東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物營養(yǎng)研究所 劉瑩 李垚＊ 索艷麗 呼林林 馮香安 張琳 金芳

槲皮素（Quercetin）又名櫟精、槲皮黃素，一種天然黃酮類化合物，是黃酮醇類化合物的典型代表，具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗黏附、抗病毒以及免疫調(diào)節(jié)等作用，但其作為飼料添加劑應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)中仍鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)選用39周齡海賽蛋雞，在基礎(chǔ)飼糧中添加不同水平的槲皮素，研究蛋雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的變化。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 槲皮素≥97%（HPLC），購于阿拉丁公司；39周齡海賽蛋雞，購于哈爾濱益農(nóng)禽業(yè)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼糧配方 采用單因素隨機(jī)分組設(shè)計(jì)，選擇健康活潑、發(fā)育正常、體重和產(chǎn)蛋率相近的39周齡海賽蛋雞240只，隨機(jī)分4組，每組6個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10只雞。對(duì)照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加0.02%、0.04%、0.06%槲皮素。試驗(yàn)共8周，預(yù)飼期為1周。參照NRC（1994）蛋雞營養(yǎng)需要配制玉米-豆粕型日糧，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理及樣品采集與測定 飼養(yǎng)試驗(yàn)在東北農(nóng)業(yè)大學(xué)香坊試驗(yàn)基地進(jìn)行，試驗(yàn)期為2011年11月至2012年1月。采用半開放式雞舍，3層立體籠養(yǎng)，試驗(yàn)期內(nèi)雞舍溫度18～26℃，相對(duì)濕度50% ～ 70%，白天自然光照，早晚輔以人工補(bǔ)光，每天光照時(shí)間16 h。根據(jù)蛋雞飼喂規(guī)程進(jìn)行飼喂，自由采食和飲水，常規(guī)防疫消毒和免疫。

試驗(yàn)期內(nèi)，每周相同時(shí)間隨機(jī)從每重復(fù)組采集2枚蛋，當(dāng)天測定蛋品質(zhì)。分別測定蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋黃顏色。試驗(yàn)第4周和第8周，隨機(jī)從每重復(fù)組采集2枚蛋，分離蛋清與蛋黃并將其烘干至恒重，使用粉碎機(jī)將其制成蛋黃粉和蛋清粉于密封陰涼通風(fēng)處保存。采用二價(jià)銅催化消煮-硼酸吸收法于凱氏定氮儀（KT-2300，F(xiàn)OSS）測定蛋白質(zhì)含量；采用索氏抽提法測定蛋黃中粗脂肪；使用膽固醇試劑盒（購于北京北化康泰臨床試劑有限公司）和無機(jī)磷試劑盒（購于南京建成生物工程研究所）于紫外可見光光度計(jì)（UV1206）測定蛋中膽固醇（王惠蕓和高應(yīng)，1995）和磷脂（高云仙和智變英，1999）。試驗(yàn)第8周時(shí)，每重復(fù)組隨機(jī)選取1只蛋雞，進(jìn)行翅靜脈采血，置干凈離心管中，待血清析出后，以3000 r/min低溫離心15 min，取血清分裝，用FULLY全自動(dòng)生化分析儀測定血清中膽固醇、總蛋白、尿素氮、尿酸、鈣和磷，所用試劑均購于中生北控科技股份有限公司。

1.4 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件中One-way ANOVA進(jìn)行分析，并進(jìn)行Ducan’s法多重比較。

2 結(jié)果

2.1 槲皮素對(duì)蛋中主要營養(yǎng)成分的影響 由表2可知，與對(duì)照組相比，添加不同個(gè)水平槲皮素對(duì)蛋清中蛋白質(zhì)含量、蛋黃中脂肪含量均無顯著影響（P＞0.05）；0.04%槲皮素組蛋黃中蛋白質(zhì)含量比對(duì)照組和0.06%槲皮組分別顯著提高2.86%（P＜ 0.05） 和 2.68%（P ＜ 0.05）；0.02%、0.04%和0.06%槲皮素組蛋黃總磷脂含量均分別較對(duì)照組顯著提高 3.57%、8.23%和 8.73%（P＜0.05）；0.06%槲皮素組蛋黃中膽固醇含量極顯低于對(duì)照組12.82%（P＜0.01），并顯著低于0.02%添加量組10.53%（P＜0.05），但與0.04%槲皮素組無顯著差異（P ＞ 0.05）。

