劉遠(yuǎn)志 郭玲 韓雪瓊 李杰 倪均

[摘要] 通過對青蒿生長過程中青蒿素的測定，指導(dǎo)種植戶收割青蒿最佳時期、青蒿葉末合理制備、種植區(qū)域，防止盲目收割野生青蒿而破壞生態(tài)平衡，導(dǎo)致資源枯竭，同時還可提高資源的利用率，增加經(jīng)濟(jì)效益。

[關(guān)鍵詞] 青蒿；收割時期；青蒿葉末

瘧疾是世界上流行非常廣，發(fā)病率和死亡率都非常高的熱帶寄生蟲傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織的報告，世界上有100多個國家為瘧疾流行區(qū)，全球約25億人生活在疫區(qū)，約22億人受瘧疾的威脅，每年有300萬-500萬瘧疾臨床病例，病死人數(shù)為110-270萬，在非洲，對治療瘧疾有效藥物的需求是非常巨大的[1]。因此，種植、開發(fā)青蒿很有前景。另外，這種病能影響兒童生長和發(fā)盲，導(dǎo)致貧血和出生低體重兒、孕婦得婦科病和貧血等[2]。

青蒿入藥在《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等書中均有記載。1972年我國科學(xué)家在整理民間驗方及實踐的基礎(chǔ)上從青蒿中分離出這種活性物質(zhì)（青蒿素）。青蒿素類藥物是中國人自主研發(fā)的擁有知識產(chǎn)權(quán)的中藥藥物，其治療惡性瘧疾效果尤其顯著，世界衛(wèi)生組織己將其作為治療瘧疾的基本藥物。隨著對該類藥物藥理作用研究的不斷深人，證實此類藥均具有抗藥、抗孕、抗纖維化、抗血吸蟲、抗弓形蟲、抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗心律失常、抗菌素腫瘤細(xì)胞毒性、抗免疫、結(jié)核病潮熱、中暑、皮膚痛、蕁麻疹、脂溢性皮炎、滅蚊和解熱等作用[3]。此外，還有治療艾滋病、黑熱病、紅班狼瘡及白血病等病的作用[4]。近年來研究發(fā)現(xiàn)青蒿素對血癌和乳腺癌細(xì)胞具有高選擇性，是其他化學(xué)療法的100倍，而且青蒿素可以殺死癌細(xì)胞，但不傷害周圍健康細(xì)胞[5]。青蒿素類產(chǎn)業(yè)主要原料資源在中國，世界衛(wèi)生組織及聯(lián)合國兒基會對中國青蒿素類藥物需求量大，現(xiàn)有產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場需要。

青蒿素是一年生草本植物，為菊科艾屬植物黃花蒿。株高40-150cm以上，全生育期120d左右。喜濕潤、忌干旱、怕漬水，光照要求充足。青蒿素原料是武陵山區(qū)的青蒿草，該區(qū)域地理環(huán)境、氣候條件適合青蒿的生長，尤其是烏江流域中下流（秀山、酉陽、彭水、黔江、武隆、涪陵）地處武陵山區(qū)，擁有豐富的野生青蒿資源，全球青蒿供應(yīng)量80%來自重慶酉陽，世界衛(wèi)生組織2005年從酉陽購買了1億劑量的青蒿素類抗瘧藥?，F(xiàn)在，青蒿素用藥缺口每年為總需求的40-60%，估計填補(bǔ)全球青蒿種植的空缺需要15-20年[6]。因此，野生青蒿遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場需要，同時長期采伐會造成生態(tài)平衡失調(diào)，人工種植面積也較少，為解決供需矛盾，要把重慶市切實建成全球最大青蒿供應(yīng)基地，就應(yīng)該利用好烏江流域的地理環(huán)境優(yōu)勢，擴(kuò)大種植優(yōu)質(zhì)青蒿已迫在眉睫，這樣不但能解決青蒿素的國際市場的需求，也能保護(hù)野生資源和帶動地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展。青蒿素藥材分布廣泛，且類似品種較多，類型混雜，不同產(chǎn)地，不同生長期青蒿素含量差異較大，據(jù)測定，歐洲和美國青蒿中青莆素的含量在0.03%-0.22%之間[7]，中國和越南人工種植的青蒿中青蒿素含量平均在0.3%-0.8%之間，烏江流城含量最高（酉陽野生青蒿中青蒿素含量至今保持全國最高記錄0.9%-1.3%）[8]。為了更好、更充分地利用烏江流域獨有的地理環(huán)境和氣候條件，提高資源的利用率，增加經(jīng)濟(jì)效益，指導(dǎo)農(nóng)民正確種植、適時收割、合理制備青蒿葉末意義重大，同時還為烏江流域青蒿的質(zhì)量評價和進(jìn)一步加速開發(fā)該中藥資源提供科學(xué)依據(jù)。

