巴細胞(nTreg，F(xiàn)oxp3+IL-10－)、適應(yīng)性調(diào)節(jié) T淋巴細胞(iTreg、Tr1、Th3、T等)以及具有調(diào)節(jié)活性的固有類T細胞(自然殺傷性 T細胞、dgT淋巴細胞)等［4，5］。其中與免疫性疾病關(guān)系密切的主要有nT-reg、誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞(Foxp3+IL-10+)、Tr1細胞Foxp3－IL-10+)和Th3細胞()等。調(diào)節(jié)性T淋巴細胞主要通過分泌IL-10、TGF-β1等具有免疫抑制作用的細胞因子以及細胞—細胞直接接觸的抑制作用等多種機制發(fā)揮免疫抑制作用［6，7］。其中IL-10是主要的抑制性細胞因子，它可通過直接和間接機制明顯降低抗原特異性T細胞增殖［8］。IL-10可有效抑制IL-12的產(chǎn)生，而IL-12是Th1細胞分化的關(guān)鍵因子。IL-10還可阻止T細胞受體介導(dǎo)的細胞活化。以IL-10處理T細胞導(dǎo)致持久的抗原特異性T細胞無反應(yīng)，以抗CD3和CD28抗體重新刺激細胞不能逆轉(zhuǎn)IL-10誘導(dǎo)的T細胞無能，加入外源性的IL-2也不能逆轉(zhuǎn)IL-10誘導(dǎo)的T細胞無能。除了主動抑制T細胞增殖，在特定條件下，IL-10可誘導(dǎo)Tr1的分化，人和小鼠細胞在IL-10存在時經(jīng)慢性活化可產(chǎn)生Tr1，增強Tr1的抑制作用。可見IL-10是調(diào)節(jié)性T淋巴細胞發(fā)揮免疫抑制功能的主要細胞因子。而目前有關(guān)可分泌IL-10的誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞在哮喘兒童中的變化以及其與病情關(guān)系的研究尚無報道。

根據(jù)本研究結(jié)果，我們認為誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞數(shù)目減少，導(dǎo)致抑制免疫功能減弱或呈低反應(yīng)性可能是引起支氣管哮喘發(fā)病的機制之一，同時也說明哮喘患兒癥狀的緩解可能與體內(nèi)誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞水平的恢復(fù)有關(guān)。誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T淋巴細胞在哮喘的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用，其水平可用來評估哮喘病情。

［1］陽艷麗，潘玉琴，何幫順，等.哮喘患兒外周血調(diào)節(jié)性T細胞和Th1/Th2的變化及其與哮喘病情的關(guān)系［J］.中國當(dāng)代兒科雜志，2011，13(6):482-486.

［2］Lan Q，F(xiàn)an H，Quesniaux V，et al.Induced Foxp3(+)regulatory T cells:a potential new weapon to treat autoimmune and inflammatory diseases［J］.J Mol Cell Biol，2012，4(1):22-28.

［3］Long SA，Buckner JH.regulatory cells in human autoimmunity:more than a numbers game［J］.J Immunol，2011，187(5):2061-2066.

［4］Sakaguchi S.Regulatory T cells in the past and for the future［J］.Eur J Immunol，2008，38(4):901-937.

［5］King C，Tangye SG，Mackay CR.T follicular helper(TFH)cells in normal and dysregulated immune responses［J］.Annu Rev Immunol，2008，(26):741-766.

［6］Wang LH，Lin YH，Yang J，et al.Insufficient increment ofregulatory T cells after stimulation in vitro with allergen in allergic asthma［J］.Int Arch Allergy Immunol，2009，148(3):199-210.

［7］Ozyilmaz E，Canbakan S，Capan N，et al.Correlation of plasma transforming growth factor beta 1 with asthma control test［J］.Allergy Asthma Proc，2009，30(1):35-40.

［8］Sakaguchi S.Regulatory T cells:history and perspective［J］.Methods Mol Biol，2011，(707):3-17.