表2 槲皮素對(duì)海賽蛋雞蛋中主要營養(yǎng)成分的影響

2.2 槲皮素對(duì)蛋品質(zhì)的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比，添加不同水平槲皮素對(duì)蛋形指數(shù)和蛋殼強(qiáng)度均無顯著影響（P＞0.05）；0.04%和0.06%槲皮素組的蛋殼厚度較對(duì)照組分別極顯著提高8.45%和5.59%（P＜0.01），其中0.04%槲皮素組的蛋殼厚度極顯著高于0.02%槲皮素組 （P＜0.01）；各水平槲皮素添加組的蛋黃顏色均極顯著提高 （P＜0.01）；0.04%和0.06%槲皮素組雞蛋的哈氏單位分別較對(duì)照組顯著提高5.06%和6.39%（P＜0.01），分別較0.02%槲皮素組顯著提高 3.55%（P＜0.05）和 4.86%（P＜0.01）。

2.3 槲皮素對(duì)與蛋品質(zhì)相關(guān)的血液生化指標(biāo)的影響 由表4可知，與對(duì)照組相比，添加不同水平槲皮素對(duì)蛋雞血液中的膽固醇和磷含量均無顯著影響（P＞0.05）；0.04%和0.06%槲皮素組蛋雞血清中總蛋白和鈣含量均顯著提高（P＜0.05），其中總蛋白含量較對(duì)照組分別提高9.92%和10.23%，鈣含量較對(duì)照組分別提高18.69%和14.88%；與對(duì)照組相比，0.06%槲皮素組血清中尿素氮含量顯著降低53.49%（P＜0.05）；0.04%槲皮素組血清中尿酸含量顯著降低66.83%（P＜0.05）。

表3 槲皮素對(duì)海賽蛋雞蛋品質(zhì)的影響

表4 槲皮素對(duì)海賽蛋雞血液生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 槲皮素對(duì)蛋中主要營養(yǎng)物質(zhì)及相關(guān)指標(biāo)的影響 雞蛋中含有豐富蛋白質(zhì)且?guī)缀跞磕鼙蝗梭w吸收，因此，研究雞蛋中蛋白質(zhì)含量變化具有實(shí)際意義。本試驗(yàn)結(jié)果表明，0.04%槲皮素組蛋黃中的蛋白質(zhì)含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但蛋清中蛋白含量各組間無顯著差異（P＞0.05）。為探究蛋白質(zhì)變化原因，進(jìn)一步研究表明，0.04%和0.06%槲皮素組蛋雞血清總蛋白含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；0.06%槲皮素組蛋雞血清尿素氮含量顯著降低（P＜0.05）；0.04%槲皮素組蛋雞血清中尿酸含量顯著降低（P＜0.05）。其中血清總蛋白含量可在一定程度上反映機(jī)體蛋白質(zhì)代謝，總蛋白中的白蛋白不但可作為營養(yǎng)物質(zhì)的載體，同時(shí)還是機(jī)體的蛋白質(zhì)來源之一；血清尿素氮和尿酸也可反映機(jī)體的蛋白質(zhì)代謝，動(dòng)物體內(nèi)未被利用的氨基酸可被分解成氨，氨在肝臟中被合成尿素氮或尿酸并釋放入血。研究認(rèn)為，血中的尿酸可直接反映體內(nèi)蛋白質(zhì)分解代謝水平，血清中尿素氮含量與蛋白質(zhì)利用率之間呈顯著的負(fù)相關(guān)。Malmlof（1988）研究認(rèn)為，血漿中的尿素氮可較準(zhǔn)確反映動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝情況，蛋白質(zhì)代謝良好時(shí)，血漿尿素氮濃度降低。本試驗(yàn)結(jié)果提示，槲皮素可通過改善蛋白質(zhì)代謝相關(guān)的血液生化指標(biāo)提高機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的利用率，從而增加蛋中蛋白質(zhì)含量，提高雞蛋品質(zhì)。