一、試驗部分

1.監(jiān)測點選擇

以烏江流域中下游為主干，從上游至下游，按海撥從高至低的順序，選擇了秀山（平均種植海撥高度900m）、酉陽（平均種植海撥高度700m）、彭水（平均種植海撥高度600m）、武隆（平均種植海撥高度500m）、涪陵（平均種植海撥高度300m）五個區(qū)縣，較大型（0.6一1.33hm2）種植戶5戶作為監(jiān)測對象。

2.種植戶土質(zhì)要求

根據(jù)青蒿最佳生長條件要求，海撥在800m以下的灰棕紫泥土（五區(qū)的土質(zhì)有60%為灰棕紫泥土）均可種植。

3.品種選擇

選擇高質(zhì)、穩(wěn)產(chǎn)、耐旱、抗病、節(jié)肥、省力且在重慶大面積推廣的優(yōu)良青蒿品種（市購）

4.田間管理和試驗要求

將良種青蒿種子，統(tǒng)一發(fā)放給五區(qū)種植戶，由專職的農(nóng)技員根據(jù)青蒿的生長特性，對農(nóng)戶進(jìn)行統(tǒng)一規(guī)劃，統(tǒng)一管理。具體要求如下：

（1）播種時間：烏江沿岸海撥1000m以下區(qū)域，每年3月中旬期間均可播種，五個監(jiān)測區(qū)播種時間統(tǒng)一定為3月15-30日。

（2）幼苗假植：應(yīng)選擇澆水方便的土地，起廂種植。要求廂面積寬1·2m，假植規(guī)格株行距10一l5cm。假植后加強(qiáng)肥水管理，可用腐熟人糞尿或畝用復(fù)合肥5Kg沖糞水淋施，做到勤施薄施。大約假植18-20d左右（氣溫低時約需20-25d），當(dāng)植株生長到l0cm-l5cm時，即可移至土壤或大田種植。

（3）移栽地準(zhǔn)備：土壤經(jīng)深翻梨耙、碎土，每畝施腐熟農(nóng)家肥或土雜肥1000-1200Kg，磷肥25-30Kg作基肥，開溝起廂種植。起廂規(guī)格為：寬1.2m，溝寬0.4m，溝探0.2-0.5m，每廂種兩行，株行距為0.8X0.8m-

（4）適時移栽當(dāng)假植苗達(dá)到10-l5cm時進(jìn)行移栽，移栽時選擇陰天或睛天下午進(jìn)行。栽后淋足定根水。合理密植，畝植1000株左右。

（5）田間管埋：移栽后應(yīng)加強(qiáng)田間管理。做到科學(xué)施肥，合理排灌。可分三個階段施肥，第一個階段：移栽一個皇期左右輕施復(fù)合肥或農(nóng)家肥，畝用復(fù)合肥5-7K9或用0·3%的復(fù)合肥水淋施：第二階段：移栽15-20d，每畝開穴施復(fù)合肥l4K9左右或腐熟農(nóng)家肥，施肥后進(jìn)行復(fù)土。第三階段：移栽35-45d后，畝施25Kg復(fù)合肥或農(nóng)家肥，結(jié)合培土。大田種植要防漬水，在雨季注重排除漬水，干旱時要及時澆灌。

（6）病蟲害防治

①病害 青蒿主要病害是莖腐病。在多雨季節(jié)，如發(fā)生莖腐病，可用滅菌威或托布津防治。

②蟲害 青篙主要害蟲有蚜蟲，應(yīng)在其遷飛擴(kuò)散前噴藥，畝用40%樂果或20%速滅丁或蚜虱凈等噴霧防治。

5.監(jiān)測對象

五區(qū)人工種植的青蒿幼苗、返青苗、花蕾初期（老枝出現(xiàn)花蕾）、花蕾期（花蕾初期的第3d作為花蕾1期，以后每3d作為1個花蕾期）、成熟晚期（花蕾再生極少且有少許葉再泛黃）青蒿子葉，在對應(yīng)時期采集野生青篙同時進(jìn)行青蒿素的測定。

6.樣品采集和制各

每個監(jiān)測基地按五點法采集，野生青蒿隨機(jī)采集。取其子葉，在曬場曬干，打落其子葉，子葉繼續(xù)曬干至符合收購要求或取其子葉在800C的烤箱中殺青30min，隨后在400C的烤箱中烘烤至恒重。將干子葉粉碎過60目篩制成葉末，留作檢測用。

