張仙土 付承林 陳靈斌 陳慧 林平 陳佳玉

[摘要] 目的 探討大棗多糖對(duì)S-180瘤細(xì)胞的殺傷性及應(yīng)用。 方法 將200只荷瘤BALB/c裸鼠按瘤體大小隨機(jī)分為對(duì)照組，低濃度組，中濃度組，高濃度組各50只，每日分別給予腹腔注射生理鹽水0.2 mL，大棗多糖0.05 g/kg，0.15 g/kg，0.25 g/kg。14 d后斷頸法處死裸鼠，對(duì)比四組的抑瘤率，腫瘤細(xì)胞生長周期時(shí)間，裸鼠生存時(shí)間和病理組織學(xué)觀察。 結(jié)果 大棗多糖濃度越高抑瘤率越高，腫瘤細(xì)胞生長周期時(shí)間越短，裸鼠生存時(shí)間越長。病理組織觀察可見明顯改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 大棗多糖對(duì)S-180瘤細(xì)胞具有一定的殺傷作用，為多糖治療骨髓瘤提供了理論依據(jù)，具有較大的科學(xué)價(jià)值和實(shí)用性。

[關(guān)鍵詞] 大棗多糖；S-180瘤細(xì)胞；裸鼠；殺傷性

[中圖分類號(hào)] R965[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-9701（2012）12-0020-02

大棗多糖是從植物大棗中提取的一種多糖，具有復(fù)雜多樣的生物活性，近來研究發(fā)現(xiàn)其抗腫瘤可能有直接和間接作用[1]。本研究通過研究大棗多糖對(duì)S-180瘤細(xì)胞的殺傷性作用，為臨床應(yīng)用多糖治療骨髓瘤提供理論依據(jù)，同時(shí)也為臨床提供一種治療骨髓瘤的新藥物，取得了一定的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 骨髓瘤的動(dòng)物模型建立

4~6周齡雄性BALB/c裸鼠（溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體重16~20 g，于裸鼠背部皮下注射S-180瘤細(xì)胞懸液約500 μL（含細(xì)胞數(shù)為1×107 個(gè)），至瘤體大約0.5 cm3時(shí)開始給藥。

1.2 分組與治療

荷瘤BALB/c裸鼠200只按瘤體大小隨機(jī)分四組，每組50只。按下述方案處理，14 d后斷頸法處死裸鼠。其中對(duì)照組給予生理鹽水每日0.2 mL，腹腔注射；低濃度組給予大棗多糖注射液（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字06022221）每日0.05 g/kg，腹腔注射；中濃度組給予大棗多糖注射液每日0.15 g/kg，腹腔注射；高濃度組給予大棗多糖注射液每日0.25 g/kg，腹腔注射。

1.3 觀察指標(biāo)[2]

①抑瘤率：給藥后每周測(cè)定瘤體長徑與短徑，計(jì)算瘤質(zhì)量（m=1/2×長徑×短徑2），并計(jì)算腫瘤生長抑制率（抑瘤率）=1-實(shí)驗(yàn)組瘤質(zhì)量/對(duì)照組瘤質(zhì)量×100%。②腫瘤細(xì)胞生長周期時(shí)間（ｔｃ）：ｔｃ＝[Ｉｇ（１＋Ｇ）/ｌｇ（ｍ２/ｍ１）］×ｔ，Ｇ為腫瘤生長組分，m2和m1為某組分中不同觀察時(shí)間的腫瘤質(zhì)量，t為觀察間隔時(shí)間。③裸鼠生存時(shí)間：指從接受治療到自然死亡的時(shí)間。④病理組織學(xué)觀察：包括大體標(biāo)本檢查及鏡檢，取腫瘤組織，10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片，HE 染色，光鏡下觀察，免疫組織化學(xué)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，不同組間比較采用F檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察指標(biāo)

大棗多糖濃度越高抑瘤率越高，腫瘤細(xì)胞生長周期時(shí)間越短，裸鼠生存時(shí)間越長，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。

2.2 病理組織學(xué)觀察

各組均有Caspase-3 m RNA、Caspase-8mRNA、ERCC-1和GST-π的表達(dá)，而且可見細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)邊集，部分細(xì)胞可見凋亡小體，出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞壞死，各組濃度越高病理學(xué)變化越明顯。

