HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中連翹苷和連翹酯苷A的含量

蔡 穎

(南京市白下區(qū)建中中醫(yī)院，江蘇 南京 210004)

小兒肺熱咳喘口服液是由黃芩、連翹、金銀花、麻黃等十一味中藥組成，具有清熱解毒，宣肺化痰的功效。用于風(fēng)寒感冒，胸悶咳喘，支氣管炎等癥［1］，其主要有效成分為麻黃堿、偽麻黃堿、苦杏仁苷﹑黃芩苷﹑綠原酸和連翹苷、連翹酯苷A?，F(xiàn)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)有對(duì)其中麻黃堿、偽麻黃堿、苦杏仁苷、黃芩苷等成分的測(cè)定［1～4］，沒(méi)有連翹的含量研究。本文采用HPLC法同時(shí)測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中連翹苷和連翹酯苷A的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HP－1100高效液相色譜議(美國(guó) Agilent公司)，包括四元梯度，DAD紫外可見(jiàn)檢測(cè)器，Agilent Chem－Station色譜工作站(Agilent科技有限公司)，自動(dòng)進(jìn)樣器;Mettl ER220電子天平(美國(guó)，梅特勒公司)，SG1200H超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器廠(chǎng))，DL－1溶劑過(guò)濾器(天津市東康科技有限公司)。

1.2 試藥 連翹苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，編號(hào):110736－200629);連翹酯苷A對(duì)照品(上海詩(shī)丹德生物技術(shù)有限公司提供，純度98%編號(hào):11－091125);小兒肺熱咳喘口服液由黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司 提 供 (批 號(hào) 為:201103115、201104006、201106030、201108012、201110112、201111018)。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Phenomenex Lunas C18(4.6mm×250mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.2% 磷酸溶液梯度洗脫，流動(dòng)相A 0.2%磷酸溶液，流動(dòng)相B甲醇，梯度洗脫順序:0～12min 15% ～30%B，12～30min 30% ～40%B，30～40min 40% ～35%B，40～60min 50% ～37%B:流速 1.0mL·min－1;柱溫:30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm。

圖1 HPLC色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取連翹苷和連翹酯苷A對(duì)照品適量，用50%甲醇制成每1mL含連翹苷30.3 μg連翹酯苷A 1.98 μg的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取小兒肺熱咳喘口服液1.0mL置，50mL量瓶中精密加入50%甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 分別取對(duì)照品溶液，供試品溶液，按小兒肺熱咳喘口服液的處方比例和生產(chǎn)工藝制備成缺連翹的陰性供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明在連翹苷和連翹酯苷A相同的保留時(shí)間處基本無(wú)色譜峰。說(shuō)明陰性制劑對(duì)所測(cè)組分無(wú)干擾。

2.2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取各對(duì)照品溶液1、2、4、8、10、12、18μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值Y對(duì)對(duì)照品進(jìn)樣量X進(jìn)行處理，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程為:連翹苷 Y=5.1136 ×102X+1.4126，r=0.9995;連翹酯苷 A Y=4.1426 ×102X+6.3241，r=0.9996。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，連翹苷在 0.0303 ～0.5454 μg;連翹酯苷A在0.0198～0.3564 μg;的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次測(cè)定，結(jié)果連翹苷和連翹酯苷A的峰面積分別為 RSD 為1.03%(n=6)、0.7%(n=6)，表明精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件于0、2、4、6、8、12、24 h分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果連翹苷和連翹酯苷A峰面積RSD分別為1.66%、2.01%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品(201103115)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液各6份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算連翹苷和連翹酯苷A含量，RSD分別為1.04%、1.65%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品(批號(hào)為201104006)1.0mL，加入一定量的連翹苷 0.4586mg·mL－1和連翹酯苷A 0.2652mg·mL－1置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各平行操作6份，按2.2.2供試品制備方法制成供試品溶液，并按上述色譜條件進(jìn)行分別測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1、2。試驗(yàn)結(jié)果表明，該測(cè)定方法回收率良好。

2.2.9 樣品測(cè)定 取小兒肺熱咳喘口服液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按外標(biāo)法測(cè)定連翹苷和連翹酯苷A含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 連翹苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 連翹酯苷A加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，表明本試驗(yàn)方法用于小兒肺熱咳喘口服液中連翹苷和連翹酯苷A的含量測(cè)定，分離度好﹑重現(xiàn)性好，可以用于小兒肺熱咳喘口服液的質(zhì)量控制。

3.2 對(duì)供試品提取方法進(jìn)行了對(duì)比分析:①精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻;②精密量取本品2mL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，經(jīng)超聲處理(250 W，40 kHz)提取30min，冷卻至室溫。測(cè)定兩者峰面積，結(jié)果比較，無(wú)明顯差異?？紤]到方法的簡(jiǎn)單，可行性，故選用方法①。

［1］劉譯.RP－HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中黃芩苷的含量［J］.中國(guó)藥師，2008，11(10):1213 －1215.

［2］太成梅，那微，趙曉霞，等.HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量［J］，中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010，11(5):380 －383.

［3］張志根，宋劍峰.RP－HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中黃芩苷的含量［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2010，19(12):107－108.

［4］趙文明，承偉.RP－HPLC法同時(shí)測(cè)定小兒肺熱咳喘泡騰顆粒中鹽酸麻黃堿和苦杏仁苷的含量［J］.沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，27(6):474 －476.

［5］杜英峰.張?zhí)m桐.靳怡然，等.多波長(zhǎng)RP－HPLC法測(cè)定雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸和連翹苷［J］.中成藥，2009，31(9):1368 －1371.