7.青篙素檢測

（1）樣品處理：精確稱取青蒿葉末約0·5-1·09g于燒杯中，加入50mL石油醚，振搖30min，用組織勻漿機(jī)以13500r/min勻漿3min，然后轉(zhuǎn)人G4垂容濾斗中進(jìn)行抽濾，并不斷用石油醚洗至無色，加大5OmL（20，20，10）2%氫氧化鈉溶液洗滌G4垂容濾斗中的內(nèi)容物，將收集的濾液在振蕩器上振搖5min，棄去下層濾液中的堿液后，以蒸餾水洗至中性。經(jīng)水洗后的提取液置于圓底燒瓶中以550C減壓蒸餾，得到青蒿素的浸膏，最后用95%乙醇溶解，定容至50m1待測，同時作試劑空白[9]。

（2）樣品測定：吸取樣品處理液2·0m1，補(bǔ)加95%乙醇至5·0mL，最后加入0·2%氫氧化鈉溶液至50mL，在550C的水浴中反應(yīng)30min后取出，冷至室溫。在L=l0mm，λ=292nm，以"o"管調(diào)零，測定吸光度值（A）。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：按試驗方法[10]進(jìn)行測定[10]，繪制青蒿素濃度對吸光度的曲線，其線性方程A=21.14CS-0.02048，r為0·9997，將樣品測得的吸光度值（A），按線性方程計算出青蒿葉末中青蒿素的含量（%）。

二、結(jié)果與討論

⒈四個監(jiān)測區(qū)，青篙不同生長時期，青篙素含量記錄

（1）不同海撥高度在250-950m五個監(jiān)測區(qū)，人工種植的青蒿，在不同生長時期，青蒿素含量（%）檢測記錄（見表1）

根據(jù)表1：作青蒿在整個生長過程中青蒿素含量分布圖（見圖1）胡不同海拔高度花蕾4期青蒿素含量分布圖（見圖2）。從圖2可知：青蒿最宜種植在海拔高度為700m左右。

（2）不同海撥高度在250-950m五個監(jiān)測區(qū)，野生青蒿，在不同生長時期，青蒿素含量（%）檢測記錄（見表2）

從表1和表2，我們發(fā)現(xiàn)：無論是人工種植還是野生青蒿，在它的整個生長過程中，以花蕾期青蒿素含量最高，尤其是在花蕾4期，青蒿素含量達(dá)到極至。

（3）選人工種植青蒿，用自然曬干和人為烘干兩種方法制作青蒿葉末，其有效成分保存情況的監(jiān)測記錄（以青蒿素計：%）（見表3）

從表3可知如果以人為烘干法測得的青蒿素為基質(zhì)，則自然曬干比人為烘千青蒿素?fù)p失將在6-30%之間。

三、結(jié)論

1.種植青蒿最好選擇在海撥高度為700m左右區(qū)域進(jìn)行種植。

2.青蒿宜花蕾初期計算在第15一18日4d內(nèi)收割完畢。

3.建議青蒿葉末制備方法仿照烤煙烘干法，這樣可以避免因空氣濕度過大或綿雨天造成不必要的損失，增加經(jīng)濟(jì)效益，同時提高青蒿有效成分的利用率。

4.通過該項目的研究，可以防止盲目收割野生青蒿而破壞生態(tài)平衡，導(dǎo)致資源枯竭。同時為武陵山區(qū)青莆的質(zhì)（下轉(zhuǎn)第157頁）量評價和進(jìn)一步加速開發(fā)該中藥資源提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 青蒿素市場研究報告·2005.

[2] 戰(zhàn)雅蓮·006WHO批準(zhǔn)用青蒿素治療非洲瘧疾[J].國外醫(yī)藥.植物藥分冊.2006，21（1）：70-21

[3] 鄭全芳，楊志剛，孫紅祥.青篙素及其衍生物藥理作用研究進(jìn)展[j].中國獸藥雜志.2006，4（1）：40-44.

[4] WuTs，etaI.New constituents and anti platelet aggregation and anti-HIVpincipies of Artemisia capillaries [J].BioorgMedChem，2001，9（1）：77.

[5] 陳立軍，靳秋月，于利人等·青篙素及其衍生物抗腫瘤研究進(jìn)展「J]·中草藥，2005，36（11），1754-1755

[6] 廣西青蒿（黃花篙）產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃.2005

[7] D.J·Charies，J.E.Sjmon，K.V.Wood，and P.Heinstein Gempiasm variation in artemisinin content of Artemisia annua using an aiternative method of naitemativemethodof出emisinina皿aIy5ifromcrudepIantextracts[J]·J·Mat·PIod·l000，5；（1），157一160.

[8] ChanK·L·，TeoC·K·H，TinadasaS，KahHayYuenSeleonofhj [J]·Plantamed，1995，61（3）：285-287

[9] 秦宗會，謝朝懷..組織勻漿法快速測定青篙素探討.中國衛(wèi)生檢驗雜志.2007

[10] 李中棟，周全，趙長文等.青篙素固體分散物的，備及體外溶出研究.中國藥學(xué)雜志