3 討論

骨髓瘤為中老年常見的一種血液系統(tǒng)惡性腫瘤，目前以化療為主，由于患者年齡較大，往往難以耐受大劑量化療藥物。目前，臨床上一直探索一些具有不同機(jī)制、療效肯定、副作用小的藥物。大棗多糖是從植物大棗中提取的一種多糖，其對(duì)S-180瘤細(xì)胞有直接和間接殺傷作用[3]。直接作用主要包括影響腫瘤細(xì)胞膜的生化特性、影響細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞途徑、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞代謝、直接抑制細(xì)胞增殖等途徑，而間接作用主要是增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的功能等。

本研究中大棗多糖濃度越高抑瘤率越高，腫瘤細(xì)胞生長周期時(shí)間越短，裸鼠生存時(shí)間越長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。腫瘤細(xì)胞通常具有很強(qiáng)的增殖能力，主要體現(xiàn)在S期的DNA復(fù)制旺盛、合成活躍。現(xiàn)有的抗腫瘤藥物有很多是影響細(xì)胞周期而發(fā)揮作用。以細(xì)胞周期過程中的各種調(diào)節(jié)因子為藥物作用靶點(diǎn)，研究開發(fā)新型的細(xì)胞周期調(diào)控藥物，也是當(dāng)前研究新型抗腫瘤藥物的重要方向。影響或調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的藥物可以抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞分化或?qū)е录?xì)胞死亡。也有學(xué)者認(rèn)為[4]CyclinB1、CyclinD1均為細(xì)胞周期蛋白，是細(xì)胞周期調(diào)控因子，與細(xì)胞癌變密切相關(guān)，通過對(duì)細(xì)胞周期的有序調(diào)控可以抑制腫瘤，其中G1/S和G2/M兩個(gè)檢查點(diǎn)是細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)鍵，以此判斷大棗多糖的生理作用。

Han等研究認(rèn)為[5]，影響或調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的藥物可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，從而誘導(dǎo)細(xì)胞分化或?qū)е录?xì)胞死亡。此外，Li等[6]研究亦發(fā)現(xiàn)具有S-180瘤細(xì)胞的裸鼠經(jīng)過治療后其細(xì)胞周期可大都停留在G0/G1期，即靜止或合成前期，從而提高抑瘤率和裸鼠生存時(shí)間。本研究中各組均有Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA、ERCC-1和GST-π的表達(dá)，而且可見細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)邊集，部分細(xì)胞可見凋亡小體，出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞壞死，且各組濃度越高，其病理學(xué)變化越明顯。

李穎博等認(rèn)為[7]，作為細(xì)胞凋亡中最關(guān)鍵的酶，Caspase-3mRNA、Caspase-8mRNA的活化可引起細(xì)胞不可逆凋亡，是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志。而GST-π作為一種與機(jī)體解毒功能相關(guān)的酶能有機(jī)的結(jié)合谷胱甘肽，在細(xì)胞分化、轉(zhuǎn)錄因子激活、DNA修復(fù)和保護(hù)細(xì)胞免受損害等方面起重要作用。ERCC-1在核苷酸切除修復(fù)（NER）系統(tǒng)中起著核酸內(nèi)切酶和損傷識(shí)別的雙重功能，其表達(dá)水平與NER系統(tǒng)的活性關(guān)系密切，是NER途徑一種重要酶。

上述病理組織的變化，均能進(jìn)一步證明大棗多糖對(duì)S-180瘤細(xì)胞生長分化起著積極的抑制作用，且濃度越高抑制作用越強(qiáng)。

總而言之，大棗多糖對(duì)S-180瘤細(xì)胞具有一定的殺傷作用，可為多糖治療骨髓瘤提供了理論依據(jù)，具有較大的科學(xué)價(jià)值和實(shí)用性，值得在臨床科研中推廣使用。

[參考文獻(xiàn)]

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[4]Yuan C，Pan X，Gong Y，et al. Effects of astragalus polysaccharides (APS) on the expression of immune response genes in head kidney，gill and spleen of the common carp，Cyprinus carpio L.[J]. Int Immunopharmacol，2008，8（1）：51-58.

[5]Han SB，Lee CW，Kang JS，et al. Acidic polysaccharidefrom Phellinus linteus inhibits melanoma cell metastasis by blocking cell adhesion and invasion[J]. Int Immunopharmacol，2006，6（4）：697-702.

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[7]李穎博，李宇華，王瑞，等. 靈芝多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞相互作用的影響[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào)，2008，24（2）：250-253.

（收稿日期：2011-12-06）