雞蛋蛋黃富含豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，但其中還含有可引起心血管疾病的膽固醇，因此，研究低膽固醇雞蛋具有一定的必要性。大量研究表明，黃酮類化合物可不同程度降低蛋黃中膽固醇含量，如大豆黃酮、蜂膠黃酮、橙皮素和柚皮素等（許合金等，2009；Lien 等，2008；尹靖東等，2004）。 本試驗(yàn)結(jié)果表明，0.06%槲皮素組蛋黃中膽固醇含量顯著低于對(duì)照組（P ＜ 0.01）和 0.02%槲皮素組（P ＜ 0.05），提示槲皮素具有降低蛋黃中膽固醇的作用。蛋雞膽固醇的代謝途徑主要是將其轉(zhuǎn)運(yùn)到蛋中（Naber，1983），蛋中膽固醇含量下降，提示蛋雞血液中膽固醇含量也可能產(chǎn)生相應(yīng)變化，但本試驗(yàn)進(jìn)一步研究表明，槲皮素對(duì)血液中膽固醇并無顯著影響（P＞0.05），說明槲皮素對(duì)蛋雞血清中總膽固醇與蛋中膽固醇的影響變化趨勢并不一致。有研究表明，黃酮類化合物具有提高蛋用家禽血清17-β雌二醇、孕酮等激素水平的作用（張響英等，2008；朱新建等，2004），而禽類多數(shù)的類固醇激素都以膽固醇為底物進(jìn)行合成，提示槲皮素可能通過促進(jìn)類固醇激素的合成從而減少膽固醇向蛋中的轉(zhuǎn)運(yùn)。此外，雞蛋中的磷脂具有降低膽固醇、軟化血管、降低血壓等作用，對(duì)人類健康同樣具有重要意義。本試驗(yàn)結(jié)果表明，槲皮素組蛋黃中總磷脂含量均顯著提高（P＜0.05或P＜0.01）。上述試驗(yàn)結(jié)果說明，槲皮素對(duì)蛋中脂質(zhì)代謝有一定作用，可不同程度地改善蛋中脂類的營養(yǎng)物質(zhì)組分，提高其營養(yǎng)價(jià)值。但槲皮素對(duì)蛋黃粗脂肪含量并無顯著影響（P＞0.05），因此，槲皮素對(duì)蛋黃中各種脂質(zhì)的不同作用以及作用程度尚有待進(jìn)一步研究。

3.2 槲皮素對(duì)蛋品質(zhì)及相關(guān)指標(biāo)的影響 蛋殼強(qiáng)度和蛋殼厚度是反映蛋殼質(zhì)量的重要指標(biāo)，同時(shí)也是重要的蛋品質(zhì)指標(biāo)。良好蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度可減少雞蛋的破損率，提高經(jīng)濟(jì)效益。此外，蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度對(duì)雞蛋的新鮮度有一定影響（孫從佼等，2010）。 Sahin 等（2007）在產(chǎn)蛋后期的鵪鶉飼糧中添加大豆黃酮，結(jié)果表明，正常條件下大豆黃酮可有效提高蛋品質(zhì)，改善蛋殼厚度；另有研究表明，在蛋雞日糧中添加大豆黃酮后，蛋殼厚度和蛋殼重均相對(duì)提高（馬學(xué)會(huì)，2003），這些研究提示黃酮類化合物可改善家禽蛋殼品質(zhì)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，蛋雞飼糧中添加0.04%和0.06%槲皮素均可極顯著提高產(chǎn)蛋后期的蛋殼厚度 （P＜0.01），且0.04%槲皮素效果更好；但各試驗(yàn)組雞蛋的蛋殼強(qiáng)度與對(duì)照組相比差異并不顯著 （P＞0.05）。有研究表明，黃酮類化合物可通過提高血清鈣含量改善蛋殼品質(zhì)（金小軍等，2005）。本試驗(yàn)中0.04%和0.06%槲皮素組蛋雞血清鈣含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），說明槲皮素也可通過提高血清中鈣含量，為蛋殼的形成提供充足鈣源，從而改善蛋殼品質(zhì)。

哈氏單位是現(xiàn)在國際上對(duì)蛋品質(zhì)評(píng)定的重要指標(biāo)，也是衡量雞蛋蛋白品質(zhì)和蛋的新鮮程度的重要指標(biāo)，其值越高，蛋白質(zhì)越黏稠，蛋白品質(zhì)越好。本試驗(yàn)結(jié)果表明，0.04%和0.06%槲皮素組雞蛋的哈氏單位極顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），這與倪迎冬等（2007）在產(chǎn)蛋后期蛋雞飼糧中添加大豆黃酮的研究結(jié)果一致。蛋黃顏色作為蛋品質(zhì)的指標(biāo)之一，并不影響雞蛋的食用價(jià)值，但其對(duì)消費(fèi)者的購買力有一定影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，不同添加水平槲皮素均能顯著影響蛋黃顏色（P＜ 0.01），這與蛋雞飼糧中添加大豆黃酮和染料木黃酮的結(jié)果相同（弓琴等，2009）。蛋形指數(shù)是蛋雞種質(zhì)分類的指標(biāo)之一，僅與包裝和運(yùn)輸有關(guān)。此外，較早的研究表明，蛋形指數(shù)與蛋重具有一定相關(guān)性，隨蛋重的增加呈下降趨勢（Bratova等，1982），而本試驗(yàn)研究表明，槲皮素對(duì)蛋形指數(shù)并無顯著影響（P＞0.05），其原因有待于進(jìn)一步探討。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，飼糧中添加不同劑量的槲皮素能均能改善產(chǎn)蛋后期蛋雞的蛋品質(zhì)，且最適添加量為0.04%。

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